猪瘟病毒E2蛋白4重复抗原表位的构建及抗原活性研究

利用PCR方法获得 4次重复的猪瘟病毒E2蛋白中和性抗原表位基因 ,将其克隆到 pGEM 5ZF(+)载体 ,测序正确后亚克隆到pGEX 3X载体构建得到重组质粒pGEX 3X 4P。重组质粒在大肠杆菌中诱导表达了含 4重复抗原表位的融合蛋白。该蛋白经纯化后 ,利用间接ELISA检测其与血清的反应性 ,结果表明 ,纯化的融合蛋白与兔抗CSFVE2血清有很强的反应性 ,与兔抗BVDVE2血清不反应 。

当前消防部队灭火救援工作存在问题及解决对策

近年来,全国消防部队开展了轰轰烈烈的执勤岗位大练兵工作,灭火救援一线官兵素质普遍得到提高,然而,随着社会的发展,兵员结构的变化和兵役制度的改革,消防部队在参加灭火救援工作还存在一些问题。分析了当前消防部队参加灭火救援工作存在的问题,并提出了相应解决对策。

对当前消防部队信息化建设的思考

目前消防部队信息化建设取得了初步成效,但与部队需求还存在一定差距,存在着对信息化建设认识不够高、信息化应用不深入、专业人才偏少、人员素质偏低、投入资金不足等问题,并针对存在的问题提出了解决对策。

高校学生宿舍楼初期火灾的扑救与逃生

高校学生公寓、宿舍是学生休息、生活、学习的综合场所,由于当前学生数量成倍增长、电脑电视进入宿舍,学生生活学习用品增多,使得楼内可燃物随之增多,加之一些学生违反宿舍安全管理规定,不安全隐患急剧增多,火灾发生的几率明显增大。阐明了高校学生宿舍楼初期火灾的扑救办法和火灾中的逃生技巧,以期最大限度的减少财产损失和人员伤亡。

牛病毒性腹泻病病毒Changchun184株E2基因的克隆及在大肠杆中的高效表达

根据GenBank已发表的多个BVDV_1序列的比较分析结果设计引物 ,应用RT_PCR及套式PCR克隆得到包含Changchun184 (CC_184 )株E2基因的片段F2 /R2 ,克隆、测序分析结果表明该片段大小为 1391bp ,软件分析结果表明CC_184株E2基因长度为 112 2bp(GenBankaccessionnumber:AF5 2 6 380 )。通过基因操作构建得到表达完整E2蛋白和去除E2蛋白C_端疏水区的重组质粒 pET2 8a_BE2和 pET2 8a_BE2m ,转化大肠杆菌并诱导目的蛋白表达 ,SDS_PAGE检测结果表明重组菌能表达目的蛋白 ,其表达量分别占菌体总蛋白的 6 2 5 %和 35 7%。

ALV-J人工感染鸡病毒血症和抗体反应动态

【目的】了解J亚群白血病病毒(ALV-J)感染鸡后抗体反应和带毒排毒的规律,以便为制定鸡群中ALV-J感染的预防控制和净化措施提供可靠的流行病学依据。【方法】1日龄和49日龄SPF鸡分别通过注射、口服和接触感染ALV-J,对各感染组的病毒血症、泄殖腔排毒及抗体反应进行动态检测。【结果】不同日龄感染ALV-J后的病毒血症和抗体的动态有很大差异。1日龄SPF鸡注射感染ALV-J后,自2周起开始可检出泄殖腔p27抗原和病毒血症。注射感染组有71%(5/7)鸡在26周内持续带毒排毒,其中有3只鸡在感染后45周仍带毒排毒。其中一只鸡在16周时产生一过性抗体,另两只鸡完全没有抗体。口服感染组仅11%(1/9)鸡呈持续带毒排毒,44%(4/9)鸡仅呈短暂性带毒排毒,且自第8周起即可检测到较高的抗体水平。同笼接触组既不带毒排毒,也无抗体水平,表明未发生传染。49日龄SPF鸡即使注射攻毒后,在19周内的5次检测中,p27抗原和病毒血症均为阴性。攻毒后1周开始出现抗体反应并维持一段时间。49日龄SPF鸡经口服和接触感染,病毒血症和泄殖腔p27均为阴性,也无抗体反应。【结论】1日龄SPF鸡感染ALV-J很容易发生免疫耐受,感染鸡持续带毒排毒而不产生抗体;49日龄SPF鸡感染后,1周可产生高水平的抗体,但不带毒排毒。不同接种方式对ALV-J感染的动态有很大影响,注射感染诱发的病毒血症和耐受性病毒血症显著高于口服感染。

系统发生分析发现牛病毒性腹泻病病毒新基因亚型

本研究对我国首次分离获得的牛源牛病毒性腹泻病毒(BVDV)毒株Changchun 184(CC-184)和猪源牛病毒 性腹泻病毒ZM-95进行了遗传衍化关系研究。选择主要抗原E2基因为研究对象,首先应用RT-PCR及套式PCR 克隆得到CC-184和ZM-95的E2片段,通过序列测定发现CC-184和ZM-95 E2基因长度分别为1,122bp和1, 125bp,各自编码374和375个氨基酸残基。核酸序列同源性比较和系统发生分析表明2株病毒均属于BVDV-1, CC-184与Osloss亲缘关系最近,都属于已有的b基因亚型,其E2基因同源性达91．8％。而ZM-95的E2基因有 一个特征性的变异区,包含一个密码子序列插入,这一变异区编码了一段有别于其他瘟病毒的五肽氨基酸序列 HYKKK。结果还表明ZM-95与BVDV-1现有的5个基因亚型的亲缘关系均较远,E2基因同源性最高(与Oregon c24v)只有72．4％。而BVDV-1亚型内毒株间的同源性大于85％,亚型间的同源性在69％～75％之间,充分说明 ZM-95是BVDV-1中一个新发现的基因亚型。通常认为猪源BVDV来源于牛,应该与牛源BVDV有十分近的遗 传关系,但是本研究发现ZM-95与其他已知牛源BVDV较低的基因同源性说明猪源BVDV还具有独立的遗传衍 化与传播来源的可能性。

T7 RNA多聚酶基因的克隆、序列测定及其在E.coli中的表达

从 BL 2 1(DE3) E.coli菌株中以 PCR的方法扩增得到了与 T7RNA多聚酶 (T7RNA polymerase,T7pol)基因大小一致的 DNA片断。将 PCR产物纯化后直接克隆到 p GEM- T载体中 ,经酶切鉴定和 DNA序列分析表明克隆得到了正确的 T7pol基因。将 T7pol基因亚克隆入 p ET- 2 8b(+)中 ,构建得到原核表达质粒 p ET2 8T7。该质粒的 BL 2 1(DE3) p L ys S转化菌在 IPTG的诱导下可表达约 9880 0的蛋白 ,这与 T7pol的相对分子质量一致。将该质粒转化DH5 α、JM10 9、HB10 1、BL2 1(DE3)和 BL2 1(DE3) p L ys S等 5种不同的宿主菌 ,仅有转化 T7pol酶活性受到抑制的宿主菌 BL2 1(DE3) p L ys S才能得到转化子 ,而其余 4种 T7T7pol酶活性不受抑制的 E.coli宿主菌不能得到转化子。p ET2 8T7原核表达质粒这种仅能在 T7pol酶活性受到抑制的宿主菌中才能存活的现象说明本试验所克隆的 T7pol基因能正确表达出具有

A和B亚群禽白血病病毒gp85基因的表达及其抗血清的亚群特异性比较

为制备快速鉴定禽白血病病毒A和B亚群(Avian leukosis virus subgroup A/B,ALV-A/B)的特异性诊断试剂,并鉴定分析ALV-A SDAU09C1株和ALV-B SDAU09C2株抗血清的亚群特异性,将两株病毒的gp85基因进行克隆、原核表达后,免疫家兔分别制备抗ALV-A和ALV-B的血清。血清交叉中和反应显示,SDAU09C1株和SDAU09C2株间的抗原同源性相关系数r=0.366,属于不同亚群;间接免疫荧光表明,两种抗血清均与ALV-A和ALV-B反应,但与ALV-J无反应。结果表明本试验制备的重组蛋白具有较好的反应原性,制备的二种兔抗血清可快速识别ALV-A/B与ALV-J。

水稻的4个NADP-ME基因具有不同的表达模式

在高等植物中 ,NADP 苹果酸酶 (NADP ME)由一个小的基因家族编码 .根据发表的水稻基因组序列信息 ,对水稻的NADP ME家族进行了研究 .结果表明 :水稻NADP ME家族由 3个胞质型NADP ME和 1个质体型NADP ME构成 ,发现两个新的胞质型NADP ME基因 .尽管 4个水稻NADP ME的氨基酸序列存在较高的相似性 ,但是其中一个胞质型NADP ME(OscytME3)在NADP ME氨基酸序列保守区存在着不同于其他NADP ME的特征 .进化树分析表明它可能起源于不同于其他NADP ME的另一条进化分支 .虽然 4个NADP ME基因表达的组织特异性和发育阶段特异性不尽相同 ,但是在功能上可能都参与植物的胁迫应答 .

种鸭黄病毒病疫苗免疫效果观察

通过对免疫过黄病毒病活疫苗和灭活疫苗的产蛋种鸭采用分离黄病毒强毒株(JQ)进行攻毒试验,并设未免疫组进行对照。攻毒后每天观察试验鸭精神、采食、产蛋等情况,连续观察21d。结果发现,免疫组攻毒后,精神、采食、产蛋均未受影响;未免疫组攻毒后第2天,采食、产蛋开始下降,并在后期出现死淘情况。试验结果表明,蛋种鸭开产前进行3次油苗和1次弱毒苗免疫,能抵抗黄病毒感染。经鸡胚成纤维细胞多次传代致弱的黄病毒QL株有较好的免疫原性,对鸭没有致病性。

种鸭不明原因产蛋下降的病原分离与免疫防控

2016年,山东多地樱桃谷父母代种鸭发生不明原因产蛋下降,造成了很大的经济损失。通过采集病料进行检测,分离到3株鸭肝炎Ⅰ型病毒。通过动物回归试验证明了该病毒对种鸭的致病性。用此分离株制备的灭活疫苗免疫35周龄种鸭,表明灭活疫苗和市售的鸭肝炎活疫苗联合免疫能够很好地抵抗鸭肝炎Ⅰ型病毒的攻击。

芦花鸡中B亚群禽白血病病毒的分离与鉴定

通过接种DF-1细胞（C/E）系,从山东某地方品系芦花鸡的鸡群中分离到一株外源性白血病病毒（ALV）SDAU09C2。与GenBank中已发表的不同亚群鸡ALV参考株的囊膜蛋白gp85的氨基酸序列比较,表明该分离株与B亚群ALV（ALV-B）2个参考株的gp85的氨基酸同源性最高,均为92.5%; 与A、C、D、E亚群ALV的gp85的氨基酸同源性仅在73.2%-87.9%之间; 而与J亚群gp85的氨基酸同源性更低至30.3%-32.4%。这是我国地方品系鸡群中第一次分离和鉴定ALV-B及其gp85基因的报道。

进口海兰褐祖代鸡禽白血病感染状态的持续观察及与国内发病鸡群种蛋p27检出率、病毒分离率的相关性

对自国外直接进口的蛋用型海兰褐祖代鸡群的禽白血病感染状态进行了持续观察,并与国内3个不同发病状况的海兰褐父母代鸡群的种蛋p27检出率、抗体阳性率、投诉情况进行了比较。将国外直接进口的蛋用型海兰褐祖代鸡群3个配套系240只1日龄鸡在SPF环境中饲养,在不同日龄采集泄殖腔棉拭子检测禽白血病病毒(A-vian leukosis virus,ALV)群特异性p27抗原、采集血清检测ALV-AB及J特异性抗体和采集血浆分离外源性ALV,并在鸡群开产后收集种蛋,检测蛋清p27抗原和父母代鸡群胎粪p27抗原。同时对来自天津、山东的不同投诉情况的3个父母代鸡场种蛋p27抗原或ALV-AB及J抗体进行了检测。结果显示,进口祖代鸡ALV-AB及J特异性抗体在68、150日龄检测均为阴性;分别在12、26、68、150日龄采血浆在DF1细胞分离病毒均为阴性;收集的250枚种蛋蛋清和孵化的父母代鸡群胎粪p27抗原检测均为阴性。而其他国内3个父母代鸡场的种蛋p27检出率最高达12%。结果表明,该海兰褐祖代鸡群无外源性禽白血病的感染,不同鸡群的种蛋p27检出率与病毒分离率及发病情况具有较好的吻合性,可以作为开展ALV的流行病学调查和种鸡场净化的重要指标。

蛋用型祖代鸡群禽白血病病毒感染状态的持续观察

为了检测从国外直接进口的蛋用型祖代鸡群是否存在外源性禽白血病病毒(ALV)的感染,将240只1日龄鸡饲养在严格的SPF环境中。在不同日龄采集泄殖腔棉拭子检测ALV群特异性p27抗原、采集血浆分离外源性ALV和采集血清检测ALV-AB及J特异性抗体。结果表明:在近3个月的6次采样检测中,6个不同的配套系间泄殖腔棉拭子检出率显著不同。其中1个配套系6次完全阴性,其余5个则在不同时期呈间隙性阳性。各品系之间ALV p27抗原检出率与快慢羽性状没有相关性。慢羽的配套系C,36只鸡中在45日龄检出了1例ALV-AB抗体一过性阳性,在60日龄检出了2例ALV-J抗体一过性阳性。分别在5、21日龄采血浆在DF1细胞分离病毒,所有的6个配套系的204只鸡外源性ALV的病毒分离均为阴性。