C-藻蓝蛋白纳米微球的制备及体外抗脂多糖联合海水诱导急性肺损伤的作用机制研究

目的制备C-藻蓝蛋白纳米微球(CPC-NPs)并评价其对脂多糖(LPS)联合海水诱导急性肺损伤的体外作用机制。方法采用离子交联法,以CPC为药物、羧甲基壳聚糖(CMCS)为载体、CaCl2为交联剂制备CPC-NPs,对CPC-NPs进行基础表征。小鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞MLE-12和巨噬细胞RAW264.7均分为7组:正常组(Con组),模型组(Mod组),空白NPs组,CPC-NPs 30、60、120、240μg/mL组。除Con组外其余各组均采用10μg/mL LPS和25%海水联合处理6 h,造模后各给药组加相应剂量药物处理24 h。检测MLE-12细胞中丙二醛(MDA)、总抗氧化能力(T-AOC)、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)水平,B细胞淋巴瘤2(Bcl-2)、Bcl-2关联X蛋白(Bax)、胱天蛋白酶-3(caspase-3)蛋白和mRNA,以及CAT、谷胱甘肽S-转移酶(GST)mRNA表达水平;检测RAW264.7细胞中白细胞介素1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、IL-6水平,NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)、剪切的caspase 1(cleaved-caspase-1)蛋白及IL-1β、TNF-α、IL-6、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)mRNA表达水平。结果制备的CPC-NPs粒径为(675.69±64.58)nm,Zeta电位为(-20.11±0.98)mV,多分散系数为0.455±0.010(n=3);包封率为35.60%,载药量为16.13%;形态为规则的球形;其中药物可持续释放30h以上。与Mod组比较,CPC-NPs各浓度组MLE-12细胞中T-AOC、SOD、CAT(除CPC-NPs 30μg/mL组外)、GSH-Px水平和CAT、GST mRNA表达水平以及Bcl-2/Bax蛋白比值和mRNA比值均显著升高,MDA水平和caspase-3蛋白及mRNA表达水平均显著降低(P<0.01或P<0.05)。与Mod组比较,CPC-NPs各浓度组RAW264.7细胞中IL-1β、TNF-α、IL-6水平和NLRP3、cleaved-caspase-1蛋白表达水平以及IL-1β、TNF-α、IL-6、iNOS mRNA表达水平均显著降低(P<0.01或P<0.05)。结论成功制备了具有肺靶向性和缓释性的CPC-NPs。CPC-NPs可以通过抗氧化应激及抑制细胞凋亡和炎症反应来缓解LPS联合海水诱导的急性肺损伤。

藻蓝蛋白对小鼠皮肤损伤的治疗效果

为探讨藻蓝蛋白(CPC)对小鼠皮肤损伤的治疗效果,将ICR小鼠分为正常对照组(Con)、模型组(Mod)、空白敷料组(BD)、藻蓝蛋白敷料组(CPC TDD)和藻蓝蛋白敷料+藻蓝蛋白腹腔注射组(CPC+ip.)5个处理组进行小鼠烫伤试验。结果表明,CPC TDD组和CPC+ip.组伤口愈合时间最短,可以降低血清中丙二醛(MDA)含量,提高超氧化物歧化酶(SOD)含量,降低血清中炎症因子TNF-α和IL-6的水平。藻蓝蛋白通过增强机体抗氧化能力,降低炎症因子水平,从而对皮肤损伤的愈合起到促进作用。

金线莲多糖对糖尿病小鼠的作用研究

目的:探讨金线莲多糖(ARPS)对链脲佐菌素(STZ)诱导糖尿病小鼠的治疗作用。方法:通过水提醇沉法获得金线莲多糖。取50只高脂饲料饲喂4周、禁食12h的ICR小鼠,腹腔注射150mg·kg^(-1)/BW STZ。72h后,测量小鼠空腹血糖,小鼠血糖>16.7mmol/L表明造模成功。将造模成功的ICR小鼠随机分为阳性对照组、模型组和金线莲多糖低、中、高剂量组。阳性对照组按200mg·kg^(-1)的二甲双胍灌胃给药,金线莲多糖低、中、高剂量组分别按50mg·kg^(-1)、100mg·kg^(-1)、200mg·kg^(-1)灌胃给药,连续给药14d。模型组用等体积生理盐水灌胃。末次给药前禁食12h,给药1h后眼球取血,离心取血清待测。测定各组小鼠血糖含量和血清中总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)含量,观察胰腺组织形态学变化。结果:阳性对照组小鼠的体重下降不明显,胰岛细胞受损减少,空腹血糖值水平降低。与模型组相比,金线莲多糖中、高剂量组均可降低小鼠TG、TC、LDL-C水平(P<0.05),升高HDL-C水平(P<0.05),金线莲多糖高剂量组更为明显;金线莲多糖中、高剂量组均可显著降低谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)含量(P<0.05),有效保护肝组织。结论:金线莲多糖可以降低血糖,调节脂质代谢,保护胰腺和肝损伤,对胰腺的保护作用与调节糖脂代谢有关。

肥大细胞对布鲁菌S_2株的模式识别及活化效应的体外研究

目的探讨体外培养的肥大细胞对猪布鲁菌S2株的模式识别及活化效应。方法骨髓来源的肥大细胞在体外感染猪布鲁菌S2株,瑞氏-姬姆萨染色法观察肥大细胞形态学变化,甲苯胺蓝染色法观察肥大细胞脱颗粒情况;间接ELISA检测S2株感染后1 h和12 h肥大细胞释放组胺、IFN-γ、IL-12的含量;激光共聚焦显微镜检查肥大细胞对S2株的摄取状态;RT-PCR法观察S2株感染后12 h和24 h肥大细胞TLR4和TLR8基因的mRNA的表达;流式细胞术观察S2株感染后24 h肥大细胞TLR4和TLR8蛋白的表达。结果感染猪布鲁菌S2株的肥大细胞形态出现了明显的变化,S2株感染后1 h即出现明显的脱颗粒现象;S2株感染后1 h、12 h肥大细胞上清中组胺含量明显高于正常对照组(P<0.05),未检测到IFN-γ、IL-12;共聚焦显微镜检查发现感染30 min和1 h S2株主要黏附在肥大细胞表面,而未被肥大细胞摄入到细胞内;S2株感染12 h后肥大细胞TLR4mRNA的表达明显高于正常对照组,24 h时表达又减弱,和正常对照组相比,S2株感染24 h时肥大细胞TLR4蛋白的表达增加;S2株感染12 h和24 h后肥大细胞TLR8 mRNA和蛋白的表达无变化。结论 S2株能黏附在肥大细胞的表面并能激活肥大细胞,引起其脱颗粒,释放组胺,但在实验观察的时间点内未见IFN-γ和IL-12的分泌,其机制可能是S2株通过TLR4被肥大细胞识别,但不能被肥大细胞摄取。

负载布氏菌WboA^(-/-)S_2株的树突状细胞对淋巴结T细胞的活化作用

目的:研究猪种布氏菌WboA-/-S2株对骨髓源性树突状细胞(BMDC)的生物学特性及启动T细胞应答能力的影响。方法:用粗糙型布氏菌WboA-/-S2株负载BALB/c小鼠的BMDC,并以光滑型S2株作为对照,采用瑞氏-姬姆萨染色观察细胞形态学变化并计算吞噬率;用固体培养基涂布法测定负载后不同时间点细胞的载菌量;用ELISA检测负载后不同时间点BMDC分泌IL-12和TNF-α的量以及与淋巴结T细胞共培养上清中IFN-γ和IL-4的含量。结果:BMDC对WboA-/-S2株的吞噬率高于对S2株的吞噬率(P<0.05),负载1小时BMDC的载菌量明显高于负载S2株的载菌量(P<0.05),但在24小时,WboA-/-S2株负载BMDC的载菌量明显低于S2株负载组(P<0.05)。WboA-/-S2株负载BMDC不同时间点上清中IL-12和TNF-α含量明显高于S2株负载组(P<0.05)。且负载WboA-/-S2株的BMDC刺激T细胞所产生的IFN-γ量均明显高于S2株(P<0.05)。结论:WboA-/-S2株较S2株更易被BMDC吞噬和杀死,其活化BMDC、诱导T细胞应答的能力也明显强于S2株。

布鲁菌S_2株诱导小鼠腹腔巨噬细胞凋亡及免疫激活的研究

目的:研究猪布鲁菌S2株诱导巨噬细胞(Mφ)的凋亡、活化及对T淋巴细胞的激活作用。方法:用猪布鲁菌S2株体外感染Mφ,并以大肠埃希菌作为对照,采用瑞氏-姬姆萨染色观察细胞形态学变化;流式细胞仪测定感染后24小时Mφ的凋亡率;ELISA法检测感染后不同时间点Mφ培养上清中IL-12和TNF-α及感染后Mφ与T细胞共培养上清中IFN-γ的含量的变化。结果:瑞氏-姬姆萨染色显示布鲁菌S2株感染Mφ后1小时体积明显增大,突起增多,胞浆内可见大量布鲁菌;6小时细胞内细菌减少,但胞膜仍完整;至12小时细胞核固缩,胞膜失去完整性。流式细胞仪检测结果显示,感染后24小时Mφ的凋亡率均明显高于正常对照组及大肠埃希菌感染组(P<0.05)。ELISA结果显示S2株感染Mφ12、24、48小时的上清中IL-12和TNF-α含量均明显高于正常对照组(P<0.01),S2株感染后Mφ与T细胞共培养24、48、72小时产生的IFN-γ量高于正常对照组(P<0.05),但低于大肠埃希菌感染组(P<0.01)。结论:S2株可以引起Mφ的凋亡,同时可诱导Mφ活化,产生IL-12和TNF-α;布鲁菌感染后的Mφ可诱导T细胞活化,产生IFN-γ免疫应答。

布鲁菌S_2株感染巨噬细胞与树突状细胞的比较

目的比较猪布鲁菌S2菌株感染巨噬细胞和树突状细胞(DC)的特点。方法采用瑞氏-吉姆萨染色法观察细胞形态并计算吞噬率;用ELISA法测定细胞培养上清中的IL-12和TNF-α以及与T细胞共培养上清中IFN-γ和IL-4的含量;用annexin-Ⅴ-FITC/PI双染,流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果感染S2菌株1 h后巨噬细胞的吞噬率为(43.6±4.8)%,显著高于DC的吞噬率(13.08±2.36)%(P<0.05);正常巨噬细胞凋亡率为(3.09±1.21)%感染S2菌株后6、12和24 h的凋亡率分别为(19.89±1.36)%、(22.73±2.21)%和(42.44±3.12)%,明显高于DC感染后相同时间点的凋亡率(P<0.05),正常DC凋亡率为(1.82±0.01)%,DC感染S2菌株6、12、24 h凋亡率分别为(3.76±0.13)%、(7.87±0.56)%和(9.08±0.23)%。巨噬细胞在感染S2菌株后24、48 h分泌的IL-12均明显低于DC分泌IL-12的量(P<0.05);24、48、72 h分泌的TNF-α量均明显低于DC(P<0.01);在24、48、72 h与T细胞共培养分泌的IFN-γ含量均明显低于DC(P<0.01)。结论巨噬细胞吞噬猪布鲁菌S2菌株的能力高于DC,猪布鲁菌S2感染后巨噬细胞的凋亡率高于DC,感染S2菌株后DC的活化及提呈抗原并激活T细胞的能力强于巨噬细胞。

芙蓉菊多糖对链脲佐菌素诱导的糖尿病小鼠作用研究

目的:探讨芙蓉菊多糖对链脲佐菌素(STZ)诱导的糖尿病小鼠的治疗作用。方法:取50只ICR小鼠高脂饲料饲喂4周后,禁食12h,腹腔注射150mg·kg-1/bw STZ。72h后测量小鼠空腹血糖,血糖>16.7mmol/L表明造模成功。将造模成功的小鼠随机分为模型组,阳性对照组,芙蓉菊多糖低、中、高剂量组。阳性对照组按200mg·kg-1盐酸二甲双胍灌胃给药,芙蓉菊多糖低、中、高剂量组分别按50mg·kg-1、100mg·kg-1、200mg·kg-1灌胃给药,连续给药14d,模型组给予等体积的生理盐水。末次给药前禁食12h,给药1h后眼球取血,离心取血清待测。测定各组小鼠血糖含量和血清中甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)的含量,观察胰腺组织形态学变化。结果:给药组小鼠的体质量无明显下降,胰岛细胞受损减少,空腹血糖值水平降低。与模型组相比,芙蓉菊多糖中、高剂量组均可降低小鼠TG、TC、LDL-C水平(P<0.05),升高HDL-C水平(P<0.05),芙蓉菊多糖高剂量组效果更为明显;芙蓉菊多糖中、高剂量组均可显著降低丙氨酸氨基转移酶(ALT)和门冬氨酸氨基转移酶(AST)含量(P<0.05),有效保护肝组织。结论:芙蓉菊多糖可以降低血糖,调节脂质代谢,保护胰腺和肝损伤,其对胰腺的保护作用与调节糖脂代谢有关。

紫草素对完全弗氏佐剂诱导的类风湿性关节炎小鼠模型的治疗作用

为探讨紫草素对类风湿关节炎(RA)的影响,将ICR小鼠随机分为4组:正常对照组和3个试验组(模型组、阳性对照组、紫草素组)。造模15 d后给药治疗60 d,阳性对照组灌胃美洛昔康[50 mg/(kg·d)],紫草素组灌胃紫草素[2 mg/(kg·d)],正常对照组和模型组灌胃等体积的生理盐水,分离小鼠右足踝关节部位,对滑膜炎症程度(0-3级)和软骨破坏程度(0-4级)以及骨浸润进行评估,分离小鼠胸腺和脾脏,计算胸腺指数和脾脏指数,并对各组小鼠进行组织病理学的评价和部分血清生化指标(致炎因子和抗氧化因子)的分析测定。结果表明,紫草素能显著改善小鼠的关节红肿症状。紫草素组中一氧化氮(NO)、肿瘤因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)和白细胞介素1β(IL-1β)含量显著低于AA模型组,血清中丙二醛(MDA)含量显著低于AA模型组,超氧化物歧化酶(SOD)酶活力显著高于AA模型组,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。紫草素可以通过降低炎症因子水平,提高机体抗氧化能力从而减轻RA的炎症反应。

浙贝母花不同化学成分提取物体内抗氧化作用

目的提取浙贝母花中的不同化学成分,分析其体内抗氧化能力。方法采用超声提取法和萃取法提取浙贝母花中的不同化学成分。皮下注射D-半乳糖诱导小鼠氧化衰老模型。随机将小鼠分为7组:空白组、D-半乳糖诱导模型组、维生素C阳性对照组、浙贝母花给药组(乙醇提取物组、石油醚萃取物组、乙酸乙酯萃取物组、正丁醇萃取物组)。连续皮下注射、灌胃4周后,眼球取血并处死,解剖取其肝脏、脑组织、脾脏和胸腺组织,测定肝脏、脑组织抗氧化指标。结果与对照组相比,模型组小鼠脏器指数均降低(P<0.05或P<0.01),血清、肝脏和脑组织中SOD水平降低(P<0.01),肝脏和脑组织中CAT水平降低(P<0.01或P<0.001),血清、肝脏和脑组织中MDA水平提高(P<0.01),肝脏和脑组织GSH-PX水平降低(P<0.01或P<0.001)。与模型组比较,给药组小鼠脏器指数、SOD水平、CAT水平、GSH-PX水平均提高,MDA水平均降低(P<0.05)。结论浙贝母花浸提物中不同物质成分在增加实验小鼠抗氧化酶活性、保护机体内的还原性物质不被氧化、减少脂质过氧化产物、延缓氧化过程等方面均有显著作用。

在特殊时期视域下开展农业企业人力资源管理的思路

农业企业是指从事农、林、牧、渔业等生产经营活动的盈利性经济组织,主要是以动植物和微生物作为劳动对象,以土地、水域为基本生产资料,通过人的劳动,利用机械化、现代化的生产工具对动植物和微生物进行人工培育或饲养,通过种植、养殖、采集、渔猎等生产经营而取得人们所需产品的生产部门。面对特殊时期背景下的机遇与挑战,农业企业应当主动求变,加快人力资源管理体系的变革,探索适应时代、适合自身的创新路径。

浙贝母花醇提物体内抗氧化作用研究

目的:研究浙贝母花乙醇提取物体内抗氧化作用。方法:利用超声提取法制备浙贝母花乙醇提取物,测定DPPH自由基清除率。将ICR小鼠随机分为正常组、阳性组(灌胃维生素C)、给药组(灌胃乙醇提取物按体质量0.2g/kg、0.4g/kg和0.8g/kg),处理2周。实验末次给药24h后,眼球取血,摘除肝脏及脑组织,测定相关的生化指标。结果:浙贝母花乙醇提取物具有较好的体外自由基清除力,能显著提高小鼠体内血清、肝组织和脑组织中的总超氧化物歧化酶(T-SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)活性,降低丙二醛(MDA)水平,且中、高剂量组改善更明显(P<0.05),给药浓度与效果呈正比。结论:浙贝母花乙醇提取物具有一定的体内抗氧化作用,为其进一步开发利用提供依据。

铜藻中岩藻黄质对H_(2)O_(2)诱导RAW264.7细胞氧化损伤的保护作用

探讨铜藻中岩藻黄质对H_(2)O_(2)诱导RAW264.7细胞氧化损伤的保护作用。用H_(2)O_(2)建立小鼠巨噬细胞RAW264.7的氧化应激模型,实验设置空白组、H_(2)O_(2)阴性对照组、VC阳性对照组、岩藻黄质处理组。试剂盒法测定细胞中SOD、GSH-Px活力和细胞培养液上清NO、LDH释放量。结果表明铜藻中岩藻黄质呈剂量依赖性保护双氧水刺激的RAW264.7细胞的损伤,提高了SOD及GSH-Px的表达,降低NO及LDH的释放。总之铜藻中岩藻黄质具有较强的抗氧化活性,并且可以通过降低自由基水平和增强细胞内抗氧化酶的活性来修复H_(2)O_(2)诱导RAW264.7细胞的损伤。

赤瓟皂苷对酒精性肝损伤的保护机制研究

[目的]探讨赤瓟皂苷对酒精诱导的小鼠肝损伤的肝保护作用。[方法]通过乙醇提取法从赤瓟的根、果实和叶中获得赤瓟皂苷。将ICR小鼠分为7组,包括正常对照组、阳性组、模型组、纯药组(0.30 g/kg赤瓟皂苷)和3个试验组。阳性组、模型组和试验组先用浓度为56%红星二锅头造模,试验组灌胃赤瓟皂苷(0.15、0.30和0.60 g/kg),阳性组灌胃护肝片处理28 d。对肝组织进行组织学分析,并测定相关血浆生化指标。[结果]赤瓟皂苷治疗显著改善了小鼠酒精性肝损伤引起的高死亡率,并且中浓度赤瓟皂苷显著降低血清AST、ALT及AST/ALT水平,并提高肝脏AST、ALT及AST/ALT水平,改善了酒精诱导的肝细胞损伤。赤瓟皂苷能降低髓过氧化物酶(MPO)以及血清和肝脏中的丙二醛(MDA)水平,抑制活性氧(ROS)的过量产生,促进血清及肝脏中肝谷胱甘肽(GSH)的恢复,提高超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)的酶活性。[结论]赤瓟皂苷通过提高抗氧化标志物水平,降低氧化应激标志物水平,从而改善酒精诱导的肝损伤。

东海乌参皂苷提取工艺优化与抗氧化研究

优化了东海乌参皂苷的提取工艺,同时对总皂苷的抗氧化能力进行探究。分别采用单因素和正交试验对乙醇浓度、提取温度、提取时间和料液比4个因素进行优化,确定皂苷提取的最佳工艺条件,并通过测定总皂苷清除超氧阴离子(O_(2)^(-)·)、羟基自由基(·OH)和1,1-二苯基-2-苦基肼(DPPH·)的能力,分析总皂苷的抗氧化活性。结果表明东海乌参皂苷的提取最佳工艺条件为乙醇浓度60%、提取温度60℃、提取时间3 h和料液比1:13,抗氧化结果显示东海乌参总皂苷有良好的O_(2)^(-)·和DPPH·清除能力。

虎皮楠生物碱daphnioldhanin E诱导HepG2细胞类凋亡研究

目的研究虎皮楠生物碱daphnioldhanin E诱导人肝癌HepG2细胞死亡的机制。方法 HepG2细胞用daphnioldhanin E(10、30μg/mL)处理后,瑞姬氏染色法观察细胞形态变化,DNA琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡情况,MTT法检测细胞凋亡抑制剂Z-VAD-FMK对daphnioldhanin E抗癌活性的影响,分光光度法检测caspase-3酶活性的变化。结果瑞姬氏染色显示,HepG2细胞经daphnioldhanin E处理48 h后,细胞体积增大,细胞核清晰可见,周围出现大量的胞浆空泡,但细胞膜仍保持完整;DNA琼脂糖凝胶电泳结果可见大量50～200 bp的片段;MTT法检测结果显示Z-VAD-FMK不能阻断daphnioldhanin E对HepG2细胞增殖的抑制作用;分光光度法测定显示,daphnioldhanin E给药组与对照组HepG2细胞caspase-3酶活性无明显变化,表明daphnioldhanin E对HepG2细胞的杀伤作用与caspase-3激活通路无关。结论Daphnioldhanin E可能通过类凋亡方式明显诱导HepG2细胞程序性死亡,该过程不依赖于caspase-3途径。