香蕉花叶病毒外壳蛋白基因的分离测序和比较

从海南大田感染花叶病毒的香蕉叶片中分离病毒及其ＲＮＡ，在ＡＭＶ逆转录酶作用下以ＲＮＡ为模板反转录合成ｃＤＮＡ第一链，并在此基础上进行ＰＣＲ（ＰｏｌｙｍｃｒａｓｃＣｈａｉｎＲｅａｃｔｉｏｎ）扩增，得一１ｋｂ左右片段。补平后克隆到ｐＢＳ质粒的ＥｃｏＲＶ位点，测得该片段长９８６ｂｎ。分析表明它包含有完整的香蕉花叶病毒外壳蛋白基因，其编码区的核苷酸序列与ＣＭＶ－Ｃ株系的同源率为８８；６％，ＣＭＶ－Ｑ株系为７５．０％；氨基酸残基序列与ＣＭＴ－Ｃ株系同源率为８５．８％，ＣＭＶ－Ｑ株系为６４．４％。

巴西蕉品种选育及栽培技术要点

论述了巴西蕉品种的来源、引进选育过程及栽培技术特点，通过历年的区域试验对其生物学性状、果实品质、抗逆、抗病性差异进行系统研究。结果表明：巴西蕉品种生育期9～13个月，植株高度237～300 cm；果穗长约84 cm，果穗周约120 cm，果指长20.1～21 cm，果数134～149个，单产24 kg，单产最高可达50 kg 以上。耐瘦瘠、抗寒性较好，经济性状优良，主要缺陷是对香蕉枯萎病4号小种高感，其他病虫害抗性也同普通香牙蕉。巴西蕉从20世纪90年代中期起已成为我国主栽品种之一，占种植面积60%以上，累计种植面积达200万 hm2，累计产值1500亿元，年带动就业100万人。2013年1月通过海南省农作物品种审定委员会审定。

番木瓜环斑病毒外壳蛋白基因及抗菌肽D基因双抗表达载体的构建

选取分别被克隆到Ｃｏ２４质粒和ＢＳ质粒上的番木瓜环斑病毒外壳蛋白（ＰＲＳＶ—ＣＰ）基因和柞蚕抗菌肚Ｄ（ＣｅｃｒｏｐｉｎＤ）基因为材料，构建了单抗表达载体ＦＫ３和ＰＣｏ２５，进一步构建了双抗植物表达载体ｐＫＰＴ。这为开展单抗和多抗植物基因工程的研究提供了重要途径。

广西香蕉事件给中国香蕉产业的启示

2009年底，广西香蕉遭遇了“低温雨雪”天气，最低价0．40～0．60元／公斤，散户甚至跌至0．30元／公斤，出现了卖蕉难的现象。这一现象引起了胡锦涛总书记的关注，并做了重要批示。广西自治区领导迅速组织学习总书记的批示精神，努力为蕉农解决卖蕉难的问题，并提出了应对卖蕉难的5个方面的措施。农业部种植业司叶贞琴司长和南亚办雷相成处长先后到广西调查和指导工作。香蕉产业技术体系有关专家也积极参加到相关工作中，与自治区水果总站有关领导讨论对策，并对卖蕉难的现象做了调查与分析。

香蕉产业发展面临的重大问题和对策措施

一、我国香蕉产业现状生产情况：香蕉是世界鲜果贸易量最大的水果。据联合国粮农组织（FAO）统计,2013年全球香蕉收获面积7 959万亩（531万hm2）,产量11 069万t。收获面积位居全球前三位的国家分别是印度、巴西和坦桑尼亚,合计占全球香蕉收获面积的33%;产量位居前三位的国家分别是印度、中国和菲律宾,合计占全球产量的44%。2013年全球香蕉出口量2 009.81万t,

中粒种咖啡幼胚胚状体的分化和增殖

中粒种咖啡幼胚在含Kt2.0毫克/升+2.4-D0.5毫克/升+NAA0.2毫克/升的培养基上能产生疏松、半透明的愈伤组织;愈防组织在Kt1.0毫克/升+GA0.5毫克/升的培养基上分化出大量小子叶型胚状体;刚形成的胚状体团在含Kt2.0毫克/升+活性炭0.5％的培养基上迅速增殖,形成难以计数的大量胚状体。

中粒种咖啡叶片离体培养的研究

本文报道诱导中粒种咖啡叶片产生愈伤组织、胚状体以及再生小植株的方法。试验表明,诱导产生愈伤组织的关键激素是2,4-D和Kt,最有利于胚状体分化和小植株再生的培养基分别为MS+Kt2.0毫克/升+GA_30.5毫克/升+NAA0.2毫克/升和MS+GA_31.0毫克/升+IAA 0.5毫克/升。

香蕉枯萎病综合防控技术成效显著

过度使用化肥、农药会破坏香蕉种植区的土壤生态，使土壤中有益菌减少、病菌增加，使得香蕉自身免疫力下降，枯萎病肆虐。随着海南省香蕉枯萎病蔓延以及经常受台风的侵袭，

香蕉根际土壤解钾放线菌的筛选鉴定及解钾特性研究

旨在根据解钾菌的解钾特性和机理,从香蕉根际土壤中分离获得解钾能力较强且十分稳定的高效解钾放线菌。首先,通过解钾分离培养基和筛选培养基的初筛,获得一批高效解钾菌,然后在实验室条件下鉴定菌株类型和测定解钾率,得到一株高效解钾放线菌。最后通过形态观察、生理生化实验和16S r RNA基因序列分析对所筛菌株进行鉴定,并测定不同条件下的解钾率,对其解钾特性进行了研究。结果显示,从香蕉根际土壤中筛选出16株高效解钾菌,通过鉴定和解钾率的测定,最终获得一株稳定的解钾链霉菌(Streptomycete)M3-4,其在120 h,30℃,p H为6,钾长石粉为5 g,摇床转速为250 r/min条件下,以麦芽糖为碳源,蛋白胨为氮源时解钾率达最大值。该菌株为陕西链霉菌(Streptomyces shaanxiensis),解钾率约为20%。

6种基质拮抗菌发酵液对香蕉枯萎病及相关防御酶的影响

为筛选香蕉枯萎病拮抗菌——甲基营养型芽孢杆菌4-L-16的最佳发酵基质,探讨其诱导香蕉抗病酶活性变化的机理。通过盆栽试验,研究6种基质拮抗菌发酵液对香蕉枯萎病的防控效果,及其对PAL、POD、SOD、PPO 4种酶活性的影响。结果表明:豆饼发酵液对香蕉苗的促生作用最显著。豆饼、花生饼、菜籽饼发酵液对香蕉枯萎病的防控效果最佳,防效分别达68.22%、54.21%和57.94%。各发酵液处理的香蕉POD和PPO基本表现为由低到高的变化趋势,PAL和SOD则表现为第1天时活性最高,之后有降低的趋势;豆饼、花生饼、菜籽饼处理的4种酶的活性均显著高于其它几个处理。结合防控效果,筛选豆饼、花生饼、菜籽饼作为拮抗菌4-L-16最佳的发酵基质,推测诱导抗病酶活性可能是拮抗菌发酵液防治香蕉枯萎病的抗病机制之一。

两株香蕉枯萎病拮抗菌在香蕉体内的定殖

本研究将2株香蕉枯萎病拮抗细菌0202和1112分别涂布于含有不同浓度的利福平培养基上,筛选出抗药性标记菌株0202-r和1112-r。将香蕉枯萎病菌Foc4接种于香蕉植株根部,3d后再将抗药性标记菌株接种在同一部位或位点,于不同时间测定拮抗细菌在根际、根内、球茎和假茎的定殖情况。研究结果显示,将拮抗细菌接种香蕉根部1～3d后,在植株根际土壤内存在大量拮抗细菌,而根内、球茎和假茎内存在少量拮抗细菌;接种7～14d后,在植株根内、球茎和假茎内定殖的拮抗细菌增多,并达到最大量;在接种14～21d后,在植株根内、球茎和假茎内定殖的拮抗细菌量急剧下降;在接种28~35d后,在植株根内、球茎和假茎内定殖的拮抗细菌量稍有回升。

香蕉枯萎病拮抗放线菌1-g-59的筛选与鉴定

通过对海南美台、南宝蕉园香蕉根际土壤的分离和筛选,获得5株对FOC 4具有拮抗作用的放线菌,其中以菌株1-g-59活性最强。根据进行形态特征、培养特征、生理生化特征、细胞壁化学成分分析、16S rDNA序列和系统发育分析等研究,鉴定菌株1-g-59为Streptomyces lunalinharesii。盆栽试验结果表明,菌株1-g-59发酵液对香蕉枯萎病具有较强的防治作用,防治效果达64.9%。

不同品种香蕉内生菌分离及广谱拮抗菌的筛选

旨在探究抗病品种与易感品种香蕉的健康株和病株内生菌与其中广谱拮抗菌的主要分布规律,并对广谱拮抗菌进行拮抗活性的测定。以样品根、球茎、假茎、叶为材料分离培养内生菌,在实验室条件下,筛选对供试的10种香蕉致病菌均有良好拮抗活性的菌株并测定它们的拮抗活性,对活性最强的菌株进行形态学、16S rDNA序列同源性分析。结果显示,分离得到内生菌438株,其中细菌240株,放线菌142株,真菌56株。抗病品种南天黄病株中分离得到的内生菌最多,共计128株。内生菌数量在香蕉植株中的分布呈现规律为:根部>球茎部>假茎部>叶部。内生真菌在各香蕉种病株中的分布最广泛。筛选出具广谱活性的放线菌10株、细菌2株。其中内生放线菌菌株041的广谱拮抗活性最强,最大抑菌带宽为28.13±1.89 mm。对广谱拮抗内生放线菌菌株041、04-1、19-1、03A-1进行的形态学和16S rDNA序列分析表明,它们属于链霉菌属。

香蕉枯萎病区土壤真菌多样性分析

研究香蕉园土壤可培真菌数量分布特征,并以T-RFLP(terminal restriction fragment length polymorphism,末端限制性片段多态性分析)技术研究不同地区发病与健康土壤真菌的多样性,探讨土壤真菌数量分布及群落结构与土壤因子的关系。结果表明,同一地区的蕉园中,发病蕉园土壤的大部分理化性质指标低于健康蕉园,以pH值、有效磷含量的差异最显著,pH值、有效磷含量同时还影响着土壤中可培真菌的数量与分布;发病土壤的真菌群落多样性比健康土壤丰富;蕉园土壤中优势真菌种群分别为片段长度为72、112 bp的T-RFs;大部分T-RFs的分布与pH值、全氮、碱解氮、速效钾、有效磷及水分含量有关,且在发病土壤中的相对丰度小于健康土壤;真菌群落的辛普森指数与土壤因子有一定的相关性。

甲基营养型芽胞杆菌BM-24菜籽饼发酵液对粉蕉枯萎病防效研究

本研究通过盆栽试验测定甲基营养型芽胞杆菌BM-24菜籽饼发酵液、菜籽饼发酵液、甲基营养型芽胞杆菌BM-24 LB发酵液对粉蕉苗期枯萎病的防效以及植株生长的影响。结果表明,各种发酵液对粉蕉苗均有一定防病促生作用。第51 d结束试验时,添加菌株BM-24的菜籽饼发酵液、菜籽饼发酵液和菌株BM-24 LB发酵液3个处理的病情指数较接种病原菌对照(CK2)分别降低82、64和49,地上部分鲜重分别高出81.19、60.60、59.30 g,地下部分鲜重分别高出38.25、35.03、30.83 g,株高分别高出23.10、18.81、14.38 cm,土壤中病原菌浓度从105 cfu/g土分别降低至103、103、104 cfu/g土。各发酵液处理均能显著提高粉蕉苗保护酶活性、抑制叶绿素分解、降低根系电导率,其中接种病原菌,施用添加菌株BM-24的菜籽饼发酵液处理效果最显著,粉蕉苗叶片SOD、CAT、POD峰值时的酶活力为CK2的1.3、1.4和1.5倍,叶绿素a、叶绿素b和叶绿素含量分别为CK2的2.7、2.3和2.6倍,电导率降低了31.9%;菜籽饼能显著提高菌株BM-24定殖效果,接种45 d时活菌数量提高了5.0倍。

不同碳氮比饼肥发酵液对香蕉苗期枯萎病的影响

香蕉枯萎病是由尖孢镰刀菌古巴专化型Fusarium oxysporum f.sp.cubense(FOC)侵染引起的一种毁灭性土传维管束病害,严重影响世界香蕉产业的健康发展。为了寻求一种有效的生物防治香蕉枯萎病的方法,将饼肥以5种不同的碳氮比进行发酵,并用发酵液处理香蕉幼苗。盆栽试验结果表明,5种碳氮比饼肥发酵液均对香蕉枯萎病有一定防病效果,其中BF15处理防病效果最好、达到61.3%,显著高于其他处理。进一步研究发现,相比只接病原菌的B处理,5种碳氮比饼肥发酵液处理均能提高香蕉幼苗株高、鲜重、叶绿素含量以及SOD、POD、CAT活性,同时降低MDA含量和相对电导率。其中BF15处理与B处理相比,株高、鲜重、叶绿素含量以及SOD、POD、CAT活性分别提高37.5%、69.6%、47.6%、68.9%、48.4%、59.8%,MDA含量及相对电导率分别下降53.8%、50.2%。说明该饼肥以碳氮比为15进行发酵,其发酵液处理对香蕉枯萎病的防治效果较为理想。

外植体的切取方式对红香蕉吸芽培养的影响

全顶芽组织块表面消毒容易,存活率高;潜伏芽组织块表面消毒困难,存活率低;1/4吸芽块存活率高,靠近生长点的副芽能够萌发,但消毒很困难。全顶芽继代培养,主芽不能发育,愈伤团块不能形成;1/2顶芽块继代培养,靠近顶芽的副芽可以缓慢萌发,同时产生少量愈伤团块;1/4顶芽块和1/8顶芽块继代培养时,靠近顶芽的副芽迅速萌发,芽的数量较多,同时产生大量的愈伤团块。愈伤团块可以分化成芽。

6种基质复合拮抗菌发酵液对香蕉幼苗的促生作用

为研究添加拮抗菌4-L-16和T3-G-59的6种基质发酵液对香蕉幼苗的促生作用,在盆栽条件下,以麦麸、豆饼、花生饼、菜籽饼、芝麻饼、花椒饼为发酵基质,分别研究了不同发酵液对香蕉幼苗地上部和根系生长、植株生物量和叶片生理性状的影响。6种基质发酵液对香蕉幼苗均有显著的促生作用,添加拮抗菌的不同基质发酵液对香蕉苗的促生作用更为显著。综合对比香蕉幼苗形态和生理指标,以菜籽饼拮抗菌发酵液处理为最佳,豆饼、花生饼拮抗菌发酵液处理次之。豆饼、花生饼、菜籽饼拮抗菌发酵液处理的香蕉根冠比显著高于其他处理,这3个处理的香蕉根系生长更为发达,形态构成更为合理。

香蕉枯萎病土壤消毒剂的筛选

分别以孢子萌发法与菌丝生长法测定了4种土壤消毒剂对香蕉枯萎病病原菌(Fusarium oxysporium f.sp.cubense)的毒力作用,并对接种香蕉枯萎病病原菌10 d的香蕉组培苗分别灌注4种土壤消毒剂进行药效测定,结果表明,98%棉隆、50%石灰氮对香蕉枯萎病的防治效果分别为88.0%、74.8%,其防治效果显著优于10%二氧化氯和99%溴氯海因。

1株香蕉枯萎病菌拮抗菌鉴定及抑菌效果

为进一步明确菌株LP-03的生防效果和分类地位,根据菌株形态特征、培养特征结合生理生化特征以及16S rDNA序列比对和分析对菌株进行鉴定;以香蕉枯萎病菌1号小种(Fusarium oxysporum f.sp.cubense,FOC 1)为指示菌,采用平板对峙法测定菌株抑菌谱,采用菌丝生长抑制法和孢子萌发法测定其抑菌效果。经鉴定,该菌株为类植物乳杆菌(Lactobacillus paraplantarum),其对供试的12种植物病原真菌都有明显的抑菌效果,具有广谱抗菌性,尤其对香蕉枯萎病菌1号小种效果显著,抑菌带达到20.4 mm;对香蕉枯萎病菌菌丝生长和孢子萌发都有显著的抑制效果,在含有10%该菌株发酵液原液的培养基上香蕉枯萎病菌菌丝体不能生长,对菌丝体生长抑制率达到100%,菌株的LB发酵液对孢子萌发抑制率达到72.62%。