人羊膜上皮细胞对四氯化碳诱导小鼠肝损伤的定位修复

背景:人羊膜上皮细胞具有无致瘤性、来源丰富、容易获取、免疫原性低、无医学伦理限制等优点,很多优势是胚胎干细胞和诸多成体干细胞所不具备的,有望成为今后临床移植治疗的重要种子细胞。目的:观察并研究荧光染料羟基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺脂(5,6-carboxyfluorescein diacetate succinimidyl ester,CFSE)标记的人羊膜上皮细胞对四氯化碳诱导的小鼠肝损伤的定位修复情况。方法:使用酶消化法从人羊膜中分离得到人羊膜上皮细胞,观察细胞形态,人羊膜上皮细胞的鉴定采用免疫细胞化学法检测细胞角蛋白19的表达。用四氯化碳腹腔注射诱导小鼠肝损伤。将用CFSE标记的人羊膜上皮细胞通过尾静脉注射移植到肝损伤小鼠体内,细胞移植后7 d后检测小鼠组织病理学变化,30 d后检测肝功相关指标。结果与结论:①实验成功分离得到纯度较高的人羊膜上皮细胞;②免疫细胞化学检测显示人羊膜上皮细胞可表达上皮细胞标志角蛋白19;③冰冻切片免疫荧光显示人羊膜上皮细胞可以归巢到受损肝脏;④人羊膜上皮细胞移植后对肝损伤小鼠的肝功能、组织病理学改变都有明显修复作用; ⑤结果证实,人羊膜上皮细胞可有效改善肝组织的生理功能,为细胞定位移植治疗肝脏疾病的修复情况提供实验数据。

人羊膜上皮细胞的体外培养及诱导分化

人羊膜上皮细胞由外胚层发育而来,属于成体干细胞,具有来源广泛、免疫原性低、非致瘤性、不存在医学伦理道德限制等优点.研究目的:建立人羊膜上皮细胞的体外分离培养的方法,检测其向三胚层诱导分化培养潜能.在无菌条件下机械分离羊膜,使用胰蛋白酶分步消化法收集人羊膜上皮细胞,体外培养,观察其细胞形态与生长规律;并通过免疫细胞化学法,RTPCR及三胚层定向诱导等方法对其进行鉴定.结果:成功从人羊膜中分离得到纯度较高的人羊膜上皮细胞.免疫细胞化学法鉴定结果显示,分离到的羊膜上皮细胞内的角蛋白19呈阳性;RT-PCR鉴定干细胞标志基因REX1、Oct-4和Nanog,在mRNA水平均有表达;定向诱导条件下,人羊膜上皮细胞可向成脂、成神经和成肝样细胞分化.结论:人羊膜上皮细胞可在体外分离培养,具有干细胞特性,可以定向诱导分化成内胚层、中胚层、和三胚层三个胚层组织与细胞.

人羊膜间充质干细胞归巢至小鼠急性损伤肝组织及其致瘤性

将小鼠随机分为治疗组和对照组,按20μL/g的剂量腹腔注射10%CCl4溶液,每周2次,连续注射4周,建立小鼠急性肝损伤模型。建模后24h,治疗组尾静脉移植经Dir标记的人羊膜间充质干细胞0.2mL;对照组移植等量未经Dir标记的人羊膜间充质干细胞。使用小动物活体成像系统观察人羊膜间充质干细胞在小鼠体内分布。将NOD/SCID小鼠随机分为3组,试验组注射0.2 mL人羊膜间充质干细胞细胞悬液,阳性对照组注射0.2 mL Hep G2细胞悬液,阴性对照组只注射等量Matrigel和PBS的1∶1混合液。60d后脱颈处死小鼠,观察肿瘤形成情况并进行病理组织学检查。结果显示,活体成像试验发现,人羊膜间充质干细胞移植后2h,全身只有肝脏区域有荧光,人羊膜间充质干细胞移植后1d,肝脏及肺脏附近荧光信号达到最强,移植3d,肺部强荧光消失,肝部附近强荧光仍存在,移植后7~30d,全身各处荧光信号消失,但肝部荧光信号持续存在。体内致瘤试验发现,阳性对照组小鼠有肿瘤形成,而注射人羊膜间充质干细胞的试验组小鼠和阴性对照组小鼠均未观察到肿瘤形成。结果表明,人羊膜间充质干细胞尾静脉移植入急性肝损伤小鼠,可以成功归巢至肝脏并长期定植存在;人羊膜间充质干细胞在体内没有致瘤性,具有一定的临床安全性。

17β-雌二醇对绵羊输卵管上皮细胞Ghrelin表达量的影响

为了研究17β-雌二醇对Ghrelin表达量的影响,根据绵羊Ghrelin基因mRNA的保守序列设计特异性引物,通过体外培养绵羊输卵管上皮细胞,提取经17β-雌二醇处理的绵羊输卵管上皮细胞总RNA,并反转录成cDNA,以β-actin基因为内参,采用SYBR GreenⅠ染料法进行实时荧光定量PCR检测。结果显示,绵羊输卵管上皮细胞经17β-雌二醇处理后,Ghrelin基因的表达量有显著性增加,在处理后第6小时表达量达到最高。结论,17β-雌二醇对绵羊输卵管上皮细胞表达Ghrelin有显著的促进作用,这为后续试验研究打下了良好基础。

犬间充质干细胞的研究进展和临床应用

间充质干细胞是一种具有自我复制能力和多向分化潜能的多能干细胞,在兽医临床逐渐成为研究的热点。犬是一种理想的实验动物模型,经常被用于新药或治疗方法的疗效与安全性测试。犬间充质干细胞在犬病治疗上的应用将有助于人类疾病的研究,而目前犬间充质干细胞的分离方法、培养条件、纯化技术、鉴定方法等基础性研究仍较少,临床应用的标准还没有建立,治疗疾病的范围仅限于骨与软骨损伤的修复和炎症性疾病等。为此,综述犬间充质干细胞的来源、鉴定方法、临床应用和存在的问题,以期为相关研究人员提供参考。