黑米与欧洲越橘花色苷对小鼠体质量及脏器指数的影响比较

目的比较黑米与欧洲越橘的花色苷对小鼠体质量及脏器指数的影响差异。方法采用灌胃方式给小鼠灌服高、中、低剂量黑米花色苷与欧洲越橘花色苷水溶液,观察小鼠毛色、饮食、日常行为及活动状况,并比较两种花色苷对小鼠体质量及脏器指数的影响。结果非对照组小鼠毛色光滑、日常饮食、排便及活动状况与空白对照组小鼠无明显差异;非对照组小鼠体质量均呈稳定增长趋势,但各组间比较无显著差异(P> 0. 05);与空白对照组相比,中、高剂量黑米花色苷与欧洲越橘花色苷均能显著提高小鼠胸腺指数(P <0. 05),但同剂量黑米花色苷与欧洲越橘花色苷组小鼠比较无显著差异(P> 0. 05);各组小鼠脾脏、肾脏、肝脏、心脏等脏器指数比较无显著差异(P> 0. 05)。结论黑米与欧洲越橘的花色苷均能提高小鼠免疫系统功能,且对小鼠其他脏器无毒副作用。黑米在我国种植广泛,价格低廉,相比欧洲越橘,黑米(黑米花色苷)具有更高的市场开发和应用潜力。

幽门螺杆菌对GES-1细胞自噬及凋亡的影响

目的研究幽门螺杆菌(Hp)对胃上皮细胞GES-1自噬与凋亡的影响。方法Hp与自噬抑制剂3-MA、广谱凋亡抑制剂Z-VAD-FMK处理后的GES-1细胞共培养,流式细胞术检测细胞凋亡情况,Western blot检测LC3B-Ⅱ、Caspase-3及PARP蛋白的表达。结果3-MA处理后,与空白对照组相比,Hp组LC3B-Ⅱ蛋白相对表达量显著增高(t=7.54,P<0.01);3-MA+Hp组与Hp组相比,LC3B-Ⅱ蛋白相对表达量显著降低(t=-3.24,P<0.05);与空白对照组相比,Hp组、3-MA组GES-1细胞凋亡率均显著增加(t值分别为-9.71和-3.25,P<0.01或P<0.05)。Z-VAD-FMK处理后,与空白对照组相比,Hp组GES-1细胞凋亡率显著增加,(t=-9.29,P<0.01);Hp+Z-VAD-FMK组较Hp组GES-1细胞凋亡率显著下降(t=-8.47,P<0.01);与空白对照组相比,Hp组、Z-VAD-FMK组的LC3B-Ⅱ蛋白相对表达量均显著增加(t值分别为-12.98和-11.28,均P<0.01)。3-MA与Z-VAD-FMK共处理后,3-MA+Hp+Z-VAD-FMK组较3-MA+Z-VAD-FMK组和Hp+Z-VAD-FMK组的GES-1细胞凋亡率显著增加(t值分别为-4.91和-9.64,P<0.05或P<0.01);3-MA+Hp+Z-VAD-FMK组与3-MA+Z-VAD-FMK组相比,Caspase-3蛋白相对表达量显著增加,PARP蛋白相对表达量显著下降(t值分别为-5.16和3.02,均P<0.05);3-MA+Hp+Z-VAD-FMK组较Hp+Z-VAD-FMK组LC3B-Ⅱ蛋白相对表达量显著下降(t=4.63,P<0.05)。结论幽门螺杆菌既能上调GES-1细胞自噬也能诱导其凋亡,并通过增加Caspase-3表达的同时降低PARP的表达以增强自噬抑制引起的细胞凋亡。而在抑制凋亡后,幽门螺杆菌可能诱导GES-1细胞发生自噬性死亡。

整合素β1通过ILK/FAK/F-actin通路影响幽门螺杆菌诱导的GES-1细胞自噬的研究

目的观察整合素β1对ILK/FAK/F-actin通路的调节作用,分析其对幽门螺杆菌(Hp)诱导GES-1细胞自噬的影响。方法利用siRNA沉默GES-1细胞整合素β1的表达后与幽门螺杆菌共培养6 h,Western blot检测ILK的表达。以ILK特异性抑制剂Cpd22抑制细胞ILK的表达后与幽门螺杆菌共培养6 h,Western blot检测LC3B、p62、FAK、Paxillin的表达;制备细胞爬片,以iFluor-594标记的鬼笔环肽对F-actin进行染色,观察细胞形态。结果沉默整合素β1后,空白组、Hp组、沉默组、阴性对照组、沉默+Hp组、阴性对照+Hp组ILK相对表达量分别为1.012±0.073、0.637±0.216、0.727±0.173、1.173±0.177、0.712±0.160、0.983±0.119,与空白组相比,Hp组ILK的相对表达量降低(t=3.288,P<0.05),沉默组较阴性对照组,沉默+Hp组较阴性对照+Hp组ILK相对表达量均显著降低(t值分别为-4.420和-3.238,均P<0.01)。抑制ILK表达后,空白组、Cpd22组、Hp组、Cpd22+Hp组LC3B的相对表达量分别为0.437±0.064、0.808±0.116、0.812±0.130、1.247±0.201,p62相对表达量分别为0.904±0.141、1.121±0.105、1.392±0.110、0.960±0.103,与空白组相比,Cpd22和Hp组细胞内LC3B及p62相对表达量均显著增加(t值分别为-4.838、-4.479、-3.269、3.313,均P<0.01),Cpd22+Hp组较Hp组细胞LC3B的相对表达量增高(t=-3.147,P<0.05),p62相对表达量降低(t=2.907,P<0.05)。Cpd22组FAK、Paxillin相对表达量较空白组均增加(t值分别为-2.303、-3.460,均P<0.05),Cpd22+Hp组FAK、Paxillin相对表达量较Hp组均降低(t值分别为2.446、-2.648,P<0.05),Cpd22抑制ILK后感染Hp,细胞F-actin染色呈现明显杂乱碎丝状。结论整合素β1通过上调ILK的表达抑制幽门螺杆菌诱导的GES-1细胞自噬,其机制可能与FAK/Paxillin/F-actin通路有关。

小鼠胃类器官培养中真菌污染的鉴定与控制

目的探讨小鼠胃类器官培养过程中污染真菌的种类及其控制措施。方法利用小鼠胃成体干细胞培养胃类器官;分离小鼠胃类器官培养过程中产生的污染物,革兰染色观察镜下形态;将污染物分离培养,并进行真菌ITS基因测序分析;梯度浓度试验探究可抑制污染物的药物及最适浓度。结果小鼠胃类器官培养过程中的污染物为出芽短梗霉菌;500μg/L的两性霉素B可有效抑制污染的出芽短梗霉菌;控制真菌污染后成功构建小鼠胃类器官,第9 d时检测类器官仍具有活性。结论出芽短梗霉菌可引起小鼠胃类器官培养过程中的真菌污染,通过添加两性霉素B控制真菌污染可成功构建小鼠胃类器官。

HK2对幽门螺杆菌诱导胃上皮细胞GES-1自噬的影响

目的探讨HK2在幽门螺杆菌诱导胃上皮细胞GES-1自噬中的作用。方法实验分为空白组、Hp组、沉默组、阴性对照组、沉默+Hp组和阴性对照+Hp组,小RNA干扰GES-1细胞的HK2表达,并与幽门螺杆菌共培养6h后Western blot检测LC3B-Ⅱ、p62水平,荧光酶标仪检测ROS的表达水平。结果空白组、Hp组、沉默组、阴性对照组、沉默+Hp组、阴性对照+Hp组LC3B-Ⅱ蛋白相对表达量分别为0.74±0.28、1.40±0.76、1.11±0.74、1.59±0.14、1.65±0.98、1.25±0.14。其中Hp组与空白组比较差异有统计学意义(t=-4.024,P<0.05);沉默组与阴性对照组比较差异有统计学意义(t=-5.109,P<0.05);沉默+Hp组与阴性对照+Hp组比较差异有统计学意义(t=4.042,P<0.05)。空白组、Hp组、沉默组、阴性对照组、沉默+Hp组、阴性对照+Hp组ROS荧光值分别为409.67±4.16、556.33±10.02、327.33±9.81、219.00±25.71、386.00±19.16、174.33±2.52。Hp组与空白组、沉默组与阴性对照组、沉默+Hp组与阴性对照+Hp组比较差异均有统计学意义(t值分别为-23.419、6.818、18.974,P<0.05)。结论沉默HK2表达能增强幽门螺杆菌诱导胃上皮细胞GES-1自噬,其机制可能与HK2介导的ROS的表达有关。