新基因pp3774的亚细胞定位以及在肝癌细胞系和组织中的表达谱研究

目的探讨新基因pp3774在肝癌细胞系、人肝癌及癌旁肝、肝硬化以及正常肝组织中的表达差异及其生物学功能。方法脂质体转染-荧光观察pp3774-GFP融合蛋白的亚细胞定位；合成新基因pp3774特异性多肽,制备兔源性多克隆抗体；用RT-PCR、蛋白印迹、免疫细胞化学及免疫组化方法检测pp3774基因在7个肝癌细胞系及214例肝细胞癌、18例肝硬化及10例正常肝组织中的表达差异。流式细胞术检测转染pp3774基因的SMMC-7721细胞的凋亡率。结果 pp3774蛋白主要定位于细胞质(内质网为主)；RT-PCR检测结果表明pp3774 mRNA在肝癌细胞系BEL-7402、Huh-7、MHCC-97L,及HepG2中高表达,SMMC-7721、MHCC-LM3及人永生化肝细胞系L-02中度表达,而在Hep3B中低表达；肝癌及癌旁组织中pp3774mRNA的表达表现为癌旁高于癌(P<0．05)；免疫组化结果显示pp3774蛋白表达程度依次为正常肝≥肝硬化≥癌旁肝组织>肝癌。转染pp3774基因的SMMC-7721细胞的凋亡发生率高于对照组约10％。结论 pp3774基因是一个具有抑制肝癌细胞生长功能的新基因。

新基因pp3774抑制NIH/3T3细胞生长机制初探

目的探讨新基因pp3774在NIH／3T3细胞生长调节中的可能机制。方法用pp3774-HA融合表达质粒通过脂质体法转染NIH／3T3细胞,G418筛选,建立稳定细胞系,并用RT-PCR检测pp3774在NIH／3T3细胞中mRNA的表达状况；利用Atlas cDNA array分析pp3774的异位表达对NIH／3T3细胞基因表达谱的影响；用RT-PCR方法验证Atlas cDNA array杂交结果。结果 pp3774超表达可以明显下调cyclin D1、cyclin E、转录因子Dpl等基因的表达,同时可上调P13K p85α、FGF7、MMP-2等基因的表达。上述基因表达的改变可能通过调控细胞周期实现pp3774对NIH／3T3细胞的生长抑制。结论新基因pp3774抑制NIH／3T3细胞生长可能与pp3774基因下调cyclin D1、cyclin E、转录因子Dpl的表达有关。

基因组印记及相关疾病

基因组印记是一种非孟德尔的遗传规律 ,是指不同亲本来源的一对等位基因之间存在功能上的差异 ,这种差异是在长期进化中形成的 ,对于哺乳动物的正常发育起着至关重要的作用。印记基因的形成和表达存在一复杂的调控机制 ,普遍认为与甲基化有关 ,并受多种因素的影响。正是由于印记是正常发育必不可少的调控机制 ,印记行为的异常必然引起多种相关疾病 ,特别是印记异常可作为一种新的致瘤机制与肿瘤的发生发展关系密切。

新基因CT120在肺癌组织中的表达及其对细胞生长的影响

背景与目的:基因CT120是我们实验室从染色体17p13.3位点获得的一个细胞膜相关新基因,mRNA水平检测结果表明该基因在人正常肺组织中不表达,但在人肺癌细胞系SPC-A-1中高表达。本研究进一步从蛋白水平研究CT120在肺癌及癌旁组织中的差异表达及CT120异位表达(ectopicexpression)与过表达(overexpression)对细胞生长的影响。方法:用生物信息学方法设计15肽,合成并偶联到大分子载体KLH上制成人工免疫原,制备鸡抗CT120多肽抗体;通过Westernblotting方法检测CT120在不同肿瘤细胞系中的表达;通过免疫组织化学技术比较CT120在肺癌及癌旁组织中的差异表达;通过集落形成试验研究CT120异位表达对NIH/3T3细胞生长的影响;通过生长曲线及裸鼠成瘤试验研究CT120过表达对A549细胞生长的影响。结果:获得有效的鸡抗CT120抗体(IgY);CT120蛋白在不同肿瘤细胞系中表达程度不同,并在不同类型的肺癌组织中高表达;CT120基因异位表达显著促进NIH/3T3细胞的生长;同时CT120过表达对A549细胞在体内体外的生长有促进作用。结论:基因CT120与肺癌的发生发展有关,是一个人肺癌相关新基因。

IFN-α和TGF-β1对卵巢癌细胞SKOV3端粒酶活性的影响

目的 观察IFN α和TGF β1对卵巢癌细胞系SKOV3端粒酶活性和凋亡的影响 ,探讨它们在肿瘤治疗中的作用机制。方法 用IFN α和TGF β1分别处理SKOV3细胞 ,然后采用端粒酶PCRELISA方法检测不同处理时间细胞的端粒酶活性表达 ,同时利用流式细胞仪观察处理前后SKOV3细胞的凋亡情况。用裸鼠体内成瘤实验及免疫组化 ,检测转染TGF β1基因对SKOV3细胞生长及端粒酶活性的影响。结果 IFN α对SKOV3细胞生长有抑制作用 ,可明显下调SKOV3细胞端粒酶活性 ;而TGF β1作用则相反 ,在体内外对SKOV3细胞生长均有促进作用 ,可明显上调SKOV3细胞端粒酶活性 ;IFN α和TGF β1均不诱导SKOV3细胞发生凋亡。结论 抑制端粒酶活性是IFN α抗卵巢癌治疗的一个重要机制 ;TGF β1在体内外对SKOV3细胞生长均有促进作用。

肿瘤相关新基因pp4519在肺癌中的表达差异及初步功能研究

目的 探讨肿瘤相关新基因 pp4 5 19在肺癌细胞系、人肺癌及癌旁组织中表达差异及其初步生物学功能。 方法 合成肿瘤相关新基因pp4 5 19特异性多肽 ,免疫家兔制备兔源性多克隆抗体 ;从体外细胞集落形成试验 ,生长曲线 ,裸鼠体内成瘤试验 ,半定量RT PCR ,蛋白印迹 ,免疫细胞化学及免疫组化检测 pp4 5 19基因的表达差异 ,以及转染肺癌细胞系的细胞凋亡检测等方法研究 pp4 5 19基因对体内外细胞生长和生物学功能的影响。 结果 SPC A1肺癌细胞系的体外集落形成试验表明 ,pp4 5 19基因转染组集落形成数明显少于空载体组 (P <0 .0 5 ) ;转染 pp4 5 19基因的肺癌细胞系的裸鼠体内成瘤试验结果表明该基因对SPC A1细胞系的成瘤有明显抑制作用 (P <0 .0 1) ;瞬时转染细胞的流式细胞凋亡检测结果表明该基因具有促进SPC A1细胞凋亡的作用 ;半定量RT PCR ,蛋白印迹检测结果表明肺癌及癌旁组织中pp4 5 19mRNA和蛋白表达无明显差异(P >0 .0 5 ) ,但免疫组化结果显示PP4 5 19在人肺癌癌旁组织中的表达略高于肺癌。结论 pp4 5

p16基因甲基化状态与散发性大肠癌的相关性研究

为探讨p1 6基因甲基化状态与散发性大肠癌发生发展的关系 ,用甲基化特异性的聚合酶链反应 (methylati omspecificPCR ,MSP)结合测序检测散发性大肠癌及相应癌旁组织p1 6基因甲基化状态。研究发现p1 6基因在散发性大肠癌中甲基化率为 2 8 9% (1 3 4 5 ) ,有 8例癌及癌旁组织都发生了甲基化 ;有淋巴结及远处转移的甲基化率为5 0 % (8 1 6 ) ,高于无转移的甲基化率 2 0 8(5 2 4 ) (P <0 0 5 )。p1 6基因高甲基化是散发性大肠癌中常见的分子改变之一 ,大肠癌中p1

ANGPTL4基因及缺失突变体对肝癌细胞生长的影响

目的:探讨ANGPTL4基因及其缺失突变体对肝癌细胞SMMC-7721生长的影响。方法:构建ANGPTL4基因全长及其功能结构域缺失突变体的融合表达载体,即ANGPTL4-GFP-N1、ANGPTL4-del1-GFP-N1、ANGPTL4-del2-GFP-N1、ANGPTL4-del3-GFP-N1,脂质体法将EGFP-N1空载体、ANGPTL4基因及其缺失突变体分别转染肝癌细胞SMMC-7721,G418筛选,建立稳定细胞系,用MTT试验法、细胞集落形成试验检测细胞体外生长活性和增殖能力;流式细胞仪检测ANGPTL4基因对细胞凋亡的影响;裸鼠移植瘤试验检测转染细胞的体内成瘤特性。结果:ANGPTL4基因及其缺失突变体体外对肝癌细胞SMMC-7721的生长、集落形成具有明显的抑制作用(均为P<0.01);ANGPTL4全长基因及其缺失突变体ANGPTL4-del1-GFP-N1和ANGPTL4-del2-GFP-N1均对SMMC-7721细胞体内成瘤有明显抑制作用(均为P<0.01)。但转染ANGPTL4全长基因及其缺失突变体的SMMC-7721细胞的细胞凋亡发生率与转染空载体组相比没有明显差别(均为P>0.05)。结论:ANGPTL4基因及其缺失突变体对肝癌SMMC-7721细胞体内、外生长均具有明显抑制作用,但该抑制作用不是通过促进细胞凋亡实现的。

采用铸轧法生产3004铝合金深冲板坯

分析了铸轧法生产的3004铝合金的内部组织,解释了3004铝合金板在进行深冲时产生开裂的原因,通过不同试验方案,提出了提高3004铝合金板材的力学性能,达到很好的深冲效果的具体措施。

匈牙利文博见闻

今年三月,我们随陕西省文物局兵马俑赴匈展览团访问匈牙利,前后半月。在匈期间,除参加秦始皇兵马俑展览开幕仪式等工作外,还参观布达佩斯和热拉州等地许多博物馆和考古工地,并同匈牙利国家文物局、国家文物保护局等单位进行了多次座谈。通过参观、座谈,匈牙利的博物馆和文物保护管理工作给我们留下了深刻印象,他们的一些作法和经验值得我们借鉴。一、博物馆数量多、种类全。

大肠癌中胰岛素样生长因子2基因的印迹状态和表达

目的 研究胰岛素样生长因子 2 (insulin- like growth factor2 ,IGF2 )基因的印迹状态和表达与大肠癌的关系 ,为研究大肠癌的发生机理提供线索。方法 用逆转录 -聚合酶链反应半定量检测 IGF2的表达量 ,比较其在大肠癌及癌旁组织中有无差异 ,用限制性片段长度多态检测 IGF2的印迹状态 ,分析印迹状态、表达量与大肠癌的关系。结果 82 .4 % (2 8/ 34)大肠癌有 IGF2的表达增加 ,IGF2的表达量在肿瘤组织与癌旁组织中差异有显著性 (P<0 .0 1,t=3.0 1)。IGF2在 87.5 % (14 / 16 )大肠癌组织中发生了印迹丢失 ,但其相对应的癌旁组织也有 71.4 % (10 / 14 )存在 IGF2的印迹丢失。结论 IGF2的表达增加是大肠癌发生的相关因素 ,IGF2的印迹丢失可能是大肠癌发生的前期表现。