清热解毒法在恶性肿瘤治疗中的临床应用

现代中医肿瘤学的癌毒病机理论提出,清热解毒法为治疗恶性肿瘤的抗癌解毒八法之一,可在恶性肿瘤治疗中广泛应用。清热解毒法治疗恶性肿瘤的临床应用需基于辨证、辨病、分期、辨体相结合的综合辨治模式。若肿瘤患者热毒证候明显,辨证应用清热解毒法无疑;若热毒不明显或无证可辨,结合现代肿瘤的病理本质特征,在不违背整体遣方用药原则下,可辨病应用清热解毒法以发挥抗癌祛毒之效。清热解毒法本质属于攻法,其辨证或辨病应用均应以患者正气强弱为考量因素,同时还需结合患者的肿瘤分期、体质因素等。辨证应用强调了清热解毒法运用于肿瘤热毒证的普遍性,辨病应用突破了清热解毒法仅用于宏观热毒证的局限性,分期应用体现了清热解毒法阶段性使用的精准性,辨体应用则体现了清热解毒法应用过程中的个体性。辨证、辨病、分期、辨体4种辨治模式当相互参照、综合运用,方可取得显效。治疗肿瘤常用的清热解毒药物有白花蛇舌草、半枝莲、重楼、天葵子、漏芦、山豆根等。

现代中医肿瘤学术思想述评

随着现代中医肿瘤学科的建立,中医药防治肿瘤取得了长足的发展与进步,涌现了一批学术思想与观点。其中,扶正治癌理论、从膜论治理论、带瘤生存理论、癌毒病机理论、固本清源理论、调气解毒理论是目前中医肿瘤领域较有代表性的学说。纵观中医肿瘤学界对于中医名家思想的研究,已经产生出不少成果,但将诸多医家思想同时进行讨论的研究,相对甚少。本文从学术内涵、临床应用两方面对上述创新性理论进行总结研究,为进一步指导中医肿瘤临床实践提供新思路。

仙连解毒方对结直肠癌湿热瘀毒证模型小鼠肠道细胞类型的影响

目的采用单细胞转录组测序技术探讨仙连解毒方治疗结直肠癌湿热瘀毒证的作用机制。方法30只雄性C57BL/6N小鼠随机分为对照组、模型组、仙连解毒方组,每组10只。模型组和仙连解毒方组小鼠采用高脂饮食与氧化偶氮甲烷(AOM)/葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导建立结直肠癌湿热瘀毒证模型,对照组给予正常饮食。3个循环的DSS饮水结束后,仙连解毒方组开始给予仙连解毒方12.9 g/kg灌胃,对照组及模型组给予等体积的生理盐水,每天1次,连续灌胃6天后停1天,连续给药16周。末次给药结束4 h后,取各组小鼠结直肠组织,HE染色观察小鼠结直肠的组织病理形态。取距肛门6 cm的远端结肠段2 cm,解离组织样本,分离单细胞悬液,提取RNA行qPCR扩增,进行单细胞转录组测序。采用CellRanger-v5.0.0进行数据质控,Seurat-v3.1.1软件包进行降维聚类分析、细胞类型鉴定,对差异基因行GO和KEGG富集分析。结果HE染色结果显示,空白组小鼠结肠腺体排列规则,细胞核位于基底部,呈扁平或立方状;模型组上皮细胞极性消失,呈巢状、筛孔状,中央见坏死,细胞核浆比增大,核染色深,核仁明显,核分裂现象显著;仙连解毒方组上述情况得到明显改善。单细胞转录组测序共捕获3组小鼠肠道细胞45480个,降维聚类将所有细胞归为20个细胞群,鉴定各细胞群标记基因,分析得出小鼠肠道细胞主要包括9种细胞类型:肠上皮细胞、B细胞、自然杀伤T细胞、天然淋巴细胞、干细胞、巨噬细胞、中性粒细胞、肥大细胞、成纤维细胞。仙连解毒方组较模型组小鼠肠道组织中肠上皮细胞占比上升,B细胞、自然杀伤T细胞、巨噬细胞、中性粒细胞占比下降。GO与KEGG富集分析显示,仙连解毒方对结直肠癌湿热瘀毒证的作用主要富集在免疫系统进程、抗原处理和呈递、适应性免疫反应、转运ATP合酶活性旋转机制等方面,信号通路主要涉及免疫系统信号、癌症相关通路、细胞增殖与死亡信号、能量代谢信号等。结论仙连解毒方调控结直肠癌湿热瘀毒证模型小鼠肠道组织中免疫细胞比例,抑制上皮细胞间质转化,可能是其治疗结直肠癌湿热瘀毒证的作用机制。

基于单细胞转录组测序探讨仙连解毒方对结直肠癌湿热瘀毒证模型小鼠肠道免疫细胞的影响

目的探讨仙连解毒方治疗结直肠癌湿热瘀毒证的可能作用机制。方法30只C57BL/6N小鼠随机分为正常组、模型组、仙连解毒方组,每组10只。模型组和仙连解毒方组小鼠采用高温高湿环境、高脂饮食与氧化偶氮甲烷/葡聚糖硫酸钠联合诱导建立结直肠癌湿热瘀毒证小鼠模型。造模成功后,仙连解毒方组给予仙连解毒方12.9 g/(kg·d)灌胃,正常组、模型组给予0.2 ml生理盐水灌胃,均每周6次,连续16周。给药期间每周统计疾病活动指数(DAI)评分,末次给药后处死小鼠,检测小鼠血清二胺氧化酶(DAO)、结直肠组织髓过氧化物酶(MPO)含量,取结肠组织进行单细胞转录组测序(scRNA-seq),采用SingleRv1.4.1,根据细胞表面标记基因,对肿瘤微环境(TME)中的免疫细胞进行细胞亚型鉴定,分析各组小鼠免疫细胞表达的差异基因的生物学功能和信号通路。结果仙连解毒方组给药第7周至第16周,DAI评分较模型组显著降低(P<0.01)。与正常组比较,模型组小鼠生存率显著降低,血清DAO、结直肠组织MPO水平显著升高(P<0.05或P<0.01);与模型组比较,仙连解毒方组小鼠生存率升高,血清DAO、结直肠组织MPO水平显著降低(P<0.05或P<0.01)。scRNA-seq分析结果显示,小鼠肠道T细胞可分为CD4^(+)T细胞、CD8^(+)T细胞、自然杀伤(NK)T细胞、γδT细胞4种亚型。与模型组比较,仙连解毒方组小鼠肠道组织中肠上皮细胞、成纤维细胞、红系细胞数量和占比升高,B细胞、T细胞、髓系细胞数量和占比降低;T细胞中激活CD4^(+)T细胞,效应CD4^(+)T细胞、记忆CD8^(+)T细胞、CD4^(+)T细胞、γδT细胞、NK T细胞数量和占比降低,细胞毒性CD8^(+)T细胞、耗竭CD8^(+)T细胞数量和占比升高,CD8^(+)T细胞、初始CD4^(+)T细胞、记忆CD4^(+)T细胞、调节性T细胞(Treg)、初始CD8^(+)T细胞数量降低,占比升高;髓系细胞中各类细胞数量皆下降,其中巨噬细胞与中性粒细胞占比降低,肥大细胞、树突状细胞占比升高。差异基因富集分析显示,仙连解毒方对CD8^(+)T细胞的调控功能主要富集在RNA聚合酶Ⅱ对转录的正向调控、转录因子激活蛋白-1(AP-1)复合物等,信号通路主要富集在破骨细胞分化、白细胞介素(IL-17)信号通路、核因子κB(NF-κB)信号通路、肿瘤坏死因子(TNF)信号通路等方面;对CD4^(+)T细胞的调控功能主要富集在伴侣辅因子依赖性蛋白质重折叠、p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)级联负调控等,信号通路主要富集在炎症性肠病、破骨细胞分化、细胞凋亡、TNF信号通路等方面;对髓系细胞的调控功能主要富集在炎症反应、中性粒细胞趋化性、免疫反应等,信号通路主要富集在IL-17信号通路、TNF信号通路、NF-κB信号通路、抗原提呈加工等方面。结论仙连解毒方可能通过调控TME中的CD8^(+)T细胞、CD4^(+)T细胞、γδT细胞、巨噬细胞、中性粒细胞等多种免疫细胞数量和比例,干预Th1/Th2细胞分化、Th17细胞分化、IL-17、TNF、NF-κB等信号通路,改善结直肠癌免疫、炎性微环境,从而治疗结直肠癌湿热瘀毒证。

基于转移前微环境探讨结直肠癌核心病机生物学基础

肿瘤转移是导致恶性肿瘤难治和病死的主要原因,转移前微环境(PMNs)的形成为肿瘤转移营造了适宜的环境,因此识别和靶向PMNs中的关键因子可有效抑制肿瘤转移。癌毒病机理论认为“湿热瘀毒,脾气亏虚”是结直肠癌发生转移的核心病机。通过探讨结直肠癌的核心病机与PMNs的相关性,阐明PMNs可能是结直肠癌核心病机的生物学基础,进一步揭示结直肠癌核心病机的科学内涵,为临床运用癌毒病机理论辨治肠癌转移提供科学依据。

祛风解毒法论治恶性肿瘤探析

在传承国医大师周仲瑛教授“癌毒”学说的基础上,程海波教授团队创建癌毒病机理论,提出“祛邪解毒、扶正固本”是恶性肿瘤的基本治疗原则。祛风解毒法作为抗癌解毒八法的主要治法之一,被广泛应用于肿瘤临床辨治。然而,目前对于祛风解毒法的学术内涵缺乏深入阐释,临床立法用药尚无理论指导。文章系统论述风毒的概念及致病特征,明确提出祛风解毒法的学术内涵,总结祛风解毒法的临床应用要点,推介祛风解毒法临证常用药物,以期推动祛风解毒法的临床应用,进一步提高中医药辨治肿瘤的临床疗效。