原料乳中高产蛋白酶嗜冷菌的分离及产酶培养基的研究

以原料乳为对象,使用脱脂乳平板筛出三株有较强蛋白酶水解性的嗜冷菌,通过时间-酶活曲线复筛出一株高产蛋白酶的嗜冷菌Px-1。针对其产蛋白酶培养基进行了正交优化,研究了其产酶培养基的主要成分,结果表明酵母浸出粉对产酶影响显著。通过本实验最终确定了最佳培养基组成:蔗糖4%,α-乳糖4%,葡萄糖2%;酵母浸出粉0.7%,干酪素0.5%,胰蛋白胨0.3%以及0.05%的吐温80。在此条件下,Px-1产蛋白酶活为42.5451U/mL,高于优化前的测定值30.2291U/mL。

奶牛α-1,3-岩藻糖基转移酶基因的克隆表达

唾液酸化路易斯-X(sialyl lewis x,Slex)是选择素家族的一个共同糖配体,通过与选择素竞争性地结合炎性细胞,可以抑制炎症反应。克隆表达Slex合成过程中的关键酶,就可以在体外进行Slex的生物合成,从而进行相关生物制剂的开发。α-1,3-岩藻糖基转移酶(alpha-(1,3)-fucosyltransferase,FT)就是参与Slex生物合成过程的关键酶之一。利用相关软件对牛的FT基因进行了生物信息学的分析,了解了FT的相关理化性质。通过PCR的方法获得了FT基因,构建了重组质粒pMD19-FT,并亚克隆至表达载体pPIC9K。通过电转化将线性化的表达质粒pPIC9K-FT整合到宿主菌Pichia pastoris GS115基因组上,构建了重组酵母GS115-FT。经诱导表达后,SDS-PAGE检测到了目的蛋白质条带,证明了此基因在P.pastoris GS115中能够可溶性表达。

嗜冷菌的嗜冷机制及其对乳品质量影响研究进展

从嗜冷菌细胞膜流动性、产冷休克蛋白、冷适应酶3个方面详细阐述了嗜冷菌的嗜冷机制,并介绍了乳制品中嗜冷菌的种类及其对乳品质量的影响。