熊果酸对人结直肠癌SW620细胞恶性生物学行为的影响及机制

目的探讨熊果酸(UA)对人结直肠癌SW620细胞生长、侵袭、凋亡和转移的影响,并研究其可能的分子机制。方法以SW620细胞为对象,以CCK-8法检测不同浓度(0、5、10、15、20、25、30μmol/L)UA作用不同时间(24、48、72 h)对细胞增殖的影响;以克隆形成实验检测不同浓度(0、10、15、20μmol/L)UA作用于SW620细胞10 d对细胞克隆形成的影响;以不同浓度(0、10、15、20μmol/L)UA作用于SW620细胞24 h后,分别以流式细胞术、Transwell侵袭实验、Western blot实验检测细胞的凋亡、侵袭情况和细胞中B细胞淋巴瘤2(Bcl-2)、裂解型多腺苷二磷酸核糖聚合酶(cleaved-PARP)、磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶(p-p38MAPK)、p38 MAPK、上皮钙黏素(E-cadherin)、神经钙黏素(N-cadherin)、锌指转录因子Snail蛋白的表达情况。考察p38 MAPK抑制剂SB203580与UA联用对细胞中p-p38 MAPK、Bcl-2、N-cadherin蛋白表达的影响。结果与0μmol/L UA比较,5~30μmol/L UA作用24、48、72 h均可显著降低细胞的存活率(P<0.05);15、20μmol/L UA作用10 d均可显著降低细胞的克隆形成率(P<0.05);经15、20μmol/L UA作用后,细胞的凋亡率和cleaved-PARP、E-cadherin蛋白的表达量以及p38 MAPK蛋白的磷酸化水平均升高,穿膜细胞数和Bcl-2、Snail、N-cadherin蛋白的表达量均减少或降低,大部分指标差异有统计学意义(P<0.05),部分指标变化有浓度依赖性(P<0.05)。SB203580可显著抑制UA对p38 MAPK蛋白表达的上调作用,逆转UA对Bcl-2、N-cadherin蛋白表达的抑制作用(P<0.05)。结论UA可抑制SW620细胞的生长、侵袭和转移并诱导其凋亡,上述作用可能与激活p38 MAPK信号通路相关。

脾虚湿阻证生物标志物的组学技术研究进展

“诸湿肿满,皆属于脾”。脾虚导致湿邪中阻,进而引起代谢综合征、溃疡性结肠炎、癌症等多种疾病,病情多反复缠绵难愈。目前组学技术广泛运用于中医药证候相关生物标志物的研究,本文系统综述了采用代谢组学、蛋白质组学、基因组学、转录组学、以及肠道微生物组学等技术手段研究脾虚湿阻证标志物研究进展,以期为脾虚湿阻证的证候实质提供线索。

高脂饮食诱导脾虚湿阻型(内湿型)银屑病小鼠模型的建立及评价

目的通过比较单纯高脂饮食诱导脾虚湿阻证(内湿型)小鼠模型、单纯银屑病小鼠模型,以及两者结合模型,探讨建立脾虚湿阻型银屑病小鼠模型的可行性。方法分别采用高脂饲料喂养建立脾虚湿阻证小鼠模型,咪喹莫特诱导小鼠银屑病模型,以及高脂饮食结合咪喹莫特建立脾虚湿阻型(内湿型)银屑病病证结合小鼠模型,比较各组小鼠体质量、体长及腹围评价脾虚湿阻程度;通过比较各组皮损面积、严重程度评分(PASI)及脾脏变化评价小鼠银屑病严重程度;通过HE染色和免疫组化法观察皮肤组织病理学形态和增殖细胞核抗原(PCNA)表达水平;RT-qPCR法检测小鼠皮肤中表皮屏障蛋白及细胞因子的基因表达水平;Western Blot法检测小鼠皮肤中p38 MAPK蛋白表达水平。结果(1)高脂饲料喂养8周后,与正常组比较,脾虚湿阻证组小鼠体质量明显升高(P<0.001),且出现倦怠少动、扎堆蜷缩、反应迟钝等脾虚湿阻证指征;结合咪喹莫特诱导后,脾虚湿阻型银屑病组小鼠体质量、体长与寻常型银屑病组比较有明显升高(P<0.05),仍可观察到脾虚湿阻证指征,表明脾虚湿阻型银屑病模型建立成功。(2)与正常组比较,寻常型银屑病组小鼠背部皮肤明显增厚、出现红斑,脾脏指数升高(P<0.001);与寻常型银屑病组小鼠比较,脾虚湿阻型银屑病组小鼠皮损明显加重,红斑评分及PASI总分明显增加(P<0.05,P<0.01),表皮增厚伴有角化细胞增殖过度及炎性细胞浸润、PCNA阳性表达明显增多,且脾脏指数明显升高(P<0.001)。(3)与正常组小鼠比较,寻常型银屑病组及脾虚湿阻型银屑病组小鼠皮肤中兜甲蛋白(Loricrin,LOR)、内披蛋白(Involucrin,INV)和紧密连接蛋白1(Claudin-1)表达明显降低(P<0.05),表明小鼠皮肤屏障功能受损,炎症因子白细胞介素1β(Interleukin 1β,IL-1β)、S100钙结合蛋白A8(S100A8)、S100钙结合蛋白A9(S100A9)表达升高(P<0.05,P<0.01),p38 MAPK蛋白磷酸化水平明显升高(P<0.05)。结论高脂饮食结合咪喹莫特诱导的小鼠脾虚湿阻型(内湿型)银屑病模型既可表现出明显的脾虚湿阻证中医指征,也可表现出银屑病样特征,可作为可靠的病证结合动物模型,为后续脾虚湿阻型银屑病病理机制探讨、中药复方药效评价、药理机制探讨等方面研究提供参考。

氢溴酸槟榔碱对大鼠离体胃平滑肌条动力的作用

目的观察氢溴酸槟榔碱对大鼠离体胃不同部位纵行和环行肌条收缩活动的影响,并探讨其对胃平滑肌动力协调性的作用。方法将胃不同部位平滑肌条置于盛有Krebs灌流浴槽中,在37℃恒温、通95%O2和5%CO2混合气条件下,记录给予氢溴酸槟榔碱、阿托品和河豚毒素前后肌条的收缩活动。结果氢溴酸槟榔碱对胃底纵行与环行肌和胃窦纵行肌条的振幅没有明显作用(P>0.05),但能显著增加胃体纵行与环行肌条、胃窦环行肌条和幽门环形肌条的振幅(P<0.05,P<0.01)。氢溴酸槟榔碱能显著提高各部位胃平滑肌条的张力(P<0.05,P<0.01)。一定浓度的氢溴酸槟榔碱能显著加快胃底肌条的收缩频率(P<0.05,P<0.01),但对其他部位肌条的收缩频率没有显著影响(P>0.05)。阿托品和河豚毒素对肌条的自发收缩都没有影响,阿托品可阻断氢溴酸槟榔碱诱导的收缩作用,但河豚毒素对氢溴酸槟榔碱诱导的收缩作用没有影响。结论氢溴酸槟榔碱可兴奋大鼠胃各部位肌条的收缩活动,它的这一作用是通过平滑肌中的胆碱能M型受体实现的。

香槟方颗粒和胃肠动力西药对犬胃肠运动作用比较

目的比较香槟方颗粒与促胃肠动力药多潘立酮、莫沙必利和普卢卡必利对犬胃肠动力的作用。方法 25只比格犬进行慢性实验,在胃窦、十二指肠、空肠、回肠和结肠浆膜分别植入应力传感器记录清醒犬胃肠运动,安装胃造瘘以供从胃灌入药物。实验分5组:对照组、香槟方组、多潘立酮组、莫沙必利组、普卢卡必利组,每组5只,每次给药重复2次,给药前观察120 min作基础对照。结果 (1)香槟方组犬胃窦、十二指肠、空肠、回肠及结肠收缩波数增加,分别增加(51.5±15.1)%^(107.6±39.6)%(均P<0.05);振幅指数分别增加(43.5±9.2)%^(120.1±47.3)%(均P<0.05)。(2)多潘立酮组犬胃窦、十二指肠、结肠振幅指数显著增强(均P<0.05);莫沙必利组由胃窦至结肠出现振幅指数显著增强(均P<0.05);普卢卡必利组空肠、回肠和结肠的振幅指数显著增加(均P<0.05)。结论香槟方对胃窦、十二指肠、空肠、回肠和结肠的运动均有明显促进作用,与多潘立酮、莫沙必利和普卢卡必利相比,具有较强的全胃肠道促动力作用。

围术期足三里穴位电针疗法对阑尾切除术大鼠胃肠纵形肌肌条收缩功能的影响

目的研究围术期足三里穴位电针疗法对阑尾切除术大鼠胃肠纵形肌肌条收缩功能的影响。方法30只成年雄性SD大鼠随机分为5组,每组6只,实验分组:正常对照组、电针组、造模组、造模+电针组、造模+假电针组。大鼠麻醉后,行阑尾切除术造模。正常对照组不做任何操作,造模组仅行阑尾切除术,电针组和造模+电针组行双侧足三里电针,造模+假电针组双侧足三里穴插上针灸针但不通电,电针治疗1次/d,连续7 d后取十二指肠、空肠、回肠、胃体和胃窦的纵形肌肌条。结果造模+电针组十二指肠纵形肌肌条的振幅明显强于造模组(P<0.05),造模+假电针组十二指肠纵形肌肌条的振幅明显弱于造模+电针组(P<0.05);造模组空肠纵形肌肌条的振幅明显弱于正常对照组和电针组(P<0.05);电针组回肠纵形肌肌条的振幅明显强于正常对照组(P<0.05),同时也强于造模组、造模+电针组(P<0.01);造模组胃体纵形肌肌条的振幅明显弱于电针组(P<0.05);造模+假电针组大鼠胃体纵形肌肌条收缩波频率高于造模组(P<0.05);各组大鼠十二指肠、空肠、回肠、胃窦的胃肠纵形肌肌条收缩波频率组间比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论电针刺激可增强大鼠回肠和胃体纵形肌肌条收缩振幅,电针对大鼠十二指肠纵形肌收缩的作用比只针刺而不通电刺激要强;阑尾切除手术后大鼠空肠纵形肌收缩的振幅减弱,电针刺激对阑尾切除术大鼠十二指肠、空肠、回肠、胃窦的纵形肌肌条收缩波频率变化并没有明显影响。

江西省药品流通安全监管存在的问题与对策研究

为了更好地实施我国药品流通安全监管制度,确保药品在生产、运输及销售等过程中的安全问题,本文对江西省药品流通安全监管存在的问题进行深入分析,并在法律、监管力度和频率、第三方物流、药品生产设备的要求、物联网技术等方面对加强药品流通的安全监管提出相应参考性对策,为建设高效统一、科学合理、现代信息化的流通监管体系提供参考性意见。江西省可以依靠自身流通域广、道路通畅、绿化环境好等优势,积极引进创新型人才,创新性地发展药品流通,让药领人、医领发展成为江西特色。

氢溴酸槟榔碱通过中枢神经迷走胆碱能系统促进犬胃肠运动

目的:探讨氢溴酸槟榔碱增强胃肠运动作用的中枢神经机制。方法:在比格犬胃体、胃窦、十二指肠、空肠和结肠植入应力传感器记录胃肠运动,经颈外静脉和侧脑室置管供注射药物,分别观察在麻醉、术后清醒、静脉注射阿托品50μg/kg以及双侧颈迷走神经切断状态下侧脑室给予不同剂量的氢溴酸槟榔碱(1.25、2.5和5μg)对犬胃肠收缩运动的影响。结果:脑室给予不同剂量的氢溴酸槟榔碱(1.25、2.5和5μg)可剂量依赖性增强麻醉和清醒状态下犬胃体、胃窦、十二指肠、空肠、回肠和结肠的收缩运动。静脉注射阿托品和双侧颈迷走神经切断均可完全阻断氢溴酸槟榔碱对犬胃肠运动的增强作用。结论:氢溴酸槟榔碱可通过中枢神经迷走胆碱能系统促进犬胃肠运动。

澳洲茄边碱对人肝癌HepG2细胞生长和凋亡的影响及机制初探

目的:探讨澳洲茄边碱对人肝癌HepG2细胞生长和凋亡的影响,并研究其潜在作用机制。方法:考察0(空白组)~12μmol/L澳洲茄边碱作用24、48 h对HepG2细胞存活率的影响,0(空白组)、6μmol/L澳洲茄边碱作用10 d对细胞克隆形成的影响,0(空白组)、4、6、8μmol/L澳洲茄边碱作用24 h对细胞凋亡率和细胞中B细胞淋巴瘤2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、胱天蛋白酶3(caspase-3)mRNA表达量以及Bcl-2、剪切的caspase-3(cleaved caspase-3)蛋白表达量和磷酸化腺苷一磷酸活化蛋白激酶α(p-AMPKα)/AMPKα的影响。考察AMPK抑制剂compound C对经6μmol/L澳洲茄边碱作用24 h后细胞中AMPKα、Bcl-2蛋白表达量的影响。结果:与空白组比较,1~12μmol/L澳洲茄边碱作用24、48 h均可显著降低细胞存活率(P<0.05),且有浓度依赖趋势,其半数抑制浓度分别为8.310、7.996μmol/L;经6μmol/L澳洲茄边碱作用10 d后细胞的克隆形成率显著降低(P<0.05)。6、8μmol/L澳洲茄边碱作用后细胞凋亡率和细胞中Bax、caspase-3 mRNA及cleaved caspase-3蛋白(除8μmol/L外)表达量、p-AMPKα/AMPKα(除8μmol/L外)均显著升高(P<0.05),Bcl-2 mRNA及蛋白表达量均显著降低(P<0.05),部分指标变化有浓度依赖性。compound C可以抑制AMPKα蛋白表达并逆转澳洲茄边碱对Bcl-2蛋白的抑制作用。结论:澳洲茄边碱可以抑制HepG2细胞增殖,诱导其凋亡,作用机制可能与激活AMPK信号通路有关。

肿瘤坏死因子受体2在银屑病中的研究进展

银屑病主要是由免疫介导、遗传与环境共同作用的难治性疾病。肿瘤坏死因子-α(TNF-α)相关生物制剂为银屑病治疗带来里程碑式进步,然而,抗TNF-α疗法存在不良答应,其局限性可能与TNF-α不同受体激活后发挥的生物学功能不同有关。肿瘤坏死因子受体2(TNFR2)是TNF-α的关键受体之一,在与TNF-α结合后,可激活核因子-κB(NF-κB)、磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)、丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)、转录激活子3(STAT3)等多个信号通路,参与炎症、表皮稳态、细胞凋亡、细胞增殖、细胞自噬等生物学过程的调控,提示TNFR2与银屑病的发生、发展关系密切。既往研究往往忽视TNFR2在抗TNF-α疗法中的作用,因此,该文综述了TNFR2的结构、信号转导通路、在疾病中的研究进展及其与银屑病的关系,为探索银屑病的发病机制和治疗提供新的参考。

小鼠卵巢EGFR表达检测及EGF提高小鼠超数排卵效果研究

在检测发情周期不同阶段小鼠卵巢表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)表达的基础上,利用小鼠卵巢组织学、胚胎回收与胚胎体外培养方法,研究超数排卵前腹腔注射表皮生长因子(epidermal growth factor,EGF)对小鼠超数排卵效果的影响。结果显示:(1)EGFR在卵巢内主要定位于腔前卵泡、有腔卵泡的颗粒细胞和卵丘细胞,间情期、发情前期和发情期小鼠卵巢EGFR阳性反应均强于发情后期。(2)对发情前期和间情期小鼠按照每克体质量5、10、20、40ng的EGF进行腹腔注射,24h后注射孕马血清促性腺激素(pregnant mare serum gonadotropin,PMSG)进行超数排卵处理。发情前期小鼠在EGF注射后24h,卵巢切面已有较多的有腔卵泡分布,而间情期小鼠直到PMSG注射后24h,卵巢切面上才可观察到较多的腔前卵泡和有腔卵泡,且发情前期和间情期小鼠卵巢切面上有腔卵泡数量呈EGF剂量依赖性增多。(3)小鼠注射20ng/g EGF预处理24h,超排配种后见栓鼠的2-细胞胚胎回收数最高(P<0.05);当EGF剂量超过40ng/g时,胚胎回收数降低;发情前期各组小鼠2-细胞胚胎回收数均低于对应EGF注射剂量间情期小鼠组的。(4)各组2-细胞胚胎体外囊胚发育率无显著性差异(P>0.05)。研究结果表明,小鼠卵巢组织中EGFR定位于腔前卵泡、有腔卵泡的颗粒细胞和卵丘细胞,间情期、发情前期和发情期小鼠卵巢EGFR阳性反应均强于发情后期的;超排前24h腹腔注射20ng/g EGF,可获显著提高间情期和发情前期小鼠的超数排卵效果,并且不影响胚胎的发育潜能。

香槟方对健康人胃肠动力的影响

目的：探讨香槟方对健康人胃肠动力的影响。方法2014年3月至2015年3月共招募健康志愿者40例纳入本研究，随机分为香槟方组（n=30）和安慰剂组（n=10），空腹状态下分别给予香槟方煎剂和安慰剂200 ml。两组志愿者进行胃肠动力监测并记录干预前后胃窦、十二指肠和空肠消化间期移行性复合运动（MMC）的参数变化。结果与给药前比较，香槟方组给药后MMC周期缩短约36%，MMCⅠ相时程缩短约49%，MMCⅡ相时程延长约140%（均P〈0.05）。香槟方组给药后十二指肠、空肠Ⅱ相振幅和动力指数（MI）较给药前均显著增加（均P〈0.05）。香槟方组给药后十二指肠Ⅲ相时程、频率、MI均较给药前均显著增加，空肠Ⅲ相频率、振幅、MI均较给药前均显著增加（均P〈0.05）。安慰剂对志愿者的胃窦、十二指肠、空肠各胃肠动力指标无显著影响（均P〉0.05）。与安慰剂组给药后比较，香槟方组给药后Ⅰ相时程缩短，Ⅱ相时程延长，胃窦Ⅲ相振幅和十二指肠Ⅲ相MI均增加，十二指肠Ⅱ相MI、空肠Ⅱ相振幅和MI均显著增加（均P〈0.05）。结论中药香槟方对健康人胃肠动力具有明显促进作用。临床试验注册中国临床试验注册中心，ChiCTR-OCS-13003561。

槟榔对健康人胃肠动力的作用研究

目的观察槟榔对健康志愿者胃肠动力及血浆胃动素、胃促生长素（ghrelin）水平的影响。方法30例志愿者按2：1随机分为槟榔组（n=20）和安慰剂组（n=10）。使用Solar GI胃肠动力仪进行高分辨率测压检测胃肠动力。两组志愿者空腹测压4h后，分别口服槟榔煎剂或安慰剂，观察给药前后胃肠动力变化。采用酶联免疫吸附法（ELISA）检测给药前后两组志愿者血浆胃动素、ghrelin水平。结果与安慰剂组比较，槟榔组给药后胃肠消化间期移行性复合运动（MMC）Ⅰ相时程缩短51％（P〈0．001），MMClI相时程延长298％（P〈0．001）。槟榔组给药后远端胃、十二指肠、空肠MMC Ⅱ相振幅较安慰剂组分别增加49％、28％、28％，差异均有统计学意义（均P〈0．05）；槟榔组远端胃、十二指肠、空肠MMC Ⅲ相动力指数较安慰剂组分别增加54％、52％、37％，差异均有统计学意义（均P〈0．05）。槟榔组给药后远端胃、十二指肠、空肠MMC Ⅱ相振幅较安慰剂组分别增加64％、28％、13％（均P〈0．05）；槟榔组给药后远端胃、十二指肠、空肠MMC Ⅱ相动力指数较安慰剂组分别增加138％、830％、531％（均P〈0．05）。槟榔组给药后MMC周期缩短16％（P=0．048），MMC Ⅰ相时程缩短51％（P〈0．001），MMCⅡ相时程延长298％（P〈0．001）。槟榔组给药后远端胃MMC Ⅲ相振幅较给药前显著增加，十二指肠、空肠Ⅲ相时程较给药前显著增加（均P〈0．05）。槟榔组给药后远端胃、十二指肠、空肠Ⅱ相振幅较给药前均显著增加（均P〈0．05）；给药后远端胃、十二指肠、空肠Ⅱ相动力指数较给药前分别增加102％、262％、215％（均P〈0．05）。与给药前比较，槟榔组给药后可显著增加血浆胃动素、ghrelin水平（均P〈0．05）。与安慰剂组比较，给药后槟榔组血浆胃动索、ghrelin水平显著增加（均P〈0．05）。结论槟榔可明显增加血浆胃动素、ghrelin水平，对远端胃、十二指肠、空肠动力有明显的促进作用。

大鼠肠肌间神经丛神经细胞原代培养方法的建立

目的建立一种操作简单、稳定性好的大鼠肠肌间神经丛神经细胞的原代培养方案。方法2~4周龄健康雄性SD大鼠,取小肠分离出纵行肌间神经丛,使用Ⅱ型胶原酶和胰蛋白酶消化,获取大鼠肠肌间神经丛神经细胞,使用含神经生长因子(GDNF)的Neurabasal A培养基进行培养。进行细胞形态学观察及细胞免疫荧光染色鉴定,膜片钳实验检测肠神经元细胞的静息膜电位和膜电阻。结果原代培养的大鼠肠神经元细胞生长良好。培养5~7 d的肠神经元细胞可见长的突起,神经元和神经胶质细胞网络紧密排列;培养45 d显示细胞皱缩、神经突触断裂,呈细胞凋亡表型。取培养5 d的肠神经元细胞进行膜片钳实验,记录其静息膜电位为(-49.5±1.5)mV、膜电阻为(500±38)MΩ(n=30)。结论本原代培养方案取材容易、培养方便、简单易行,细胞接种培养5~7 d可用于单细胞膜片钳实验,为深入研究神经细胞提供了可靠模型。