猪嗜血支原体PCR及荧光定量PCR检测方法的建立和比较

为了解猪嗜血支原体(Mycoplasma haemosuis)对猪群的感染情况并建立该病的检测方法,本研究根据GenBank登录的M.haemosuis 16S rRNA基因序列(FJ263944)设计合成PCR引物以及荧光定量PCR(FQ-PCR)引物和探针。以含16S rRNA基因的重组质粒为模板,通过对PCR反应条件的优化,建立检测M.haemosuis的PCR和FQ-PCR检测方法。结果表明,这两种检测方法均具有较好的敏感性和特异性,与常规方法相比,FQ-PCR方法的敏感性高1 000倍;用这两种PCR方法检测20份临床样品,常规PCR方法的阳性率为60%(12/20),而FQ-PCR方法的阳性率为75%(15/20)。这两种检测方法的建立为确定M.haemosuis在我国猪群的感染情况和建立该病动物模型提供有效的检测手段。

猪嗜血支原体酶标单抗阻断ELISA检测方法的建立

为确定猪嗜血支原体(M.suis)在临床的感染情况和进行流行病学调查提供检测方法,本研究以纯化的猪嗜血支原体重组MSG1蛋白和辣根过氧化酶标记的MSG1蛋白单抗建立了检测猪嗜血支原体的阻断ELISA方法。经筛选确定,抗原最佳包被浓度为0.5μg.mL-1,待检血清最佳稀释度为1∶1,作用时间为37℃1.5h,酶标单抗最佳稀释度为1∶10 000,作用时间为37℃1h。通过对100份M.suis阴性血清阻断ELISA检测结果进行统计学分析,确定本方法的判定标准为当阻断率PI≥23.71%时判为阳性,PI≤36.35%时判为阴性,23.71%<PI<36.36%时判为可疑。敏感性、特异性和重复性试验证明该检测方法敏感性高、特异性强、可重复性好,可用于M.suis流行病学调查和疾病诊断。

为什么疫苗养“活”了世界——第24届国际猪兽医学会(IPVS)大会BI卫星会会议侧记

在疫苗问世之前，天花、白喉、麻疹等疾病夺走了无数人的生命，因为疫苗的出现，这些当时所谓的绝症在今天已不再是威胁。据统计，人类在疫苗上每投入1美元能节省10．2美元的治疗费用，同时改善了人类健康，延长了寿命。同样，疫苗在养猪行业的使用，大大降低了猪只的死亡率，改善了生产效益。随着人均收入不断增长，人们对食品的要求也在发生改变，

猪伪狂犬病净化案例

2011年以来我国的猪伪狂犬病（PR）发病率明显增加，多篇报道显示猪伪狂犬病毒（PRV）发生了变异，变异毒株致病力增强，同时市场上产生了很多对Bartha—K61毒株疫苗保护力质疑的声音。随着国家颁布《中长期动物疫病防治规划（2012—2020）》和各项鼓励政策的出台，以及养殖场自身竞争力和盈利能力需求的提升，猪伪狂犬病的净化已成为行业呼声。

猪支原体重组MSG1蛋白间接ELISA检测方法的建立

为确定猪支原体在临床的感染情况和进行血清流行病学调查,本研究以原核表达纯化的猪支原体MSG1重组蛋白为包被抗原,建立了检测猪支原体的间接ELISA诊断方法。通过对ELISA反应一系列条件的优化,确定了最佳抗原包被浓度为0.5μg/mL;最佳封闭条件为用1%BSA37℃温箱内封闭2 h;血清最适稀释度为1∶200,作用时间为1.5 h;酶标二抗最适稀释度为1∶15 000,最适作用时间为1 h;最后37℃显色15 m in。判定标准为OD450≥0.239时判为阳性,OD450<0.198时判为阴性,0.198≤OD450<0.239时判为可疑。敏感性、特异性和可重复性试验证明,该检测方法敏感性高、特异性强和可重复性好。该研究表明建立的间接ELISA方法为猪支原体的检测和区域流行病学调查提供了一种快速简便的血清学诊断方法。

抗猪(嗜血)支原体MSG1蛋白单克隆抗体的制备及鉴定

以原核表达纯化的猪(嗜血)支原体MSG1蛋白免疫BALB/c小鼠,运用细胞融合技术筛选分泌针对MSG1蛋白抗体的融合细胞。通过间接ELISA方法筛选获得2株能稳定分泌抗体的融合细胞株,分别命名为1A7和3G6,Western blot结果证明这2株细胞分泌的抗体能够与重组MSG1蛋白发生特异性反应。细胞上清和腹水中的ELISA抗体效价分别为1∶4 096、1∶1 024和1∶1 638 400、1∶51 200,其单抗亚类鉴定均属于IgG1,轻链为κ型。抗原识别位点分析结果表明,2株单抗所识别的抗原位点相同。猪(嗜血)支原体MSG1蛋白特异性单克隆抗体的制备成功,为制备免疫诊断试剂盒和致病机制的研究奠定了基础。