虎杖对壹期矽肺纤维化形成干预作用的机制研究

目的:观察虎杖对壹期矽肺纤维化形成的影响。方法:选择SD大鼠,随机分为正常组,模型组,虎杖低、中、高剂量组,每组10只,其中各虎杖各剂量组予不同浓度虎杖水溶液灌胃;正常组及模型组予生理盐水灌胃。检测大鼠肺组织病理变化及Ⅰ、Ⅲ型胶原以及各促纤维化因子b FGF、PDGF和TNF-α基因和蛋白表达。结果:与模型组比较,虎杖对壹期矽肺模型大鼠肺组织病理及Ⅰ、Ⅲ型胶原以及各促纤维化因子b FGF、PDGF和TNF-α基因和蛋白表达均有明显抑制作用,而且给药浓度越高,效果越显著。结论:虎杖可以有效改善矽肺早期病理损伤,延缓矽肺纤维化进程。

狼疮性肾炎患者外周血CD4+CD25^(high)调节性T细胞检测临床意义

目的:检测狼疮性肾炎患者外周血CD4+CD25high调节性T细胞的比例,探讨其临床意义。方法:采用流式细胞仪检测35例狼疮性肾炎患者及11名健康对照者的外周血CD4+CD25high调节性T细胞的比例,并分析其与肾脏病理类型和疾病活动的相关性。结果:狼疮性肾炎患者外周血CD4+CD25high调节性T细胞的比例与健康对照组相比,差异无统计学意义(P>0.05),并与疾病活动性无相关性。但III型和IV型狼疮性肾炎患者,CD4+CD25high调节性T细胞的比例较II型和V型患者明显降低(P<0.05)。结论:检测外周血CD4+CD25high调节性T细胞的比例可以辅助判断狼疮性肾炎的病理类型,并可为治疗狼疮性肾炎提供理论依据。

脐带血来源的调节性T细胞对SLE病人淋巴细胞的作用初探

目的通过分析脐带血调节性T细胞(CD_4^+CD_(25)^+细胞)的基本特性以及对系统性红斑狼疮(Systemic Lupus Erythematosus,SLE)患者淋巴细胞的抑制功能,为治疗SLE等疾病提供新的思路。方法收集脐带血3例、SLE患者外周血6例和健康人外周血3例,肝素抗凝;检测CD_4^+CD_(25)^+及Foxp3+细胞比例;磁珠分选法分离各样本中CD_4^+CD_(25)^+细胞和CD_4^+CD_(25)^-细胞,分析各亚群细胞的纯度并进行体外扩增试验及体外抑制功能试验。结果脐带血中CD_4^+CD_(25)^+细胞和CD_4^+Foxp3^+细胞比例最高,SLE患者外周血中最少;脐带血中CD_4^+CD_(25)^+细胞体外扩增能力比健康成人和SLE患者的CD_4^+CD25+细胞强。扩增后的脐带血CD_4^+CD_(25)^+细胞的体外抑制功能较扩增前及其它两者扩增后均增强,差异有统计学意义(P<0.05)。结论脐带血中调节性T细胞比例多,生物活性强,输注脐带血来源的调节性T细胞可以成为治疗系统性红斑狼疮等自身免疫性疾病的理想途径。

抗核抗体在原发性肝癌中的表达及临床意义

目的评价抗核抗体(ANA)在原发性肝癌中的表达及临床意义,为原发性肝癌的临床诊治及疾病预后提供相关依据。方法收集72例原发性肝癌患者血清、130例慢性肝炎患者血清及200例健康人的血清。采用间接免疫荧光法测定ANA、采用放射免疫法测定甲胎蛋白(AFP),观察3组ANA表达情况及与AFP水平的关系。结果 ANA在原发性肝癌患者中表达阳性率明显高于肝炎组,且2组均高于正常对照组,差异均有统计学意义(P<0.01)。肝癌组ANA类型主要表现为斑点型、核仁型、着丝点型及胞浆型。原发性肝癌患者中ANA表达阳性的患者2年生存率明显低于ANA阴性患者。结论 ANA在肝癌、肝炎中均有明显表达,ANA在肝癌患者中的表达阳性率要远高于肝炎患者,ANA是影响肝癌预后的独立因素,原发性肝癌患者ANA表达阳性者提示预后不良。

浅议农电安全管理中的几个问题及对策措施

农电安全管理是县级供电企业各项工作中的重中之重，由于县级供电企业供电设施基础较差，加上资金有限，导致一些新技术、新科技投资不上，导致目前农电安全管理仍存在一些问题，尤其是基层供电所的安全管理现状不容乐观，需要我们加以重视。强化农电安全管理，需要在安全管理工作中严格执行电力安全规程，规范安全生产行为，结合实际把安全工作落到实处，做到有组织、有措施、有考核，不断提升农电综合管理水平，确保人身、电网、设备安全。

高嗜肝性8型重组腺相关病毒体内转导法制备乙型肝炎病毒持续感染小鼠模型

用高嗜肝性的重组8型腺相关病毒(Recombinant adeno-associated virus type8,rAAV8)载体携带1.3拷贝乙型肝炎病毒(Hepatitis B virus,HBV)基因组(ayw亚型)体内转导法,建立持续表达HBV抗原的C57BL/6小鼠模型。首先,制备并纯化了携带1.3拷贝HBV基因组(ayw亚型)的重组8型腺相关病毒(rAAV8-1.3HBV);将rAAV8-1.3HBV以剂量2×10e11vg/只注射C57BL/6小鼠(Viralgenome,vg);在不同时间点实施尾静脉采血,采用ELISA方法监测血清中HBsAg和HBeAg的水平及动力学变化;10周后处死小鼠,取血液、肝组织样本,提取基因组DNA,荧光定量PCR检测HBVDNA拷贝数;利用鉴定HBVDNA环化形式的特异性引物进行PCR扩增以检测肝组织中环化的HBVDNA,并检测HBV抗原特异性的免疫组化和肝脏病理变化。结果显示,注射rAAV8-1.3HBV的3只C57BL/6小鼠第1周开始在血液中检测到HBsAg和HBeAg的表达,并持续至第10周均为阳性,其中HBsAg的表达水平经历了一个上升-下降-再上升的过程(注射后第4周时最低,第6周后维持较高水平),而HBeAg表达水平则持续阳性且比较稳定。荧光定量PCR结果显示,3只小鼠10周后血清中HBV DNA的拷贝数分别为4.2×103、3.6×103、2.5×103copies/mL,肝脏中则分别为8.0×106、5.7×106、2.6×106copies/g肝组织。在3只小鼠肝组织中均检测到环化HBV DNA,提示AAV8载体携带的线性HBV DNA成功回复成环化HB VDNA。免疫组化分析显示3只小鼠肝脏中均存在HBsAg和HBcAg表达;体内转染10周后肝脏组织切片的HE染色分析显示未见明显的炎性细胞浸润及组织结构异常。结果表明,本研究利用高嗜肝性重组8型腺相关病毒载体携带1.3拷贝乙型肝炎病毒基因组(ayw亚型)体内转导C57BL/6小鼠,成功地建立了HBV病毒在肝内稳定复制并持续表达HBV抗原的小鼠模型,为进一步研究HBV慢性持续感染的机制与应用于药物以及疫苗评价打下了基础。

自噬相关的环状RNA circ0020123在卵巢癌中的诊断价值

目的探讨卵巢癌(ovarian cancer,OC)中环状RNA circ_0020123表达水平,进而评估circ_0020123水平对卵巢癌的诊断价值。方法收集2016年10月至2017年3月在杭州市临平区妇幼保健院进行诊治的卵巢癌患者55例,收集血清进行高通量基因表达测序分析。采用实时荧光定量PCR技术测定卵巢癌患者和健康对照组血清中circ_0020123水平,通过绘制受试者工作特征曲线(receiver operating characteristic curve,ROC),评估circ_0020123水平对卵巢癌的诊断效能。通过t检验探讨circ_0020123表达与卵巢癌患者临床特征的相关性。绘制生存曲线分析卵巢癌患者血清circ_0020123水平与预后生存的关系。Western blot检测自噬相关蛋白LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、p62表达水平。结果与健康人血清(1.00±0.25)相比,circ_0020123在卵巢癌患者血清(1.24±0.23)中表达明显上调(t=5.23,P<0.001)。ROC曲线显示circ_0020123对卵巢癌标本的检测具有较高的诊断性能(AUC=0.7579,P<0.001)。t检验与logistics综合分析显示circ_0020123高表达明显与FIGO分期(t=5.46,P<0.001)和肿瘤大小(t=6.37,P<0.001)相关。生存资料测定显示,circ_0020123高表达组的5年总生存期明显短于circ_0020123低表达组(P=0.019)。在细胞中敲减circ_0020123能下调自噬相关蛋白LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ的表达(0.45±0.05)(t=9.31。P=0.001),且上调p62的表达(1.94±0.11)(t=12.62,P<0.001)。结论 circ020123是一个重要的卵巢癌相关环状RNA, 为卵巢癌患者提供了一个潜在的诊断、预后的生物标志物和治疗靶点。

共表达H7N9 M2蛋白和H5N1 HA蛋白的流感病毒样颗粒的制备

目的应用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统制备共表达H7N9 M2蛋白及高致病性禽流感H5N1 HA蛋白的病毒样颗粒(VLPs)。方法将H7N9亚型禽流感M2蛋白作为基础蛋白,与禽流感H5N1膜蛋白HA共表达,通过杆状病毒表达系统表达出VLPs,纯化后通过蛋白印迹试验鉴定VLPs中蛋白的表达情况,用透射电镜观察VLPs形态,血凝试验测定VLPs的活性。结果H5N1 HA、H7N9 M2蛋白可以在昆虫细胞中共表达,相对分子质量为76000,并组装成流感VLPs;电镜观察到VLPs的形态与流感病毒一致,直径70~80 nm;血凝试验显示该VLPs具有类似流感病毒的血凝活性。结论该方法可以制备流感VLPs,为H7N9与H5N1高致病性禽流感广谱疫苗研究提供了可行方案。