基于网络药理学研究安石榴苷治疗炎症性肠病的作用机制

目的运用网络药理学方法预测安石榴苷治疗炎症性肠病(IBD)的作用机制。方法通过数据库获取安石榴苷和IBD的交集基因,并进行PPI、GO功能和KEGG通路富集分析。安石榴苷和靶点通过分子对接验证。C57BL/6J小鼠采用葡聚糖硫酸钠建立IBD模型,给予安石榴苷干预7天,给药过程中观察各组小鼠的体征并计算每天的疾病活动指数(DAI),给药结束后肠道通透性检测;取结肠组织苏木素-伊红染色法观察病理改变,并计算组织学损伤评分;ELISA法检测小鼠结肠组织中肿瘤坏死因子(TNF-α)、白细胞介素-10(IL-10)、髓过氧化物酶(MPO)、趋化因子1(CXCL1)等细胞因子水平。CCK8法测定安石榴苷对caco-2细胞增殖活性的影响。ELISA法检测脂多糖(LPS)诱导的caco-2细胞释放细胞因子水平。结果获得安石榴苷与IBD共同靶点14个,包括TNF、花生四烯酸-5-脂氧合酶(ALOX5)、血管内皮生长因子A(VEGFA)等;KEGG富集分析预测安石榴苷治疗IBD主要作用于花生四烯酸代谢、AGE-RAGE、VEGFA、Ras等信号通路;分子对接显示安石榴苷与TNF表现出较高的对接活性。与模型组比较,安石榴苷组小鼠体质量下降幅度减小(P<0.01);DAI显著降低(P<0.01);结肠黏膜充血、水肿明显减轻,组织学损伤评分显著降低(P<0.01);结肠组织TNF-α、IL-1β、MPO、CXCL1、IL-6、IL-18、IFN-γ水平显著降低(P<0.01);IL-10水平显著升高(P<0.01);20-300μmol·L^(-1)安石榴苷促进caco-2细胞增殖,抑制LPS诱导的TNF-α分泌,上调IL-10水平。结论安石榴苷通过抑制TNF-α等促炎因子分泌,上调抗炎因子IL-10水平,改善IBD小鼠的结肠炎症反应。

调节性T细胞来源外泌体对成纤维细胞增殖影响的体外实验研究

目的 探讨调节性T细胞(Tregs)来源外泌体对成纤维细胞(CFs)的影响。方法 利用免疫调节性T细胞专用磁珠和差速贴壁离心法分别获得Tregs和CFs,并通过超速离心法与外泌体纯化试剂盒从Tregs上清液中制备外泌体。建立Tregs来源外泌体与CFs共培养模型,并分为Tregs组、CFs组、Tregs来源外泌体与CFs组(Tregs-exo+CFs组)、3倍Tregs来源外泌体与CFs组(3Tregs-exo+CFs组)和CFs来源外泌体与Tregs组(Tregs+CFs-exo组),CCK-8法检测共培养体系CFs增殖变化,免疫荧光法检测CFs对Tregs来源外泌体摄取能力,ELISA法检测共培养体系细胞因子转化生长因子-β(TGF-β)、白介素10(IL-10)水平。结果 Tregs来源外泌体为直径约115 nm的圆形或椭圆形囊泡。与CFs组相比,Tregs来源的外泌体明显促进CFs增殖,且3倍Tregs来源的外泌体显著促进CFs增殖(P<0.01)。免疫荧光证实CFs有效摄取Tregs来源的外泌体,主要集中于细胞质。与CFs组相比,Tregs-exo+CFs组TGF-β、IL-10水平明显升高,3Tregs-exo+CFs组TGF-β、IL-10水平亦显著升高(P<0.01),且TGF-β升高水平超过IL-10升高的水平。结论 体外共培养条件下,调节性T细胞来源外泌体明显促进成纤维细胞的增殖,升高TGF-β、IL-10水平。

基于数据挖掘与体外实验探究益心通脉颗粒治疗新型冠状病毒肺炎所致急性呼吸窘迫综合征的可行性与潜在机制

目的基于在线数据库与体外实验探究益心通脉颗粒治疗新型冠状病毒肺炎(COVID-19)所致急性呼吸窘迫综合征(ARDS)的可行性并分析其潜在机制。方法使用R软件对GEO数据库相关ARDS数据集进行基因差异分析,对差异基因进行基因本体(GO)、京都基因和基因组百科全书(KEGG)与转录因子分析。分别获取益心通脉颗粒成分和靶点及COVID-19与ARDS相关靶点,对交集靶点进行蛋白互作、GO和KEGG分析。分子对接分析关键靶点。体外实验将SD大鼠分为对照组、泼尼松组和益心通脉颗粒组,灌胃给药后制备血清,采用H2O2处理Ⅱ型肺泡上皮细胞(AECⅡ)制备炎症细胞模型,CCK8法评价大鼠血清对细胞炎症的改善作用,测定自由基清除率评价药物的抗氧化能力,并用Western blot法检测相关因子A(RELA)蛋白表达量。结果对GEO数据分析发现571个差异基因,富集分析提示多条炎症相关信号被激活。网络药理学分析发现,益心通脉颗粒的多种成分可能通过多种免疫生物过程和通路发挥抗COVID-19所致ARDS的作用。分子对接提示多种活性成分能与丝裂原活化蛋白激酶14(MAPK14)、RELA等结合形成氢键且结合能较低。体外实验结果显示,益心通脉颗粒能明显提高炎症模型AECⅡ的存活率,且有较高的抗氧化能力;同时益心通脉颗粒还能抑制炎症模型AECⅡ的RELA蛋白表达量。结论益心通脉颗粒的多种活性成分可能通过作用于多个免疫调节受体,调控细胞因子受体相互作用、磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B等多条信号通路,发挥抗COVID-19所致ARDS的疗效。