以病例为基础的临床思维培养在微生物检验医师培养中的实践

随着检验医学实验室体系建设日臻标准化,检验技术手段不断更新,检验医学进入快速发展时期。目前,检验结果判读日趋复杂,临床医师在疾病的诊疗过程中对检验结果的依赖性也越来越强。在多学科交融发展的背景下,检验医师作为连接检验医学和临床医学的桥梁显得愈发重要。检验医师规范化培训在我国起步较晚,一直处于摸索前进阶段。临床微生物学属于检验医学的亚专业。近年来,该领域技术不断更新迭代,检测方式逐渐从传统形态学向基因诊断转换。由于该学科是针对微生物生命体的特殊学科,进而成为紧密联系临床的重要应用型学科。培养优秀的微生物检验医师成为当前检验医师规范化培训的重要任务。该专业规范化培训目的是培养具备丰富理论知识、掌握扎实的基本技能、沟通技能良好、适应感染性诊疗需求的微生物检验医师。该文将通过实际案例由点到面、由浅入深探讨如何利用病例教学引导和建立临床微生物检验医师的临床思维。

6573例非淋菌性尿道炎患者支原体感染及药敏情况分析

目的调查分析6 573例非淋菌性尿道炎(NGU)患者支原体感染情况及对抗菌药物的敏感性,为临床合理用药及流行病学提供依据。方法对6 573例NGU患者进行支原体培养及药敏试验,分别对中国籍患者和外籍患者两组进行比较分析。结果在5 675例中国籍患者中检出支原体感染2 985例(52.6%),其中,解脲支原体(Uu)感染2 312例(40.7%);男性感染率为35.2%,女性感染率为61.4%。898例外籍患者支原体感染440例(49.0%),其中,Uu感染327例(36.4%);男性感染率为32.2%,女性感染率为59.5%。药敏试验结果显示,中国籍患者Uu感染时敏感率依次为米诺环素(MIN)96.7%、多西环素(DOX)96.2%、交沙霉素(JOS)93.7%、克拉霉素(CLA)89.7%;外籍患者依次为MIN(98.9%)、DOX(98.4%)、JOS(95.8%)、CLA(92.1%)。结论中国籍NGU患者支原体感染率略高于外籍患者,感染类型均以Uu为主;女性感染率均明显高于男性;外籍患者对所试药物敏感性均高于中国籍患者,两组患者对MIN、DOX、JOS及CLA均呈现较强的敏感性。

2013年上海市细菌耐药性监测

目的了解2013年上海市细菌耐药性监测结果。方法采用纸片扩散法或自动化仪器法对上海市40所医院的临床分离菌进行药敏试验。其中包括28所三级医院和12所二级医院,采用CLSI 2013年版标准判断结果。结果总计98 185株临床分离菌,革兰阳性菌26 655株,占27.1%,革兰阴性菌71 530株,占72.9%。耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(金葡菌)(MRSA)和耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌(MRCNS)的检出率分别为50.8%和77.6%。在二级医院和三级医院MRSA、MRCNS的平均检出率分别为55.1%、80.6%和49.8%、77.0%。葡萄球菌属中未发现万古霉素、替考拉宁和利奈唑胺耐药株。726株儿童肺炎链球菌非脑膜炎分离株中青霉素敏感、中介和耐药(PSSP、PISP和PRSP)的检出率分别为56.7%、15.6%和27.7%,107株成人分离株为91.6%、2.8%和5.6%。发现35株屎肠球菌和17株粪肠球菌对万古霉素耐药(VRE)。根据表型推测,多数VRE为VanA基因型。大肠埃希菌、克雷伯菌属和奇异变形杆菌中产ESBLs菌株的检出率分别为61.3%、37.1%和39.5%。上述3种细菌中产ESBLs菌株的检出率在二级医院和三级医院的检出率分别为63.0%、31.6%、56.3%和60.7%、38.7%、33.5%。肠杆菌科细菌对碳青霉烯类抗生素仍高度敏感,对亚胺培南和美罗培南的总耐药率分别为5.8%和6.6%。铜绿假单胞菌和不动杆菌属对亚胺培南、美罗培南耐药率分别为25.3%、24.3%和52.6%、56.0%。大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、鲍曼不动杆菌和铜绿假单胞菌中有少数菌株为对所有测试药物耐药的广泛耐药株。分离自尿液标本中的肠球菌属和大肠埃希菌对磷霉素的耐药率低。结论细菌耐药性仍对临床抗感染治疗构成严重威胁,尤其是二级医院中某些细菌的耐药率高于三级医院,应引起高度关注。

2014年上海市细菌耐药性监测

目的了解2014年上海市细菌耐药性监测情况。方法采用纸片扩散法(K-B法)或自动化仪器法对上海市40所医院的临床分离菌进行药敏试验。包括28所三级医院和12所二级医院,其中含3所儿童医院。采用CLSI 2014年版标准判断结果。结果总计102 113株临床分离菌,革兰阳性菌27 482株,占26.9%;革兰阴性菌74 631株,占73.1%。MRSA和MRCNS的检出率分别为47.4%和79.8%。MRSA、MRCNS在二级医院和三级医院的平均检出率分别为51.1%、79.9%和46.6%、79.8%。葡萄球菌属中未发现万古霉素和替考拉宁耐药株。845株儿童非脑膜炎分离株中青霉素敏感(PSSP)、中介(PISP)和耐药(PRSP)株的检出率分别为70.1%、14.6%和15.4%;167株成人分离株的PSSP、PISP和PRSP分别为97.6%、1.2%和1.2%。发现67株屎肠球菌和14株粪肠球菌耐万古霉素。根据PCR测序,多数万古霉素耐药肠球菌为van A和van M基因型。大肠埃希菌、克雷伯菌属(肺炎克雷伯菌和产酸克雷伯菌)和奇异变形杆菌中ESBL的检出率分别为59.4%、35.9%和30.1%。上述ESBL菌株在二级医院和三级医院的检出率分别为61.6%、31.6%、35.0%和58.9%、36.9%、29.5%。肠杆菌科细菌对碳青霉烯类抗生素仍高度敏感,对亚胺培南和美罗培南的总耐药率均为7.0%。鲍曼不动杆菌、肺炎克雷伯菌、铜绿假单胞菌和大肠埃希菌中有少数对所有测试药物耐药的广泛耐药株。分离自尿液标本中的肠球菌属和大肠埃希菌对磷霉素的耐药率低。结论细菌耐药性仍对临床构成严重威胁,临床需合理规范应用抗菌药物,避免耐药株的广泛传播。

2017年上海市细菌耐药性监测

目的了解2017年上海市细菌耐药性监测结果。方法采用纸片扩散法或自动化仪器法对上海市49所医院的临床分离菌进行药敏试验。包括30所三级医院(含3所儿童医院)和19所二级医院。采用美国临床和实验室标准化协会(CLSI)2017年版标准判断结果。结果共获134078株临床分离菌,其中革兰阳性菌40243株,占30.0%;革兰阴性菌93835株,占70.0%。二级医院和三级医院菌株分别占29.0%和71.0%。在二、三级医院中革兰阳性菌和革兰阴性菌各为25.4%和74.6%、31.9%和68.1%。MRSA和MRCNS在各自菌种中的检出率分别为49.1%和79.7%。二级医院、三级医院的MRSA和MRCNS检出率分别为53.2%和72.1%、47.7%和82.2%。葡萄球菌属中未发现万古霉素耐药株。1041株儿童非脑膜炎肺炎链球菌分离株中青霉素敏感(PSSP)、中介(PISP)和耐药株(PRSP)分别占84.3%、7.8%和7.9%;330株成人分离株PSSP、PISP和PRSP分别为89.4%、4.2%和6.4%。检出5株(0.1%)万古霉素耐药粪肠球菌、64株(1.2%)万古霉素耐药屎肠球菌,经过PCR测序确认的菌株中主要为vanA基因型。大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌和奇异变形杆菌中ESBL的检出率分别为54.9%、35.1%和47.6%。上述产ESBL菌株在二级医院和三级医院的检出率分别为53.7%、31.5%、44.0%和55.5%、37.0%、50.0%。肠杆菌科细菌对碳青霉烯类抗生素仍高度敏感,对亚胺培南和美罗培南的总耐药率分别为11.1%和11.0%,二级医院、三级医院分别为9.0%和9.2%、12.2%和11.9%,碳青霉烯类耐药肠杆菌科细菌(CRE)的检出率为11.9%,其中73.4%是肺炎克雷伯菌。鲍曼不动杆菌、肺炎克雷伯菌、铜绿假单胞菌和大肠埃希菌中出现对大多数测试药物耐药而仅对1～2种抗菌药物敏感的广泛耐药株,二级医院和三级医院分别为64株、357株、7株、25株和412株、1129株、38株、45株。结论目前主要临床分离菌对于常用抗菌药物的耐药性仍甚为严重,尤其是多重耐药的革兰阴性杆菌,对人类健康构成严重威胁,需引起高度重视并采取有效措施防治耐药菌感染。

2016年上海市细菌耐药性监测

目的了解2016年上海市细菌耐药性监测结果。方法采用纸片扩散法或自动化仪器法对上海市47所医院的临床分离菌进行药敏试验。包括28所三级医院(床位数31 373张)和19所二级医院(床位数16 311张)。采用CLSI 2016年版标准判断结果。结果 12 2 548株临床分离菌,革兰阳性菌35 522株,占29.0%;革兰阴性菌87 026株,占71.0%。分离菌二级医院和三级医院分别占28.9%和71.1%;其中革兰阳性菌和革兰阴性菌在二、三级医院中分别占25.8%和74.2%、30.3%和69.7%。MRSA和MRCNS的检出率分别为48.7%和77.2%。MRSA、MRCNS在二级医院和三级医院的平均检出率分别为55.9%、73.3%和45.9%、78.6%。葡萄球菌属中未发现万古霉素耐药株。1 111株儿童非脑膜炎肺炎链球菌中青霉素敏感(PSSP)、中介(PISP)和耐药株(PRSP)的检出率分别为77.4%、13.2%和9.4%;上述细菌在二级医院中分别占97.8%、2.2%、0;在三级医院中分别占76.5%、13.7%、9.8%。285株成人分离肺炎链球菌PSSP、PISP和PRSP分别为94.0%、4.2%和1.8%;上述细菌在二级医院中分别占93.7%、5.3%、1.0%;在三级医院中分别占94.2%、3.7%、2.1%。发现37株屎肠球菌(二级医院14株,三级医院23株)和25株粪肠球菌(均分离自三级医院)耐万古霉素。根据PCR测序,多数万古霉素耐药肠球菌(VRE)为van A基因型。大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌和奇异变形杆菌中ESBL的检出率分别为52.2%、30.9%和29.8%。上述产ESBL菌株在二级医院和三级医院的检出率分别为55.1%、33.6%、34.0%和51.0%、29.7%、28.0%。肠杆菌科细菌对碳青霉烯类抗生素仍高度敏感,对亚胺培南、美罗培南的总耐药率分别为8.9%、9.1%,二级医院和三级医院中耐药率分别为6.6%、7.1%和9.9%、10.0%。鲍曼不动杆菌、肺炎克雷伯菌、铜绿假单胞菌和大肠埃希菌中出现对所有测试抗菌药物耐药的广泛耐药株,在二级医院和三级医院分别为223株、63株、10株、4株和224株、201株、22株、9株。结论目前临床主要病原菌对常用抗菌药物的耐药性仍极严重,对医疗机构构成严重威胁,需引起高度重视并采取有效感控措施。

2015年上海市细菌耐药性监测

目的了解2015年上海市细菌耐药性监测结果。方法采用纸片扩散法或自动化仪器法对上海市44所医院的临床分离菌进行药敏试验,包括27所三级医院(其中含3所儿童医院)和17所二级医院。采用美国临床和实验室标准化协会(CLSI)2015年版标准判断结果。结果 107 853株临床分离菌,革兰阳性菌31 585株,占29.3%;革兰阴性菌76 268株,占70.7%。MRSA和MRCNS的检出率分别占各自菌种的46.9%和74.2%。MRSA、MRCNS在二级医院和三级医院的平均检出率分别为53.6%、70.3%和44.3%、75.6%。葡萄球菌属中未发现万古霉素和利奈唑胺耐药株。1 021株肺炎链球菌儿童非脑膜炎分离株中青霉素敏感(PSSP)、中介(PISP)和耐药(PRSP)株的检出率分别为77.8%、13.3%和8.9%。232株成人分离株PSSP、PISP和PRSP分别为88.4%、5.2%和6.4%。检出51株屎肠球菌和3株粪肠球菌耐万古霉素。根据PCR测序,多数耐万古霉素肠球菌为vanA基因型。大肠埃希菌、克雷伯菌属(肺炎克雷伯菌和产酸克雷伯菌)和奇异变形杆菌中ESBL的检出率分别为57.0%、32.3%和41.5%。上述ESBL菌株在二级医院和三级医院的检出率分别为58.0%、29.0%、45.5%和56.5%、33.9%、40.2%。肠杆菌科细菌对碳青霉烯类抗生素仍高度敏感,对亚胺培南和美罗培南的总耐药率分别为7.4%和7.7%。鲍曼不动杆菌、肺炎克雷伯菌、铜绿假单胞菌和大肠埃希菌中有少数菌株为广泛耐药株。结论细菌耐药性仍对临床构成严重威胁,需引起高度重视,避免耐药株的广泛传播。

上海地区四家医院鲍曼不动杆菌产β-内酰胺酶研究

目的了解上海地区4家医院2010年鲍曼不动杆菌对13种抗菌药物耐药性及β-内酰胺酶基因携带情况,研究该菌的流行型别,为临床合理用药及控制医院感染提供依据。方法收集上海4家医院临床分离的鲍曼不动杆菌共204株。采用琼脂稀释法检测上述细菌对13种抗菌药物的最低抑菌浓度(MIC),三维试验检测AmpC酶,乙二胺四乙酸(EDTA)纸片协同试验检测金属酶表型。聚合酶链反应(PCR)检测OXA-23、OXA-24、OXA-51、OXA-58、ampC、IMP-1、IMP-4、VIM-2编码基因。结果 4家医院鲍曼不动杆菌对环丙沙星、哌拉西林-他唑巴坦、头孢西丁、复方磺胺甲口恶唑、头孢哌酮耐药率均较高,达到90%以上;对左氧氟沙星、多黏菌素B耐药率均相对较低。研究发现浦东地区医院对美罗培南、左氧氟沙星、多黏菌素B的耐药率均高于浦西地区医院。AmpC酶表型检测以公利医院表型阳性率最高(84.6%),瑞金医院表型阳性率最低(42.3%);金属酶表型检测,公利医院和仁济医院西院未检测到金属酶表型阳性菌株,另外3家医院中以东方医院检出率最高(27.3%),瑞金医院检出率最低(7.7%)。基因检测,浦东地区医院的OXA-23和ampC阳性率要比浦西地区医院的阳性率高。204株菌株OXA-51均为阳性,均未检测到OXA-24、OXA-58、IMP-1基因。在仁济医院东院和东方医院标本中检测到IMP-4和VIM-2基因,其他医院标本未检测到IMP-4和VIM-2基因。结论本地区分离到的鲍曼不动杆菌均检测出OXA-51,上海地区不同医院之间鲍曼不动杆菌产β-内酰胺酶情况略有不同。

表皮葡萄球菌生物膜形成与细菌耐药性的相关性分析

目的探讨表皮葡萄球菌临床分离株生物膜的形成情况,分析其生物膜形成与细菌耐药性的相关性。方法收集2014年1月至2015年2月住院患者血标本分离出的表皮葡萄球菌62株,采用生物膜形成试验和聚合酶链式反应(PCR)扩增试验检测细菌生物膜,并采用纸片扩散法(K-B法)进行细菌药物敏感性试验。结果利用生物膜形成试验检出生物膜阳性菌株23株,检出率为37.1%;PCR扩增试验检出icaA基因27株,检出率为43.5%,差异无统计学意义(P>0.05);两种方法同时阳性的菌株为14株。生物膜阳性菌株对所测抗菌药物的耐药率普遍高于生物膜阴性菌株,其中对庆大霉素、青霉素G、苯唑西林、左旋氧氟沙星、头孢西丁的耐药率比较差异有统计学意义(P<0.05),所有菌株对万古霉素、利奈唑胺、奎奴普丁/达福普汀均敏感。结论两种方法对表皮葡萄球菌生物膜的检出率无明显差异,生物膜阳性菌株耐药率普遍高于生物膜阴性菌株。

利福平、利奈唑胺与糖肽类抗生素对预防耐甲氧西林金黄色葡萄球菌耐药的比较

目的比较万古霉素、替考拉宁、利奈唑胺和利福平对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的防耐药突变选择能力。方法采用E-test法和混菌法(接种细菌浓度>1×1010CFU/mL)测定4种抗生素对MRSA的最低抑菌浓度(MIC)和预防耐药(突变)浓度(MPC),比较4种抗生素的MPC/MIC比值,即选择指数(SI);并结合最大血清浓度(Cmax),比较MPC/目标Cmax比值。结果万古霉素、替考拉宁、利奈唑胺、利福平对MRSA的MIC值分别为0.5、1.0、0.5、≤0.5μg/mL,对MRSA的MPC值分别为51.2、25.6、9.6、>1024.0μg/mL,SI值分别为102.4、25.6、19.2、>2048.0,MPC/目标Cmax比值分别为1.28、0.57、0.64、>107.80。结论利奈唑胺、替考拉宁较万古霉素、利福平对MRSA的"突变选择窗"较窄,在预防细菌产生耐药突变方面有较明显的优势。

葡萄球菌耐消毒剂基因qacA／B检测及临床意义

目的了解临床分离的葡萄球菌mecA基因及耐消毒剂基因qacA／B的存在状况。方法临床分离的40株葡萄球菌，分别用头孢西丁（30pg）筛查法和聚合酶链反应（PCR）法检测mecA基因，同时采用PCR法检测其耐消毒剂基因qacA／B。结果40株葡萄球菌中36株macA基因阳性，占90．0％（36／40）；11株检出qacA／B基因者均为mecA阳性葡萄球菌，其中10株为耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA），1株为耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌（MRCNS），qacA／B阳性率为27．5％（11／40）。结论含qacA／B基因的葡萄球菌全部为mecA基因阳性，提示对临床常用消毒剂耐药的金黄色葡萄球菌同时也对甲氧西林耐药。因此检测葡萄球菌耐消毒剂基因，对合理选用消毒剂，控制葡萄球菌感染传播具有临床意义。

上海地区临床分离念珠菌的耐药性监测

目的了解上海地区临床分离念珠菌的菌株分布以及对常用抗真菌药物的敏感性和耐药性。方法对上海地区27所医院临床分离念珠菌采用微量液基稀释法按统一方案进行抗真菌药物敏感性试验。按CLSI M60(2017年)判断结果。结果收集2017年8月1日-2018年4月30日上述医院临床分离念珠菌共354株,其中白念珠菌占41.81%(148/354),近平滑念珠菌占23.73%(84/354),热带念珠菌占15.54%(55/354),光滑念珠菌占9.32%(33/354),其他念珠菌占9.60%(34/354)。白念珠菌、近平滑念珠菌、光滑念珠菌耐药率与以往报道比较偏低或基本持平,无增长趋势,主要是对唑类抗真菌药物具有一定的耐药性。白念珠菌对氟康唑耐药率为1.45%、剂量依赖性敏感(SDD)率为4.35%,对伏立康唑耐药率和中介率均为2.17%;近平滑念珠菌对氟康唑呈现1.20%的SDD率,对伏立康唑呈现1.20%的中介率;光滑念珠菌对氟康唑表现出6.06%的耐药率和93.94%的SDD率;热带念珠菌耐药率呈增长趋势,对氟康唑表现出41.82%的耐药率和12.73%的SDD率,对伏立康唑表现出40.00%的耐药率和12.73%的中介率。白念珠菌、近平滑念珠菌、热带念珠菌对棘白菌素类药物尚未出现耐药菌株,仅1株光滑念珠菌对卡泊芬净耐药。结论上海地区临床念珠菌的分离率及菌株分布与国内外报道基本一致,临床分离菌株对常用抗菌药物的耐药率基本稳定,热带念珠菌对唑类抗真菌药物的耐药率呈上升趋势,应该引起临床医师重视。同时应进一步加强医院感染防控措施,继续做好真菌耐药性监测工作。

2019年上海市三级医院细菌耐药监测

目的监测上海地区2019年三级甲等医院临床分离菌对抗菌药物的耐药性。方法对上述医院临床分离菌采用纸片扩散法或自动化仪器法,按上海市细菌真菌耐药监测网技术方案进行抗菌药物敏感性试验。按2019年CLSI文件标准判断结果。结果收集2019年1-12月监测网内三级医院临床分离菌共119 318株,其中革兰阳性菌占29.1%(34 756/119 318),革兰阴性菌占70.9%(84 562/119 318)。金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌和其他凝固酶阴性葡萄球菌中甲氧西林耐药株(MRSA、MRSE和其他MRCNS)的检出率分别为43.4%、83.2%和76.6%。甲氧西林耐药株(MRSA、MRSE和其他MRCNS)对绝大多数抗菌药物的耐药率均显著高于甲氧西林敏感株(MSSA、MSSE和其他MSCNS)。MRSA对甲氧苄啶-磺胺甲[口恶]唑和利福平的耐药率低,分别为5.2%和3.0%,MRSE对利福平耐药率低(7.6%),未发现万古霉素和利奈唑胺耐药株。肠球菌属中粪肠球菌对多数测试抗菌药物的耐药率均显著低于屎肠球菌;粪肠球菌中未发现万古霉素耐药株,但对利奈唑胺耐药率达1.7%;屎肠球菌对万古霉素和利奈唑胺耐药率分别为0.4%和0.2%。2019年儿童和成人中分离的肺炎链球菌中青霉素敏感株(PSSP)分别占96.8%和96.9%,检出率较2018年有所上升,中介和耐药株(PISP和PRSP)的检出率则有所下降。肠杆菌目细菌对碳青霉烯类抗生素仍较敏感,多数菌属的耐药率低于20.0%(除克雷伯菌属外)。此外,不动杆菌属对亚胺培南和美罗培南的耐药率分别为63.4%和63.1%,铜绿假单胞菌对上述两药的耐药率分别为30.0%和26.1%。结论临床分离菌对常见抗菌药物的耐药性仍呈增长趋势,尤其是碳青霉烯类耐药革兰阴性杆菌。上海市三级医院的耐药形势仍然严峻,需各相关部门协作以遏制耐药细菌流行播散。

2011-2020年上海地区肠球菌属细菌耐药性变迁

目的了解2011—2020年上海地区临床分离肠球菌属细菌对各类抗菌药物的耐药性变迁。方法按照上海市细菌真菌耐药监测网统一方案进行肠球菌属细菌的抗菌药物敏感性试验。结果2011—2020年共分离到非重复肠球菌属细菌113391株,主要为粪肠球菌与屎肠球菌,分别占54.5%和40.1%。菌株主要分离自尿液标本。10年间粪肠球菌和屎肠球菌在当年肠球菌属细菌中的占比均呈上升趋势。粪肠球菌和屎肠球菌对万古霉素和利奈唑胺的耐药率均保持在较低水平(<2%)。万古霉素耐药肠球菌(VRE)在所有肠球菌属细菌中占比为0.5%(541/113391),其中万古霉素耐药屎肠球菌与万古霉素耐药粪肠球菌分别占80.2%(434/541)与19.8%(107/541)。结论肠球菌属临床分离菌对万古霉素和利奈唑胺仍保持较好的敏感性,近年来VRE的分离率呈现下降趋势,提示加强细菌耐药监测对控制耐药细菌的流行播散是十分必要的。

环介导等温扩增技术检测呼吸道样本中肺炎克雷伯菌

目的:建立环介导等温扩增技术(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)检测呼吸道感染患者痰液中肺炎克雷伯菌(Klebsiella pneumoniae,Kpn)的方法并进行初步应用。方法:基于Kpn phoE基因设计4条特异性引物,对反应条件中的Mg^2+和甜菜碱浓度进行优化,建立检测Kpn LAMP方法并进行特异性和灵敏度试验;收集308例呼吸道感染患者痰液样本,进行细菌培养法、LAMP法、DNA测序技术检测,评估LAMP检测体系。结果:8 mmol/L、0.4 mmol/L确定为Mg^2+和甜菜碱的最佳扩增浓度;该体系特异性强,与其他菌株无交叉反应,灵敏度为104 CFU/mL;临床样本中Kpn的LAMP检出率(53.89%)高于培养法(42.20%),差异有统计学意义(χ^2=161.65,P<0.05);LAMP法与细菌培养法在Kpn阳性样本、无细菌生长样本、非Kpn其他细菌阳性样本中的一致率分别为96.15%、100%、65.25%,46例不一致样本经DNA测序验证,LAMP法与测序符合率为86.95%(40/46);LAMP法和DNA测序法对131例样本同时进行检测,经Kappa检验两者具有极好的一致性(Kappa系数=0.817)。结论:与细菌培养法相比,LAMP法具有准确性高、灵敏度高、特异性强、反应省时等优势,可以作为肺炎克雷伯菌的快速检测方法。

表皮葡萄球菌icaADBC操纵子检出与细菌耐氨基糖苷类抗菌药物的关系

目的分析临床分离表皮葡萄球菌对不同类型氨基糖苷类抗菌药物的耐药特征;分析icaADBC操纵子在临床分离的表皮葡萄球菌中的检出及与细菌耐药的关系。方法收集2013年1~10月上海市东方医院临床分离的表皮葡萄球菌77株,采用纸片扩散法检测细菌4种氨基糖苷类抗菌药物（庆大霉素、链霉素、奈替米星和阿米卡星）药敏试验特征;构建icaADBC特异性引物,采用聚合酶链反应扩增技术检测77株细菌中icaADBC的分布状况。结果结果77株表皮葡萄球菌对氨基糖苷类抗菌药物耐药率较高,分别为庆大霉素：62.3%,链霉素：61.0%,阿米卡星：22.1%,奈替米星：23.4%。icaADBC操纵子的检出率为20.8%,ica阳性菌株与阴性菌株对氨基糖苷类抗菌药物耐药性比较差异有统计学意义（P〈0.05）。结论临床分离的icaADBC操纵子阳性表皮葡萄球菌对氨基糖苷类抗菌药物耐药率较高。

产志贺毒素大肠埃希菌生物被膜形成能力与毒力基因表达的关系

目的探讨临床腹泻患者产志贺毒素大肠埃希菌（STEC）生物被膜形成能力与致病毒力基因表达的关系。方法收集从520例临床腹泻患者标本中检测分离到的STEC,进行体外药敏试验和生物被膜形成能力定量分析;应用多重聚合酶链反应（PCR）检测产志贺毒素相关基因stx1、stx2,实时定量逆转录PCR（RT-PCR）检测eae、ehx A基因表达。以健康体检人群粪便标本中分离的98株大肠埃希菌作为对照菌株。结果从520例腹泻患者标本中分离出328株大肠埃希菌,其中stx1、stx2基因阳性菌（即STEC）78株（23.8%）。78株STEC中产生物被膜菌57株（73.1%）,eae和ehx A基因的相对表达量分别为6.57（2.82-27.8）、1.81（1.07-5.28）;不产生物被膜菌21株（26.9%）,eae和ehx A基因的相对表达量分别为3.41（0.96-12.1）、1.76（0.89-6.06）;另分离出副溶血弧菌18株[其中产生物被膜菌10株（55.6%）]、奇异变形杆菌3株。98株对照菌中产生物被膜菌39株（39.7%）,eae和ehx A基因的相对表达量分别为1.02（0.86-3.47）、1.03（0.88-3.03）。产生物被膜STEC对氨苄西林/舒巴坦、复方磺胺甲噁唑、环丙沙星的耐药率明显高于不产生物被膜STEC和对照菌株。结论STEC生物被膜形成率明显高于健康人群定植大肠埃希菌,产生物被膜STEC的eae基因表达明显提高;ehx A基因表达与不产生物被膜的STEC比较无明显变化。

自溶素基因与表皮葡萄球菌生物膜形成相关性研究

目的研究自溶素(atlE)基因与表皮葡萄球菌生物膜形成的相关性。方法收集2015年6月至2016年6月该院临床分离的表皮葡萄球菌64株进行研究,用生物膜形成试验检测细菌生物膜,采用聚合酶链反应扩增atlE基因,分析atlE基因与表皮葡萄球菌生物膜形成的相关性。结果检出生物膜阳性菌株24株,检出率为37.5%;检出atlE基因菌株31株,检出率为48.4%;atlE基因与表皮葡萄球菌生物膜形成有明显的相关性(P<0.05)。结论表皮葡萄球菌有生物膜形成能力,atlE基因与表皮葡萄球菌生物膜形成相关。

设立居住权对银行抵押权的影响及应对策略

本文分析了《民法典》中新增的居住权这一用益物权对银行业金融机构抵押权的影响,并探讨了实践中可能出现的权利竞合问题。由于《民法典》未明确规定抵押权与居住权并存时的处理方式,这可能对银行的债权清收产生一定的影响。为应对这一挑战,本文提出了保障银行抵押权实现的意见,包括完善抵押权登记制度,保障银行权益;加强风险评估,合理确定抵押物价值;建立完善的抵押物处置机制,降低处置风险等。通过这些策略,银行业金融机构可以更好地应对居住权设立带来的影响,确保债权的有效清收,提升资产质量,并防范潜在的风险。

icaADBC、Tn4001与表皮葡萄球菌耐氨基糖苷类抗生素的关系

目的分析转座子Tn4001和操纵子ica ADBC与临床分离表皮葡萄球菌耐氨基糖苷类抗生素的关系。方法收集表皮葡萄球菌临床分离株77株,利用纸片扩散法检测细菌4种氨基糖苷类抗生素(庆大霉素、链霉素、奈替米星和阿米卡星)药敏特征;构建Tn4001和ica ADBC特异性引物,利用PCR扩增技术检测77株细菌Tn4001和ica ADBC。结果77株细菌对氨基糖苷类抗生素耐药率较高,分别为庆大霉素:62.3%;阿米卡星:22.1%;链霉素:61.0%;奈替米星:23.4%。Tn4001的检出率为58.4%,45株Tn4001阳性菌中,对庆大霉素、阿米卡星、链霉素、奈替米星耐药率分别为93.3%、33.3%、88.9%、37.8%。ica ADBC的检出率为20.8%;16株阳性菌中,对庆大霉素耐药率为93.8%;对阿米卡星耐药率为62.5%;对链霉素耐药率为93.8%;对奈替米星耐药率为62.5%。结论临床分离表皮葡萄球菌操纵子ica ADBC阳性菌株中通常伴随有转座子Tn4001检出,携带ica ADBC或Tn4001的菌株对氨基糖苷类抗生素耐药率较高。