甘蓝型油菜COI1的调控功能分析

【目的】研究甘蓝型油菜中茉莉素受体复合体核心成员CORONATINE INSENSITIVE 1(COI1)蛋白的基因表达特性及生理调控功能。【方法】利用基因组数据分析甘蓝型油菜及其亲本种白菜和甘蓝基因组的COI1构成情况;使用定量和半定量RT-PCR扩增方法检测油菜COI1的组织特异性表达;克隆油菜COI1保守区片段,构建病毒诱导的基因沉默(virus-induced gene silencing,VIGS)载体,以农杆菌侵染方法培育VIGS诱导COI1沉默的油菜植株,然后,用鉴定出的COI1沉默植株研究油菜COI1在育性调控及虫害抗性等方面的调控功能。【结果】基因组数据分析表明,甘蓝型油菜亲本种白菜和甘蓝共有7个高度同源的COI1,依序列同源性可分为4类:COI1a、COI1b.1、COI1b.2和COI1c;甘蓝型油菜有8个COI1,也由上述几类同源基因组成。半定量和定量RT-PCR扩增试验表明甘蓝型油菜COI1在茎中的表达水平最低。从培育的VIGS诱导COI1沉默油菜中,共鉴定出COI1表达水平被抑制超过70%的株系25个,其中抑制效果最明显的10个株系被用于育性调控及蚜虫抗性试验。育性分析结果证明,VIGS沉默COI1油菜的结实能力受到严重影响,其角果在授粉20 d以后的长度只达到对照油菜角果授粉5 d后的长度,且角果中无正常种子;沉默COI1油菜的雄蕊长度短于相同花期的对照油菜雄蕊,其花药开裂延迟;显微观察发现,沉默COI1油菜的花粉中有超过80%呈不正常形态。在相同处理条件下进行的蚜虫抗性比较试验中,沉默COI1油菜叶片上的蚜虫数量超过对照油菜1倍多,而且有很多小蚜虫围绕大蚜虫的虫落,繁殖态势比对照油菜叶片上的蚜虫旺盛。【结论】甘蓝型油菜COI1具有组织特异表达特性,沉默COI1会导致油菜雄性不育性状发生,并降低油菜植株对蚜虫的抗性。

WRKY转录因子在烟草受CMV侵染和激素处理中的表达模式初步分析

WRKY转录因子在调控植物抵抗病原菌的侵染中发挥重要作用,但是,目前为止还没有WRKY转录因子在烟草抗CMV中调控机理的研究。本研究检测了感病品种‘K326’和抗病品种‘TT8’在接种CMV后其WRKY1、WRKY2、WRKY4和WRKY11的表达情况。结果显示,CMV侵染后‘TT8’中4个WRKY转录因子表达量均有大幅上升;而‘K326’中WRKY2、WRKY4和WRKY11的表达量与CMV侵染前无显著差异,WRKY1表达量则大幅下降。幼苗经外源激素(水杨酸、茉莉素、乙烯)处理后用RT-PCR检测,结果表明,‘K326’和‘TT8’中WRKY转录因子对外源激素的诱导响应比较复杂多样,但总体表现为在‘TT8’中WRKY1、WRKY2和WRKY4会受到乙烯和茉莉酸的诱导,但在‘K326’中转录因子的表达未受明显诱导。

诊断性腹腔镜的临床应用

目的:探讨诊断性腹腔镜的临床应用价值。方法:2001年9月至2008年7月为70例有临床症状,但诊断不明确的患者进行了腹腔镜探查。可疑组织送病理检查。结果:腹腔镜手术探查阳性61例,阳性率87.1%。其中不明原因腹水52例,46例确诊(88.5%);慢性腹痛4例,3例确诊(75%);腹腔肿块4例,3例确诊(75%);肠梗阻3例和急腹症5例,均得到确诊(100%);其他2例,明确诊断1例。结论:腹腔镜探查是一种安全有效的诊断方法,通过镜下观察及活检组织的病理检查基本可以明确病因。

腹腔镜加压吻合器胃肠吻合应用研究

目的：通过动物试验改进腹腔镜加压吻合器在胃肠吻合中的应用方法并观察其效果。方法：在犬上消化道吻合手术中,采用腹腔镜加压吻合器操作指导及改进后的手术操作步骤两种不同的方法实施吻合,根据手术录像记录每一吻合操作的各步骤时间及动作次数等数据,通过实际操作及统计分析对比两种吻合方法,并在术后不同时间处死动物,行吻合口处病理切片检查以观察吻合效果。结果：采用改进后的吻合方法无吻合口漏发生,较原吻合方法在实际操作时更加简便可靠,平均置入吻合夹时间减少32%,尝试次数减少66%,无效操作减少74%,缝合操作孔针数减少39%；术后2周吻合口处浆膜愈合完整,肌层及粘膜下层纤维增生,粘膜已覆盖吻合口。结论：腹腔镜加压吻合器在胃肠吻合中采取改进的吻合方法效果更佳,术后2周可形成光滑完整的吻合口。

拟南芥叶片衰老前后叶绿素降解代谢基因表达和酶积累的模式及其影响因素分析

由叶绿素降解引起的叶片衰老褪绿不仅是植物衰老最直观的性状,还是植物进行营养动员的关键事件。近年来,进入衰老窗口(senescence window)后的叶片中叶绿素降解代谢酶基因(Chl catabolic genes,CCGs)的表达调控已经得到了较为充分的研究,但在未衰老叶片中对CCGs表达模式的研究还鲜见报道。本研究中,我们分析了主要叶绿素降解代谢酶(Chl Catabolic Enzymes,CCEs)及其编码基因CCGs在自然衰老以及未衰老的拟南芥叶片中的表达模式。研究结果显示,在叶片自然衰老过程中,CCGs剧烈上调表达且CCEs蛋白逐渐累积,以催化衰老细胞中叶绿素的大量降解;值得注意的是,在长日照培养条件下,未衰老叶片中CCGs的表达存在显著的波动,其表达量在光照开启后开始上升,10:00~16:00之间达到峰值后逐渐下降。我们的分析显示,CCGs表达量的波动很有可能是光-暗交替导致的,与CCA1介导的节律信号没有明显的相关性。我们的研究结果提示,外界光信号对未衰老叶片中CCGs的表达调控起至关重要的作用。

活化与营造:乡村振兴的内驱性路径研究

在新时代新条件下促进乡村振兴,必须充分激活与利用乡村本土资源及内在新动能。从境内外乡村建设实践经验来考察,"社区活化与营造"理念与行动的开展起了重要作用。在路径上由最初的注重"人文地产景"的资源活化转变为注重主体的活化,强调对乡村社区的赋权与自组织。以社区活化视角分析我国乡村振兴可以发现资源及主体上均面临着诸多挑战,表现在人才资源匮乏、优秀文化供给不足、地理资源约束、产业结构单一、景观同质化以及缺乏有效赋权的他组织治理化。实现乡村振兴须围绕乡村的"人文地产景"等维度,特别是要从赋权以及自组织治理的理念出发,采取针对性的乡村活化策略。

新辅助化疗在腹腔镜手术治疗进展期胃癌中的应用

目的探讨进展期胃癌在新辅助化疗后施行腹腔镜手术治疗的有效性。方法选择2005年6月至2007年3月间经病理确诊的45例进展期胃腺癌（Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期M0）患者，其中15例根据本人意愿和经济承受能力先用FOLFOX7方案进行新辅助化疗后予以手术（试验组）；另外30例直接行手术治疗作为对照。比较试验组患者新辅化疗后胃癌分期的变化、两组施行腹腔镜手术情况及术后病理结果的差异。结果试验组患者均顺利完成了4个周期的化疗，2例完全缓解，10例部分缓解，3例无变化；无Ⅲ级以上的不良反应发生。试验组66．7％的患者施行了腹腔镜手术，与对照组（33．3％）比较，差异有统计学意义（X^2=4．5，P=0．030）。试验组R0切除率（80．0％）和pN0比例（60．0％）明显高于对照组（46．7％和20．0％）（P〈0．05和P〈0．01）；试验组清扫淋巴结阳性率11．0％，明显低于对照组的23．8％（P〈0．01）。两组患者手术时间和术后并发症发生率比较，差异无统计学意义（P〉0．05）。结论进展期胃癌行新辅助化疗后能明显降低肿瘤的临床分期，增加R0切除的比例，缩小肿瘤的浸润范围，减少淋巴结的转移，提高使用腹腔镜进行微创手术的机会。

2型糖尿病的外科治疗

糖尿病已成为影响人类健康的重要问题．并严重制约着经济和社会的发展。目前．2型糖尿病仍以内科治疗为主．然而并没有一种方法能够较为满意地控制该病及其并发症．尤其对伴有代谢综合征其他疾病的患者。对因超重等原因接受胃肠手术的临床研究提示．外科手术对2型糖尿病的控制可能有其独立的作用．进而提出2型糖尿病外科治疗的概念。本文对2型糖尿病外科治疗的手术方式、疗效评价及可能的作用机制进行探讨。

植物病原菌效应蛋白与茉莉素信号途径互作的研究进展

茉莉素信号途径是植物抗病信号途径的重要组成部分,病原菌的致病过程与茉莉素信号途径密切相关。近几年来,植物病原菌效应蛋白在侵染植物过程中与茉莉素信号途径关键组分的互作研究取得了深入快速的发展。本文分别就植物细菌病原菌、真菌病原菌和卵菌病原菌在致病过程中与寄主茉莉素信号途径相互作用的最新研究进展加以概述,以期对相关领域的研究起到一定的启迪作用。

十二指肠空肠旁路术和袖状胃切除术对糖尿病大鼠肝脏葡萄糖激酶表达的影响

目的探讨十二指肠空肠旁路手术（DJB）和袖状胃切除术（SG）对糖尿病大鼠肝脏葡萄激酶（GCK）表达的影响。方法制作GK大鼠（非肥胖糖尿病大鼠）和正常SD大鼠DJB和SG两种术式的动物模型．动态观察术后空腹血糖和胰岛素的变化。术后8周取肝组织标本，分别采用实时定量RT—PCR和Western blot检测术后肝脏GCK mRNA和蛋白表达水平。结果GK大鼠DJB组和SG组术后各时间点空腹血糖均显著低于术前水平（均P〈0．01），假手术组1周内空腹血糖降低，2周后逐渐恢复到术前高水平：SD大鼠各种手术后血糖水平无明显改变（均P〉0．05）。GK大鼠DJB术后肝脏GCK mRNA和蛋白表达水平分别为1．45±0．29和494．25±30．25，SG术后分别为0．65±0．25和345．25±28．13;假手术组术后GCK mRNA和蛋白表达水平分别为1．05±0．19和409．13±26．86，与DJB组和SG组比较，差异有统计学意义（均P〈0．01）；对照组GCK mRNA和蛋白表达水平分别为1．04±0．17和404．75±30．90，与DJB组和SG组比较，差异具有统计学意义（均P〈0．01）。SD大鼠术后GCK表达也呈现了相似的变化。结论DJB和SG均能明显改善糖尿病大鼠的术后血糖水平．但两种术式对肝脏GCK的表达却具有完全不同的影响。

番茄叶绿素镁脱螯合酶基因SlNYE1突变对果实成熟物质代谢的影响

番茄果实的营养品质主要取决于其代谢物的组成和含量。果实褪绿是成熟的标志性事件。为了探究叶绿素降解代谢对果实品质性状形成的影响,对叶绿素降解关键酶基因SlNYE1/GF突变体(gf)与野生型(AC)番茄果实成熟过程中代谢物的组成和变化趋势进行了分析。利用核磁共振氢谱(1HNMR)技术对成熟期的gf和AC果实进行了检测,鉴定出了30种代谢物,包括5种有机酸、3种糖类、16种氨基酸及其衍生物和6种其它代谢物。分析结果显示,AC果实的葡萄糖和柠檬酸含量在成熟过程中逐渐增多,而gf果实的葡萄糖含量呈现下降趋势,柠檬酸的含量先增加而后有所降低;gf果实在整个成熟期苹果酸含量较低而氨基酸含量较高。研究表明,SlNYE1/GF的突变显著影响番茄果实的生理代谢及营养品质。