基于SPRi技术和分子对接探析人参皂苷与MAPK信号通路的相互作用

目的利用分子对接和SPRi技术,探究人参皂苷与MAPK信号通路相互作用的机制。方法利用分子对接分析27种人参皂苷与MAPK信号通路相关蛋白的结合作用,运用Cytoscape软件构建“人参皂苷-蛋白靶点”网络,初步筛选关键人参皂苷化合物和蛋白;通过SPRi技术进一步对筛选结果进行验证;使用分子对接技术,对人参皂苷和关键蛋白的结合位点和结合作用进行分析。结果分子对接结果表明,人参皂苷能够与MAPK通路上的ERK1、MEK、MNK2、MSK等蛋白有较好的结合,其中ERK1蛋白与人参皂苷结合能最低,相互结合能力最强;并通过SPRi验证得到7种人参皂苷与ERK1蛋白的结合活性;结合位点分析表明,Lys71、Glu88、Asp184为7种人参皂苷与ERK1蛋白的主要结合位点。结论人参皂苷可能与ERK1蛋白结合,通过MAPK通路发挥作用。

地黄多糖超声提取工艺优化及其抗氧化活性

目的优化地黄多糖超声提取工艺,并评价其抗氧化活性。方法在单因素试验基础上,以料液比、提取时间、提取温度、醇沉浓度为影响因素,多糖得率为评价指标,正交试验优化超声提取工艺。然后,考察分步醇沉(50%、70%、80%、90%乙醇,相应部位分别命名为RGPS50、RGPS70、RGPS80、RGPS90)对6个品种中多糖含有量的影响,以及多糖对DPPH自由基的清除作用。结果最佳条件为料液比1∶30,提取时间100 min,提取温度50℃,醇沉浓度90%,多糖得率7. 75%。各品种中多糖含有量依次为85-5>星科>金九>沁怀>北京3号>怀丰。RGPS90中多糖含有量最高,抗氧化活性最弱; RGPS80中多糖含有量相对较低,抗氧化活性最强。结论该方法稳定可靠,可用于超声提取地黄多糖。不同品种、醇沉部位地黄中多糖含有量和抗氧化活性差异明显。

几种解酒制品醒酒及保肝效果的实验研究

目的:观察几种常用解酒制品醒酒护肝的作用。方法:取雄性昆明小鼠,随机分为对照组和实验组,对照组灌以生理盐水,30min后,实验组分别灌以6种解酒产品(A、B、C、D、E、F),30min后,以0.16m L/10g灌予56度红星二锅头,记录小鼠醉酒和醒酒时间。连续灌酒15 d,采用全自动生化分析仪测定血清谷草转氨酶(Alanine aminotransferase,AST)、谷丙转氨酶(Glutamic-oxalacetic transaminase,ALT)、碱性磷酸酶(Alkaline phosphatase,ALP)和白蛋白(Albumin,ALB)水平。结果:产品E显著缩短了小鼠的醉酒时间(P<0.01),但不影响醒酒时间。其余各组对醉酒时间和醒酒时间均无显著影响。各组产品对肝功能各指标也无显著影响。结论:本研究表明一些常用的解酒制品并没有明显的醒酒和护肝作用,但本研究结果还需要进一步大样本量研究的验证。

不同品种山药多糖含量及体外抗氧化活性研究

目的:比较不同品种山药多糖含量及体外抗氧化活性。方法:采用酶解法提取山药多糖,通过比色法测定多糖含量及体外抗氧化活性。结果:不同品种的山药,多糖含量不同。体外抗氧化实验结果显示,多糖浓度在0.1~1.2mg/L之间时3种自由基清除率均呈上升趋势。DPPH·清除结果显示,麻山药的清除率最高,达到58.44%,牛腿米山药最低,仅为36.97%;·OH清除结果显示,铁棍山药的清除率最高,达到65.19%,牛腿米山药最低,为30.97%;O2-清除率结果显示,铁棍山药的清除率最高,达到30.84%,牛腿米山药最低,为12.53%。6个品种的山药多糖在3种自由基的清除率方面均低于Vc。结论:山药多糖含量越高,抗氧化能力越强。可供药用的山药品种不论是多糖含量还是抗氧化能力明显优于仅有食用历史的山药品种。

铁棍山药SUS基因CDS区克隆与生物信息学分析

目的:对铁棍山药蔗糖合成酶(sucrose synthase,SUS)基因的编码区域(coding sequence,CDS)进行克隆和蛋白质结构分析,为该基因的调控机制与山药多糖的合成机制提供理论依据。方法:提取铁棍山药总RNA并反转录为cDNA第一链,根据本实验室铁棍山药基因组数据经注释得到的SUS基因序列设计一对特异性引物,利用基因克隆技术获得SUS基因的编码区域并通过蛋白质预测分析软件分析蛋白质序列特征。结果:克隆得到一个长度2 448 bp的基因序列,具有一个完整的开放阅读框架(open reading frame,ORF),命名为DoSUS1。DoSUS1的分子式为C_(4209)H_(6534)N_(1115)O_(1205)S_(23),相对分子质量9 788.32,共815个氨基酸,理论等电点(PI)6.10,消光系数为110 505,脂溶性指数(AI)为94.15,不稳定指数为32.18,平均亲水指数(GRAVY)为-0.225,属于稳定可溶性酸性蛋白质。DoSUS1氨基酸序列存在多个磷酸化位点,不存在跨膜区与信号肽。蛋白质二级结构与三级结构结果显示DoSUS1属于全α类蛋白质。功能域预测结果显示DoSUS1有蔗糖合成与糖基转移两个功能域。同源性比对结果显示DoSUS1的氨基酸序列与所比对单子叶植物的氨基酸序列相似性均>80%。系统进化树显示DoSUS1与单子叶植物的SUS进化关系较近。结论:首次从铁棍山药中克隆出SUS基因的编码序列,并对其蛋白质结构进行了分析,为进一步阐明SUS在山药生长发育和多糖合成机制中的作用奠定了基础。