应用型本科猪病学课程教学设计及实践

猪病学是应用型本科动物医学专业的一门重要专业选修课,该课程的主要任务是培养学生解决猪病相关问题的综合能力。基于应用型本科培养人才特点、猪场兽医就业岗位需求以及养猪行业变化等,从教学目标、教学内容、教学方法、教学成绩考核等方面进行了应用型本科猪病学课程教学设计,并在教学中应用,取得较好效果。

IRES核心区12-bp非连续插入突变对猪塞内卡病毒复制和细胞嗜性的影响

【背景】塞内卡病毒(senecavirus A,SVA)是新近暴发的一种引起猪特发性水疱病及仔猪死亡的小核糖核酸病毒。该病毒基因组5′非编码区(untranslated region,UTR)中的内部核糖体进入位点(IRES)元件在病毒复制过程中发挥重要作用。2017年我国出现IRES核心区Domain II 12个碱基非连续插入的自然突变SVA毒株,在病毒复制和致病性方面存在明显改变。【目的】探讨IRES Domain II区域发生的突变对SVA的复制及细胞嗜性的影响,为进一步了解SVA致病机制奠定基础。【方法】以实验室前期构建的含HeN-1/2018株全基因组感染性克隆pHeN-1/2018为基础,通过定点突变的方式,逐步将其IRES Domain II核心区域308—317 nt的9个碱基(ACTCAAGCG)替换为GD04/2017株基因组308—328 nt的21个碱基(CACGCCTGCCGATAGACGATT),构建重组载体pHeN-1/2018-i12并进行了病毒拯救。随后,利用病毒基因组克隆测序、间接免疫荧光试验和Western blot试验对所拯救病毒进行鉴定,同时验证了IRES核心区12个碱基插入突变对SVA病毒体外复制能力和细胞嗜性的影响。【结果】将构建完成的重组载体pHeN-1/2018-i12转染细胞,盲传至P2代,获得致使感染细胞病变明显、病变时间稳定的IRES突变病毒rHeN-1/2018-i12。病毒连续传代后测序结果表明rHeN-1/2018-i12遗传稳定,P5代病毒基因组序列未发生碱基突变,P10代病毒IRES区域没有出现突变现象。用低代次的突变病毒rHeN-1/2018-i12体外感染本体动物猪源细胞系PK-15和IBRS-2,及仓鼠源细胞系BHK-21,进行细胞感染试验,结果表明rHeN-1/2018-i12与亲本毒株rHeN-1/2018在PK-15、IBRS-2和BHK-21中均能导致明显的细胞病变,表现出相似的生长曲线趋势,表明IRES核心区Domain II 12个碱基突变不能够改变对上述细胞的嗜性;但SVA突变病毒和亲本株在不同细胞中的病变时间及病毒滴度上存在较大的差异,rHeN-1/2018-i12株在细胞中生长能力较其亲本株rHeN-1/2018差,诱使细胞病变的时间较晚,在感染24 hpi,两者病毒滴度相差可达10倍。【结论】本研究基于SVA反向遗传操作系统构建并拯救SVA IRES突变毒株,确定了IRES突变对SVA生物学特性的影响,有助于我们更好地了解SVA致病机制,拓宽我们对病毒IV型IRES功能的认识。

小鹅瘟病毒、鹅星状病毒Ⅰ型与鸭疫里默氏杆菌混合感染的诊断及病原分析

【目的】2023年4月,河南新乡某地鹅场雏鹅群急性发病,死亡率高达25%,为确定引起该鹅场雏鹅发病的病因,本研究对送检的病死雏鹅进行剖检和实验室诊断。【方法】无菌采集病死雏鹅肝脏、脾脏、肾脏和小肠等组织样品及心血和肝脏外层纤维素性渗出物,通过对心血及肝脏外层纤维素性渗出物样品进行细菌分离培养、革兰染色镜检观察、16S rRNA基因及药物敏感性试验鉴定病鹅感染细菌及感染菌株的药物敏感性情况;通过PCR/RT-PCR方法对其常见雏鹅病毒性传染病病原核酸进行检验,并对阳性病原的主要结构蛋白基因进行测序分析,确定病鹅感染的病毒性病原及其分子流行病学情况。【结果】细菌学试验结果显示,分离菌株在血平板上呈半透明圆形突起、边缘整齐、表面光滑菌落,形态学观察显示,该菌为单个和成对的革兰阴性短杆菌,符合鸭疫里默氏杆菌(Riemerella anatipestifer,RA)的特性。16S rRNA基因扩增测序与BLAST分析进一步证实该菌为RA。药敏试验结果显示,该菌株对头孢曲松和头孢噻肟敏感,对阿莫西林、四环素和多黏菌素B耐药。常见雏鹅病毒性传染病病原核酸PCR/RT-PCR检测发现,该鹅场样品小鹅瘟病毒(Goose parvovirus,GPV)和鹅星状病毒Ⅰ型(genotypeⅠGoose astrovirus,GAstV-1)核酸呈阳性,GAstV-2、禽流感病毒(Avian influenza virus,AIV)和鹅呼肠孤病毒(Goose reovirus,GRV)核酸阴性,将致病毒株分别命名为GPV/HN-2023和GAstV-1/HN-2023。进一步对GPV/HN-2023和GAstV-1/HN-2023的主要结构蛋白基因分析发现,GPV/HN-2023与DY-16株的亲缘关系较近,属于DY-16-like毒株,且VP3蛋白存在2个特有的氨基酸位点突变D248E和V314L;GAstV-1/HN-2023与GAstV-1毒株亲缘关系较近,属于GAstV-1分支,ORF2蛋白存在3个特有的氨基酸位点突变G47R、S207G和A628T。【结论】本研究通过综合诊断方法明确了GPV、GAstV-1与RA混合感染是引起该鹅场雏鹅发病的病因,分析了致病菌RA的耐药性和病毒性致病原GPV和GAstV-1的遗传演化及变异特点,为河南地区雏鹅疫病的科学防控提供理论参考。

新型鹅星状病毒衣壳蛋白原核表达及多克隆抗体制备

为了研制针对新型鹅星状病毒(GAstV)的血清学检测方法和高效抗体,克隆新型GAstV HNZZ-4毒株的ORF2基因序列,构建pET-32a-Cap重组质粒,进行衣壳蛋白(Cap)原核表达;用重组Cap蛋白免疫兔只制备多克隆抗体,并采用Western blot和免疫过氧化物酶单层试验鉴定制备的多克隆抗体的反应原性。结果表明,重组质粒pET-32a-Cap经限制性内切酶NdeⅠ和XhoⅠ进行酶切后,得到大小约5000 bp和750 bp的2个与预期一致的条带;阳性重组质粒测序结果显示,成功构建了重组表达载体pET-32a-Cap;pET-32a-Cap原核表达获得了分子质量约为27.5 ku的GAstV重组Cap蛋白;制备的兔抗GAstV Cap多克隆抗体能够与重组Cap蛋白发生特异性反应,且能特异性结合感染LMH细胞的GAstV。综上,制备的兔源抗新型GAstV Cap多克隆抗体保留了抗原性,特异性较好。

晚期胰腺癌全身化疗的疗效观察

背景与目的:晚期胰腺癌是恶性程度很高的肿瘤,全身化疗是其主要的治疗方法。本研究拟观察、比较三种不同化疗方案对晚期胰腺癌的客观疗效及其临床受益反应。方法:对我科2000年2月～2001年4月期间收治的经病理检查证实的74例晚期胰腺癌患者的临床资料进行回顾性分析,其中26例采用5-氟尿嘧啶、醛氢叶酸、顺铂方案治疗(A组);23例采用吉西他滨单药治疗(B组);25例采用吉西他滨联合5-氟尿嘧啶、醛氢叶酸方案治疗(C组)。采用Kaplan-Meier法分析患者生存期,Cox比例风险回归模型分析影响预后的因素。结果:A、B、C三组客观缓解率分别为7.7%、17.4%与24.0%,三组间无显著性差异(P=0.261,χ2检验);临床受益反应率分别为19.2%、47.8%与60.0%,B、C组优于A组,差异具有显著性(P<0.05,χ2检验)。A、B、C三组中位生存期分别为6.50个月(95%CI=5.00,7.99)、8.03个月(95%CI=6.72,9.35)、8.79个月(95%CI=7.31,10.26),B、C组长于A组,差异有显著性(Breslow=8.85,P=0.0119)。三组间血液学毒性和非血液学毒性发生率差异无显著性。结论:吉西他滨与5-氟尿嘧啶、醛氢叶酸联合作为一线方案治疗晚期胰腺癌有一定的客观缓解率,可改善患者的生活质量,患者耐受良好,值得进一步研究。

猫细小病毒的分离与鉴定

为丰富猫细小病毒(FPV)流行病学资料和制备灭活疫苗,通过猫肾传代细胞(F81)培养方法从疑似感染FPV病猫粪便中分离病毒。对分离到的病毒进行理化性质分析和FPV特异性检测引物PCR鉴定,然后对FPV的VP2基因进行扩增测序。理化性质分析结果与FPV特性均相符,VP2基因测序结果与GenBank已发表的FPV标准株VP2基因序列对比分析,核苷酸序列同源性达到99.0%,证明该分离毒株为猫细小病毒。该毒株的成功分离进一步充实了我国FPV病毒库,也为灭活疫苗的制备奠定了基础。

肝癌组织中PTEN的表达及其与p53、细胞增殖和凋亡的关系

目的:研究肝细胞肝癌(HCC)组织中PTEN的表达与细胞增殖及凋亡的关系及其与p53的相关性,明确PTEN是否参与HCC的发生、发展.方法:利用免疫组织化学技术检测47例经术后病理学证实的HCC组织、42例癌旁肝组织及10例健康肝组织中PTEN,p53,增殖性核抗原(PCNA)的表达;用TUNEL法检测HCC中细胞凋亡水平.结果:10例正常肝组织、42例癌旁肝组织中PTEN全部阳性表达(100%);53%(25/47)的HCC组织PTEN蛋白表达缺失.PTEN的表达与肝癌细胞的增殖指数和凋亡指数无相关性,与肝癌的浸润转移具有相关性,与p53的表达有相关性.结论:肿瘤抑制基因PTEN和p53有相互作用.PTEN蛋白表达缺失可能在HCC的进展过程中发挥主要作用.

伪狂犬病病毒Ra株对不同细胞增殖特性及致病性研究

本研究以伪狂犬病病毒(pseudorabies virus,PRV)Ra株体外感染不同的细胞系为模型,研究PRV Ra株最适细胞系。试验采用ST细胞、PK-15细胞、Vero细胞、F81细胞、DF1细胞、MDCK细胞和CEF细胞7种细胞作为该毒株的接种对象,观察毒株在这几种细胞上病变特点、细胞病变时间及病毒增殖规律等并进行比较。观察结果发现,受试的各种细胞在PRV感染期间均能表现明显的细胞病变,但不同细胞在病变时间上存在较大差异,其中PK-15和ST细胞在感染后24h内出现明显细胞病变,时间最早。TCID50测定病毒增殖力结果表明,ST细胞在病毒增殖传代中毒力保持最好,与原毒株毒力相当,为106.9 TCID50/0.1mL。本试验结果表明,ST细胞是较适合于PRV Ra株体外研究的细胞系。

血管活性因子对肉鸡腹水综合征形成及发展的影响

肺动脉压升高是肉鸡肺动脉高压综合征发病过程的中心环节。研究表明血管活性物质在体内的失衡是诱发肉鸡肺动脉压变化的主要因素,并在肉鸡腹水综合征发生发展过程中发挥着重要的作用。文章论述了一氧化氮、内皮素、血管紧张素Ⅱ、5-羟色胺、缺氧诱导因子以及心钠素等血管活性因子对肉鸡肺动脉高压形成及发展的影响,探讨血管活性因子在肉鸡腹水综合征发病过程中的作用,为建立该病的诊断和防控方法提供理论依据。

肝细胞肝癌组织中p34^(cdc2)表达的临床意义

目的 :探讨p34cdc2 激酶在肝细胞肝癌 (HCC)发生发展中的作用及与临床病理特征的关系 .方法 :收集肝细胞肝癌 (含癌旁组织 )标本 4 3例 ,正常肝组织 10例 ,采用免疫组织化学SP法显示p34cdc2 激酶的表达并结合肝癌的临床病理特征进行分析 .结果 :在肝癌组织、癌旁肝组织及正常肝组织细胞中p34cdc2 表达定位于胞质和胞核中 ,在癌组织中过表达 ,差异有统计学意义 (P <0 .0 1) .临床分期I +II期组p34cdc2 阳性表达率高于III+IV期组 (P =0 .0 2 6 ) ;Child Pugh分级A +B级组p34cdc2 阳性表达率高于C级组 (P =0 .0 0 4 ) .而不同病理分级 ,肿瘤大小 ,有无淋巴结转移与p34cdc2 阳性表达率均无统计学意义 (P >0 .0 5 ) .结论 :p34cdc2 激酶的高表达与HCC的发生发展密切相关 ,高表达p34cdc2 激酶可作为反映肝癌临床分期及Child Pugh分级的指标 .

肝细胞肝癌组织中p34^(cdc2)表达及其与细胞增殖和凋亡的关系

目的:探讨p34cdc2激酶在肝细胞肝癌(HCC)发生发展中的作用及与增殖和凋亡的关系.方法:收集HCC(含癌旁组织42)标本47例,正常肝组织10例,采用免疫组织化学SP法显示p34cdc2激酶的表达并结合增殖与凋亡特征进行分析.结果:在肝癌组织、癌旁肝组织及正常肝组织细胞中p34cdc2表达定位于胞质中,在癌组织中过表达,差异有统计学意义(P<0.01).肝癌、癌旁组织中的增殖指数(PI)分别为(30.34±4.46)%与(27.88±5.89)%,肝癌组织明显高于癌旁组织(P<0.05);肝癌、癌旁组织中的凋亡指数(AI)分别为(8.62±2.28)%与(7.38±2.61)%,肝癌组织明显高于癌旁组织(P<0.05);p34cdc2蛋白阳性组PI(49.26±4.81)%显著高于阴性表达组(23.07±4.15)%(P<0.05),AI无明显差异(P>0.05).结论:HCC中增殖与凋亡均高于癌旁组织;p34cdc2和PCNA一样可作为反映HCC细胞分裂增殖能力的有效指标;p34cdc2并不是HCC凋亡所必须.

慢性阻塞性肺疾病急性发作期糖代谢的变化及糖皮质激素的治疗影响

采用口服葡萄糖耐量试验,胰岛素释放试验检测52例COPD急性发作期患者血糖及胰岛素水平,其中轻度低氧血症18例,中、重度低氧血症34例,静点地塞米松10mg/d5d的20例。结果:①中重度低氧血症者空腹血糖及血浆胰岛素水平明显增高,胰岛素敏感指数明显下降,与轻度低氧血症者相比有显著性差异(P<0.001,P<0.05,P<0.001),血糖与PO_2呈显著负相关(r=-0.5242,P<0.05)。②中、重度低氧血症者各时点血糖水平,葡萄糖曲线下面积均较轻度低氧血症者显著增高(P<0.05,P<0.001),两组耐糖曲线峰值均在糖负荷后1h。③胰岛素释放试验两组无显著性差异(P>0.05),但两组胰岛素释放时间均明显延长。④应用糖皮质激素治疗后,糖负荷后0.5h,1h血糖明显高于治疗前,耐糖曲线峰值提前,胰岛素释放试验各个时点释放量均明显高于治疗前,前后对比有显著性差异(P<0.05)。提示①COPD急性发作期合并低氧血症患者存在糖耐量减低和胰岛素抵抗。②应用糖皮质激素治疗使上述损害加重。

伪狂犬病病毒Ra株体外感染ST细胞超微结构的研究

本研究以伪狂犬病病毒(pseudorabies virus,PRV)Ra株体外感染ST细胞为生物模型,通过透射电镜对PRV的增殖规律和致细胞病变的显微结构进行观察。结果显示,PRV能诱导ST细胞发生明显病变,细胞的病变程度与PRV感染时间密切相关。PRV Ra株感染ST细胞,病毒吸附于ST细胞表面,以膜融合内陷的方式进入细胞和细胞核内,在细胞核内复制,出现包涵体结构,以出芽方式离开细胞核,在高尔基体等细胞内膜结构处完成病毒粒子的囊膜化过程。感染前期,病毒通过膜融合方式被释放到细胞外,完成细胞间病毒的传播;感染后期,细胞溶解,大量释放病毒粒子。感染细胞超微结构的变化主要体现为:线粒体肿胀、数目减少,嵴面积减少,核内出现包涵体,细胞融合,细胞内空泡化严重,溶细胞现象。

肺心病与糖代谢

慢性肺原性心脏病(Chronic pulmonaryheart disease.CPHD)在急性发作期常合并呼吸衰竭和心功能不全,引起缺氧和(或)高碳酸血症,导致多脏器功能紊乱,糖代谢紊乱就是其中之一,本文就肺心病的糖代谢改变进行综述。

广州地区犬细小病毒VP2基因的序列分析

犬细小病毒病是一种高度接触性传染病,临床上以急性出血性肠炎和心肌炎为特征。为研究广州地区犬细小病毒病的流行亚型,本试验采集2011—2012年间疑似病犬粪便,进行犬细小病毒(canine parvovirus,CPV)分离鉴定,提取病毒基因组进行VP2基因扩增和序列分析,与GenBank中登录的参考毒株进行比对,结果发现,分离的8株CPV中SCAU-5为CPV-2b亚型,其余为CPV-2a亚型。结果表明,2011—2012年间广州地区的流行毒株以CPV-2a亚型为主。

UHPC应用于大跨径柔性桥梁的组合优化研究

大型跨径柔性钢桥目前成为国内外建筑领域专家和学者广泛关注的话题。研究提出一种大跨径柔性桥梁钢-UHPC组合桥面有限元模型,在分析大跨径柔性桥梁钢-UHPC组合桥面疲劳的基础上,利用有限元分析软件完成建模。60 mm UHPC层钢桥面所有疲劳细节应力幅度下降趋势相对于45 mm UHPC层更为显著,6个细节下降幅度依次约为25%、18%、18%、16. 5%、10. 8%、15%。横隔板厚度从10 mm增厚到14 mm以及16 mm,疲劳细节4和5的应力幅下降范围为20%~29%,细节3最大应力幅增加幅度范围为5%~8%,且得到一种设计方案不会出现桥面疲劳开裂。

山丘公路边坡生态复绿技术应用

生态复绿技术实质上就是以绿色植物为主的植被恢复技术,客土吹附与工程防护相结合,可以达到保护坡面稳定,恢复自然生态环境的生态防护效果。不同种类的生态复绿技术所需要的土壤条件、材料及施工特点各不相同,实践中要注意防止操作误区。