脂肪组织来源干细胞复合胶原构建组织工程皮肤修复皮肤缺损

目的:探讨脂肪组织来源干细胞(ADSC)作为皮肤组织工程种子细胞修复皮肤缺损的可能性。方法:采用胶原酶消化SD大鼠脂肪组织,经体外扩增后接种于胶原凝胶构建组织工程活性皮肤替代物。15只SD大鼠随机分成3组:ADSC复合胶原组织工程活性皮肤替代物实验组、单纯胶原移植组和空白对照组。将各组相应材料分别移植于SD大鼠背部皮肤缺损处,比较观察创面修复效果。结果:ADSC复合胶原实验组、单纯胶原移植组和空白对照组创面愈合时间分别为:(14.3±1.7),(16.9±2.5)和(21.2±4.2)d,差异有显著性意义(P<0.05)。组织学观察显示,ADSC复合胶原实验组成纤维细胞、微血管、胶原纤维均较单纯胶原移植组和空白对照组明显增多。结论:ADSC复合胶原构建的组织工程活性皮肤替代物移植后可加速新生血管形成、促进创面修复。提示以ADSCs作为种子细胞复合胶原构建的组织工程皮肤可用于皮肤缺损的修复治疗。

骨髓间充质干细胞复合组织工程化脱细胞真皮基质构建组织工程皮肤

目的:体外培养扩增SD大鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs),复合组织工程化脱细胞真皮基质构建组织工程皮肤,为进一步临床应用奠定基础。方法:将SD大鼠骨髓间充质干细胞进行体外培养扩增后,以生长状态良好的骨髓间充质干细胞接种于制备好的组织工程化脱细胞真皮支架上,进行体外联合培养,构建组织工程皮肤。观察细胞生长情况及组织工程皮肤结构。结果:体外培养的SD大鼠骨髓间充质干细胞生长良好,传代扩增容易,组织工程化脱细胞真皮基质去细胞完全,骨髓间充质干细胞在脱细胞真皮基质中生长良好,可体外构建组织工程皮肤。结论:利用体外扩增培养的骨髓间充质干细胞及制备的组织工程化脱细胞真皮基质可以体外联合构建组织工程皮肤。

改良消蚀法制备脱细胞真皮基质微粒及其生物相容性评价

目的:利用改良消蚀法制备一种新型脱细胞真皮基质(Acellular dermal matrix,ADM)微粒,并对其相容性加以评价,为组织工程微粒皮肤的制备奠定研究基础。方法:应用机械法切除猪真皮乳头层,结合消蚀法和冻融法除去网状真皮中的所有细胞制备成ADM,将ADM搅碎成颗粒状,对其做细胞毒性实验和皮下埋藏实验检验其相容性。结果:该方法制备的ADM微粒韧性好,细胞去除完全,胶原三维稍松散但结构完整,无基底膜和乳头层。细胞毒性实验显示其基本无毒性,成纤维细胞在ADM微粒上增殖良好,皮下埋藏试验未见明显排异反应,ADM微粒能诱导血管和成纤维细胞长入。结论:用改良消蚀法制备的ADM微粒抗原性低、相容性好,可以作为组织工程微粒皮肤的支架和填充材料。

组织工程微粒皮肤的构建及其性能研究

目的探索利用人成纤维细胞和York猪脱细胞真皮基质(ADM)微粒复合构建组织工程微粒皮肤的可行性并对其进行初步研究。方法体外培养取自胎背的人成纤维细胞,用PKH26标记,将细胞与ADM微粒复合构建微粒皮肤,用荧光显微镜观察、电镜观察和MTT法检测组织工程微粒皮肤的性能。结果脱细胞真皮基质微粒均匀柔软,弹性、韧性好,三维结构完整且排列规则。细胞与ADM微粒的复合情况良好,2h后开始黏附,2d后增殖明显,10d增殖达到高峰;7d时取材,HE和SEM显示成纤维细胞在ADM微粒表面成层黏附,并分泌大量基质;细胞生长良好。结论利用人成纤维细胞和York猪的ADM微粒可以构建具有活性的组织工程微粒皮肤。

大鼠胎儿表皮干细胞的分离鉴定和体内分化

目的探索一种简单而又高效的分离大鼠胎儿表皮干细胞方法,以及观察其在体内环境中的分化潜能。方法采集ED14、ED16、ED18及ED20不同发育阶段的SD大鼠胎儿皮肤,HE染色观察其结构。鼠尾胶原快速黏附法筛选胎鼠表皮细胞,在无血清培养基(K-SFM)中进行培养。免疫组织化学方法检测CK-19和1β-整合素表达情况。同时,也对细胞周期和细胞增殖能力进行检验。经荧光染料(PKH26)标记过的胎鼠表皮干细胞与多孔凝胶海绵结合,然后植入大鼠肾被膜下进行诱导分化。结果在ED18之前皮肤表皮和真皮尚未充分完成分化。使用快速黏附法能够有效的从ED18胎鼠皮肤分离到表皮干细胞。获得的细胞CK19和1β整合素呈阳性表达,细胞周期分析显示,细胞呈慢周期性,移植体在肾被膜下分化并展现典型的表皮样结构。结论表皮干细胞存在于早期发育皮肤中,但在ED18才能使用快速黏附法分离到表皮干细胞。此时的胎鼠表皮干细胞具有向表皮分化的能力。

角膜基质脱细胞处理与相容性实验研究

目的寻找有效适宜的脱细胞方法对猪角膜进行处理,制备角膜生物支架材料。方法利用胰酶和胶原酶消化结合液氮冻融的方法对猪角膜基质进行处理,60Co消毒,冻干保存。经组织学观察、细胞培养附和与动物移植检验其生物特性。结果获得的脱细胞角膜基质,显微结构观察显示板层结构完整,胶原纤维间组织结构疏松,未见细胞残留,整个基质成网状结构,在上皮面保存有完整连续的基底膜。细胞培养附和实验观察到种子细胞可以在基质上良好生长。动物移植实验未见明显的炎症反应与排斥。结论经该法脱细胞处理后得到的角膜基质无细胞毒性,组织相容性好,可以成为适宜的组织工程支架材料。

中医治疗慢性心力衰竭合并抑郁的临床研究进展

慢性心力衰竭是心血管疾病最主要的死因,也是中国乃至世界重大的公共健康问题,心力衰竭伴抑郁的发病率很高,需要及时发现伴有心理疾病的心力衰竭患者,并进行针对性的干预,以减少对疾病转归与预后的不良影响。中医对抑郁这类情志疾病有着深刻的认识与多种治疗手段,于内可用汤剂以五脏治心,于外可用五音疗法、针灸、传统功法、穴位贴敷外治调心。通过对近年慢性心力衰竭合并抑郁的中医疗法进行综述,以期为临床治疗慢性心力衰竭合并抑郁提供多种思路与手段。

椎管内肿瘤误诊96例分析

椎管内肿瘤是脊柱神经系统比较常见的疾病,原发性椎管内肿瘤每年每10万人的发生率在0.9～2.5人之间,回顾分析我科近6年的相关临床病例,并查阅文献资料,发现虽然专家早已经呼吁重视椎管内肿瘤早期诊断,但是目前早期误诊率仍然特别高,我科从2002年-2008年共收治并最终手术证实椎管内肿瘤患者120例,现将其归纳总结如下.……

肥大细胞及P物质与经络的相关研究

通过阐述肥大细胞及P物质在机体疾患状态时敏化腧穴处和针灸腧穴后局部组织之间的变化及其联系,并结合经络感传现象,探讨肥大细胞及P物质与经络的关系。并推测肥大细胞与P物质对经络现象的影响,以此协助明确经络感传机制的研究,以期提高临床治疗手段。

浅谈督脉阳气最盛的五穴

督脉为"阳气之海",总督一身诸阳。百会、大椎、至阳、命门、腰阳关乃督脉上阳气最盛的五个穴位,能平衡全身阴阳,调节全身气血。根据在督脉上的位置分布,此五腧穴在其各自的领域有着不可取代的功能和作用。临床上百会、大椎、命门的应用广泛,但对至阳和腰阳关却没那么重视。本文通过查阅相关文献和结合现代研究,对此五穴进行讨论报告如下。

男性合成毒品依赖者中医体质类型初探

目的探讨男性合成毒品依赖者中医体质情况。方法采用中医体质分类与判定量表对149例男性合成毒品依赖者进行中医体质类型调查研究,结合《中医体质分类与判定》标准进行体质判定。结果平和质合成毒品依赖者占35.57%。偏颇体质合成毒品依赖者占64.43%,偏颇体质以气虚质、湿热质、气郁质占比较高,分别为27.52%、23.49%和21.48%。结论吸食合成毒品可能导致合成毒品依赖者的偏颇体质,对该人群的中医体质研究有待于开展更深入的探讨。

从筋膜理论探讨针灸的作用机制

目前对经络的研究主要围绕在筋膜纤维网络支架结构和以神经、血管、内分泌为主的神经-内分泌-免疫系统之间,这三者之间相互依存,相互影响。筋膜结缔组织为中医经络理论提供了物质基础,经络效应的产生亦离不开各系统、各物质的参与,各系统、物质功能的发挥离不开筋膜结缔组织的支撑。临床上针灸效应的发生与筋膜及神经-内分泌-免疫系统关系密不可分。

电针对高脂血症大鼠脂肪组织腺苷酸活化蛋白激酶表达的影响

目的:探讨电针足三里和内庭对高脂血症SD大鼠脂肪组织腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)表达的影响。方法:33只SD雄性大鼠,随机分为高脂饮食组和正常饮食组,高脂血症造模成功后,高脂饮食组随机分为高脂电针组和高脂对照组,正常饮食组分为正常电针组和正常对照组,连续电针30d,腹主动脉采血法处死大鼠,RT-PCR法检测脂肪组织AMPKα2 mRNA表达,Western Blot法检测pAMPK蛋白表达。结果:造模后高脂饮食组血脂明显升高(P<0.05),高脂血症模型复制成功;电针30d后,高脂电针组血脂显著下降(P<0.05),针刺降脂有效。与高脂对照组比较,电针后高脂电针组脂肪组织pAMPKα蛋白表达量显著升高(P<0.05),脂肪组织AMPKα2 mRNA表达量无显著变化。结论:电针胃经穴位可以增加高脂血症大鼠脂肪组织AMPK蛋白表达。

基于肥大细胞和P物质探讨哮喘大鼠背部腧穴敏化机制

目的:通过观察哮喘模型大鼠体表敏化点的分布及敏化点处温度,结合敏化点处肥大细胞(MCs)和P物质(SP)变化特征,探讨哮喘模型大鼠穴位敏化点及热敏点的产生机制。方法:60只雄性SD大鼠随机均分6组,分别为模型Ⅰ组和空白Ⅰ组,模型Ⅱ组和空白Ⅱ组,模型Ⅲ组和空白Ⅲ组,每组10只。模型组予卵白蛋白/氢氧化铝混合液腹腔及四肢注射后超声雾化吸入卵白蛋白0.9%氯化钠溶液,制备哮喘大鼠模型。其中模型Ⅰ组连续造模4周,模型Ⅱ组连续造模8周,模型Ⅲ组连续造模12周;空白Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组分别注射溶液4周、8周、12周,注射方法同模型组。实验结束后沿大鼠尾静脉注射伊文思蓝(EB),观察大鼠皮肤EB渗出点,同时用红外热像仪观测EB渗出点处温度,并检测相应皮肤组织中MCs及SP的变化情况,分析腧穴敏化与热敏化的相关性。结果:模型组大鼠的肺俞穴、定喘穴以及华盖穴处出现敏化现象;与空白组相应点比较,模型组敏化点处温度显著升高(P<0.05),MCs数及其脱颗粒率显著增加(P<0.05),SP阳性目标平均光密度亦显著增加(P<0.05)。结论:哮喘模型大鼠的敏化穴有肺俞穴、定喘穴、华盖穴,热敏穴主要是肺俞穴和定喘穴,两者出现一定的重合;MCs和SP参与腧穴的敏化现象,且随着疾病程度的增加,腧穴的敏化表现一种扩散的现象。