建立一种微滴式数字聚合酶链式反应(droplet digital polymerase chain reaction,ddPCR)定量检测发酵乳中醋化醋杆菌的技术。根据醋化醋杆菌ITS基因序列设计特异性引物和探针,通过反应温度筛选优化ddPCR扩增条件,通过多种菌株扩增验证...建立一种微滴式数字聚合酶链式反应(droplet digital polymerase chain reaction,ddPCR)定量检测发酵乳中醋化醋杆菌的技术。根据醋化醋杆菌ITS基因序列设计特异性引物和探针,通过反应温度筛选优化ddPCR扩增条件,通过多种菌株扩增验证方法特异性,通过人工添加醋化醋杆菌验证方法检出限,通过ddPCR法实测结果和计数法测定结果之间的比较对其绝对定量进行系统性研究。结果表明:建立的发酵乳中醋化醋杆菌ddPCR定量检测1方法,反应条件中最适退火温度为54.6℃,方法特异性强,检出限为7.2×10^(1) CFU/mL,灵敏度高,定量偏差率为23.73%。该方法可以满足发酵乳中醋化醋杆菌定量检测需求。展开更多
为保证原料乳质量,丰富检测原料乳中大肠菌群涉及到的培养基的验收质控菌株,采用GB 4789.28—2013《食品安全国家标准 食品微生物学检验 培养基和试剂的质量要求》中规定的验收方法,分别选取3个品牌的结晶紫中性红胆盐琼脂(violet red b...为保证原料乳质量,丰富检测原料乳中大肠菌群涉及到的培养基的验收质控菌株,采用GB 4789.28—2013《食品安全国家标准 食品微生物学检验 培养基和试剂的质量要求》中规定的验收方法,分别选取3个品牌的结晶紫中性红胆盐琼脂(violet red bile agar,VRBA)、结晶紫中性红胆盐-4-甲基伞形酮-β-D-葡萄糖苷琼脂(violet red bile agar with MUG,VRBA-MUG)、月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉汤(lauryl tryptose broth,LST)和煌绿乳糖胆盐肉汤(brilliant green lactose bile broth,BGLB),对其进行外观、pH值、水分含量等物理指标以及生长率、选择性等微生物指标实验评价。同时以弗式柠檬酸杆菌ATCC 43864为参照,选取7株弗式柠檬酸杆菌对3个品牌的VRBA、VRBA-MUG、LST和BGLB进行验收实验评价。结果表明:3个品牌的不同培养基干粉颜色均正常,水分含量均控制在5%~6%,pH值均符合国家标准;7株弗氏柠檬酸杆菌在3个品牌VRBA、VRBA-MUG上的生长率均大于0.7;仅CMCC 48098和CICC 22910在3个品牌的LST、BGLB中浊度达到2,且导管内产生气体,与ATCC 43864结果相同。综上,3个品牌的VRBA、VRBA-MUG、LST和BGLB全部符合GB 4789.28—2013,推荐CMCC 48098和CICC22910用作验收4个培养基质控菌株的补充菌株。展开更多
文摘为保证原料乳质量,丰富检测原料乳中大肠菌群涉及到的培养基的验收质控菌株,采用GB 4789.28—2013《食品安全国家标准 食品微生物学检验 培养基和试剂的质量要求》中规定的验收方法,分别选取3个品牌的结晶紫中性红胆盐琼脂(violet red bile agar,VRBA)、结晶紫中性红胆盐-4-甲基伞形酮-β-D-葡萄糖苷琼脂(violet red bile agar with MUG,VRBA-MUG)、月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉汤(lauryl tryptose broth,LST)和煌绿乳糖胆盐肉汤(brilliant green lactose bile broth,BGLB),对其进行外观、pH值、水分含量等物理指标以及生长率、选择性等微生物指标实验评价。同时以弗式柠檬酸杆菌ATCC 43864为参照,选取7株弗式柠檬酸杆菌对3个品牌的VRBA、VRBA-MUG、LST和BGLB进行验收实验评价。结果表明:3个品牌的不同培养基干粉颜色均正常,水分含量均控制在5%~6%,pH值均符合国家标准;7株弗氏柠檬酸杆菌在3个品牌VRBA、VRBA-MUG上的生长率均大于0.7;仅CMCC 48098和CICC 22910在3个品牌的LST、BGLB中浊度达到2,且导管内产生气体,与ATCC 43864结果相同。综上,3个品牌的VRBA、VRBA-MUG、LST和BGLB全部符合GB 4789.28—2013,推荐CMCC 48098和CICC22910用作验收4个培养基质控菌株的补充菌株。