妇女妊娠糖尿病与易感基因关系

目的探讨葡萄糖激酶（GCK）基因及细胞毒性T淋巴细胞抗原（CTLA-4）基因与妊娠糖尿病（GDM）的关系。方法采用1：4配比病例对照研究方法，对进行孕期健康检查的孕妇以问卷调查的方式收集一般资料，并采集被调查者血样。采用聚合酶链反应-单链构象多态性分析（PCR-SSCP）和聚合酶链反应-限制性片段长度多态性（PCR-RFLP）技术检测GCK基因和CTLA-4基因突变情况。结果CTLA-4外显子1第49位核苷酸A／G变异和CTLA-4启动子-38位核甘酸C／T变异与GDM有统计学联系，其OR及95％CI分别为4，510（1．810～11．238）和8．918（1．558～51．040）。未发现GCK基因外显子6和外显子7突变与GDM的发生之间有这联系。结论CTLA-4外显子1等基因A／G变异、CTLA-4YNK FCL BB-38位核苷酸C／T变异是GDM发生的危险因素。

妊娠糖尿病危险因素病例对照研究

目的 探讨妊娠糖尿病（GDM）的危险因素。方法 采用1：4配比病例对照研究方法。对行孕期健康检查的孕妇以问卷调查的方式收集现病史、孕产史、家族史、个人习惯、社会心理因素、父母情况等，并于首诊及孕24～48周进行体格检查和实验室检查，包括50g葡萄糖激发试验（GCT）和75g口服葡萄糖耐量试验（OGTT）实验等。结果 糖尿病家族史、父母患恶性肿瘤、孕前体质指数（BMI）、首诊腰髋比（WHR）、首诊股围与GDM的发生之间有统计学关联。OR值及其95％CI分别为6．930（1．840～26．105），13．804（1．552～122．75）。4．947（1．274～19．203），5．609（1．492～17．227）和6．269（1．867～21．045）。结论 有糖尿病家族史、父母患恶性肿瘤、孕前BMI〉26、WHR≥0．9、首诊股围〉60cm是GDM发生的危险因素。

cDNA基因芯片对人胶质瘤组织原发性耐药相关基因的筛查

目的:利用cDNA基因芯片筛查与人脑胶质瘤原发性耐药相关的基因,为获取不同个体胶质瘤化疗药物药敏预报基因提供实验依据。方法:收集符合要求的临床手术切除的人脑胶质瘤组织标本共6例,原代培养肿瘤细胞;由MTT法检测替尼泊苷(teniposide,VM-26)对胶质瘤细胞生长的抑制率,按VM-2645μg/ml(人血药峰浓度)时抑制率>30%为敏感、≤30%为耐药作为标准,将6例组织细胞分为耐药和敏感2组。cDNA芯片检测结合聚类分析方法筛查瘤细胞中与耐药相关的差异表达基因;以半定量RT-PCR法检测瘤细胞中HDAC1基因表达加以验证。结果:根据VM-26对细胞抑制率将6例胶质瘤细胞分为3例VM-26敏感和3例耐药。cDNA芯片结合聚类分析共筛选出有表达差异的基因21个,其中表达上调的基因6个、表达下调的基因15个。将表达差异明显的HDAC1经半定量RT-PCR验证,该基因在6例组织中都有表达,趋势与芯片结果一致。结论:胶质瘤原发性耐药可能与cDNA芯片筛查到的21个基因相关,其确切的耐药机制需要进一步深入研究。

胶质瘤耐药细胞株的建立及其继发性耐药相关基因的筛查

目的:构建胶质瘤耐替尼泊苷(teniposide,又称VM-26)细胞株,利用基因芯片筛查该细胞株继发性耐药相关基因并证实其表达。方法:选用人胶质瘤细胞系SHG44为靶细胞,从低剂量起始逐步递增用药量(每4 000个细胞VM-26剂量由0.135 ng至4.5 ng)诱导建立对VM-26耐药的细胞株,绘制亲代细胞系和耐药细胞株增殖曲线比较两者倍增时间,采用细胞毒性实验计算半数抑制浓度(IC_(50))比较两者耐药程度的差异。应用人类cDNA表达谱芯片检测耐药和敏感细胞基因表达谱的变化,筛查出与耐药有关的基因并经半定量RT-PCR验证。结果:经过72代诱导培养,建立了稳定耐药的细胞株SHG44/VM-26,耐药性是亲代细胞的52.6倍;耐药细胞倍增时间明显长于亲代细胞(25.6 vs 48.9 h);cDNA芯片筛选出11个基因表达上调,42个基因表达下调;半定量RT-PCR证实基因MDR1、NGFR、HSP22、CX IX、CDKN3和NADE的表达与基因芯片结果基本一致。结论:成功建立胶质瘤耐替尼泊苷细胞株SHG44/VM-26,该细胞株的继发性耐药与基因MDR1、NGFR、HSP22的高表达和CX IX、CDKN3和NADE的低表达相关。

天津市和平区苯作业场所空气中苯浓度调查

目的 :了解苯作业场所空气中苯浓度 ,推测苯作业发展趋势。方法 :采用和平区1993～1999年39家工业企业 ,220个苯作业点 ,660个空气样品中的苯浓度值 ,按不同作业工种分为油漆组、化工 (原料 )组、粘胶组及印刷组。通过成组设计的多个样本比较的秩和检验进行分析。结果 :1997年内不同作业组空气中苯平均浓度差异有显著性(H=8.0000P<0.05) ,印刷组苯平均浓度高于其它作业组 ,其余年度中差异无显著性 (P>0.05);1993～1999年 ,印刷组苯作业场所的苯平均浓度差异无显著性 (P>0.05)。结论 :和平区苯作业开始由较低浓度过渡到较高浓度 ,以油漆业为主过渡到以印刷业为主。并且 ,1997年印刷组苯平均浓度超过国家卫生标准 。

牛磺酸对环磷酰胺诱发遗传损伤的保护作用及其机制探讨

牛磺酸（Ｔａｕｒｉｎｅ，Ｔａｕ）化学名称２－氨基乙磺酸（Ｈ２Ｎ—ＣＨ２—ＣＨ２—ＳＯ３Ｈ），１８２７年作为牛胆汁的组成成分首次被分离出来而得名［１］。长期以来，人们一直认为它只是含硫氨基酸的无功能终末代谢产物。１９７５年Ｈａｙｅｓ［２］与Ｒａｉｈａ［...

三种分离人外周血单核细胞方法的比较

目的:用3种方法从人外周血分离单核细胞,比较细胞纯度、得率、实验成本及所需时间,选择最适宜的分离方法。方法:用密度梯度离心法获得外周血的单个核细胞,分别用贴壁法、免疫磁珠法和流式细胞术法进一步分离单核细胞。经CD14抗体标记,用流式细胞术检测细胞纯度,计算细胞得率、实验成本及所需时间。结果:用贴壁法、免疫磁珠法和流式细胞术法分离单核细胞,细胞纯度分别为18.8%、80%和73.4%;细胞得率为5%、11%和7.5%;每获得2×107个单核细胞,实验成本约500元、1 500元和2 100元,实验耗时约6 h、6 h和10 h。结论:免疫磁珠法是最适宜的分离人外周血单核细胞的方法,具有细胞纯度与得率较高,实验成本较低,耗时较短的优点。

塞来昔布与茶多酚合用对乳腺癌细胞增殖及凋亡的影响

目的:研究塞来昔布与茶多酚合用对三阴乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖及凋亡的影响。方法:MTT比色法检测塞来昔布、茶多酚单药及两者联合用药对乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖的影响。Hoechst33258荧光染色观察细胞形态学改变。流式细胞术AnnexinV-FITC/PI双染检测细胞凋亡率。结果:MTT结果显示塞来昔布(10μmol/L)与不同浓度茶多酚(6.25、12.5、25、50、100μg/mL)单用及合用均对MDA-MB-231细胞产生增殖抑制作用,且联合用药组的抑制率高于各单用组,差异具有统计学意义(P<0.05)。Hoechst33258荧光染色结果显示塞来昔布(10μmol/L)与茶多酚(50、100μg/mL)合用组的凋亡细胞较单用组明显增加,出现典型凋亡形态学特征。流式细胞术进一步证明两药合用使凋亡率显著增加。结论:塞来昔布与茶多酚合用具有显著抑制三阴乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖,诱导细胞凋亡的作用。

消化系统整合教学模式的探索与体会

消化系统整合教学模式是将消化系统的正常功能、常见疾病的病理变化、病理生理机制、诊断学方法、治疗、预防、人文等知识进行有机整合。整合教学模式打破原有学科之间的界限,将与消化系统相关的教学内容和知识点进行梳理,在理论课和实验课的基础上嵌入PBL,采用终结性评价和形成性评价相结合的方式对学生进行考核。课程整合改革中遇到一些挑战,如教学团队建设、PBL教学的实施、教材建设、教学效果等问题。教师还需通过不断探索和实践来完善符合自身特点的整合教学模式。

无创肢体缺血预适应对心肌缺血/再灌注损伤内皮功能的影响

目的研究无创肢体缺血预适应(limb ischemic preconditioning,LIPC)减轻心肌缺血/再灌注(ischemia/reperfusion,I/R)损伤的保护作用及其作用机制。方法健康♂Wistar大鼠随机分为I/R组、I/R+LIPC组、I/R+5羟基癸酸钠(5-hydroxydecanoate,5-HD)组及I/R+LIPC+5-HD组。I/R+LIPC组和I/R+LIPC+5-HD组连续3 d经历左后肢缺血预适应。d 4,全部动物经历心肌I/R损伤。I/R+5-HD组和LIPC+5-HD组于缺血前及I/R期间给予ATP敏感性钾通道阻断剂5-HD。结果与I/R组比较,LIPC缩小心肌梗死范围(P<0.05),降低心肌细胞凋亡指数(P<0.01),减少Fas、Fas L阳性细胞数(P<0.01),减少血清一氧化氮/内皮素-1比值降低的程度(P<0.05)。5-HD取消LIPC诱导的上述保护作用。与正常对照比较,心肌组织mir-30a-3p的表达在I/R组增加(P<0.01),在LIPC组减少(P<0.01)。结论LIPC可减轻心肌I/R损伤,改善内皮功能,其机制可能与开放ATP敏感性钾通道、调节血中一氧化氮与内皮素-1之间的平衡、减少心肌组织mir-30a-3p表达有关。

慢病毒介导生长分化因子15基因沉默增强胶质瘤U373细胞的化疗耐药性

目的:探讨慢病毒介导的生长分化因子15(growth differentiation factor 15,GDF15)基因低表达对胶质瘤U373细胞对化疗药物替尼泊苷(teniposide,VM-26)和顺铂(cisplatin,DDP)耐药性的影响及其可能的机制。方法:将靶向GDF15的GDF15-RNAi克隆入慢病毒载体GV248,构建shRNA慢病毒LV-GDF15-RNAi,用无关序列构建阴性对照慢病毒LV-RNAi,分别稳定转染U373细胞,Western blotting检测转染对细胞内GDF15表达的影响。用梯度质量浓度的VM-26(0.1、0.5、2.5和12.5μg/ml)和DDP(0.08、0.4、2和10μg/ml)处理LV-GDF15-RNAi组和LV-RNAi组细胞48 h,MTT法、Hoechst/PI双染检测LVGDF15-RNAi转染对U373细胞VM-26、DDP耐药性的影响,Western blotting检测LV-GDF15-RNAi转染对U373细胞凋亡相关蛋白Bcl-2、Bcl-x L、P53和Caspase-3表达的影响。结果:成功构建稳定低表达GDF15的U373细胞系,LV-GDF15-RNAi组细胞内GDF15表达较LV-RNAi组和野生型U373细胞显著降低(0.013±0.001 vs 0.622±0.068、0.601±0.004,均P<0.01)。VM-26和DDP在最低浓度时,LV-GDF15-RNAi组细胞存活率即显著高于LV-RNAi组[VM-26 0.1μg/ml:(91.84±2.64)%vs(80.71±2.66)%,P<0.01;DDP 0.08μg/ml:(102.35±6.79)%vs(85.10±3.69)%,P<0.01],随药物浓度升高差异更加显著。相同浓度的VM-26或DDP处理下,LV-GDF15-RNAi组细胞凋亡数均少于LV-RNAi组;同时,LV-GDF15-RNAi组的Bcl-2和Bcl-x L的表达量比LV-RNAi组显著增多(P<0.05或P<0.01),Caspase-3和P53的表达量显著下降(P<0.05或P<0.01)。结论:下调胶质瘤U373细胞中GDF15水平能够增强细胞对VM-26和DDP的耐药性,其机制可能与GDF15调控Bcl-2、Bcl-x L、P53和Caspase-3的表达有关。

miR-139-5p低表达重组慢病毒的构建及其在H9c2细胞的表达验证

目的构建miR-139-5p低表达慢病毒载体,检测其在H9c2细胞的表达效果。方法根据大鼠miR-139-5p序列,设计合成其靶点序列,并合成寡核苷酸双链,克隆入慢病毒载体p GC-LV,与p Helper 1.0和p Helper 2.0共转染293T细胞,包装病毒。收取病毒上清液,纯化后感染H9c2细胞。荧光倒置显微镜下观察感染效率,实时定量PCR检测慢病毒感染后H9c2细胞中miR-139-5p的相对表达量。结果成功构建miR-139-5p低表达慢病毒载体,病毒感染H9c2细胞的效率超过95%,miR-139-5p表达明显减少。结论成功构建了miR-139-5p低表达慢病毒载体,包装的病毒可在H9c2细胞中实现抑制miR-139-5p表达的效果。

HDAC1过表达诱导胶质瘤细胞产生耐药性

目的:构建组蛋白去乙酰化酶(histone deacetylase 1,HDAC1)过表达胶质瘤U87细胞系,探讨HDAC1过表达对胶质瘤细胞化疗药耐药性的影响。方法:分别用HDAC1重组过表达慢病毒载体p CDH-CMV-MCS-HDAC1-EF1-Puro和阴性空载体病毒p CDH-CMV-MCS-EF1-Puro转染U87MG细胞,通过嘌呤梯度浓度筛选出HDAC1稳定过表达细胞系U87MGHDAC1和空载体对照细胞系U87MG-Control,经Western Blotting鉴定,用不同浓度替尼泊苷(VM-26)和顺铂(cisplatin,DDP)对两种细胞进行处理,MTT法检测存活率,Hoechst/PI双染法检测细胞凋亡,Western Blotting检测Bcl-2、Bax及Caspase-3蛋白表达。结果:成功构建U87MG-HDAC1稳定过表达细胞系。与U87MG-Control组相比,U87MG-HDAC1组中U87MG-HDAC1蛋白的表达显著升高[(1.148±0.024)vs(0.580±0.003),P<0.01];药物处理后,U87MG-HDAC1细胞存活率显著升高[0.1μg/ml VM-26:(95.57±0.45)%vs(68.8±1.49)%,P<0.01],[0.08μg/ml DDP:(99.20±7.4)%vs(72.48±2.03)%,P<0.01];凋亡细胞个数比例明显下降(均P<0.05),Caspase-3蛋白表达量显著降低(P<0.01),Bcl-2/Bax蛋白表达量比值明显升高(P<0.01)。结论:胶质瘤U87MG细胞中HDAC1过表达明显增强细胞对化疗药耐药性与Caspase-3和Bcl-2/Bax表达有关。

Shc3高表达抑制人肝癌细胞系凋亡并参与肝癌耐药

目的探讨Shc3对人肝细胞癌HCC细胞凋亡及耐药机制。方法选取稳定下调Shc3的人肝细胞癌系HCCLM3和HepG2细胞及其对照组scramble细胞,稳定上调Huh7和HepG2细胞及其对照组pCDH细胞。Western blot检测Shc3、MEK、p-MEK、ERK和p-ERK蛋白表达;real-time PCR检测Shc3 mRNA表达;凋亡实验检测细胞凋亡;CCK-8法检测细胞增殖。结果成功验证Shc3降表达及过表达细胞系;与scramble组比较,Shc3降表达组细胞MEK/ERK通路激活程度明显降低(P<0.05),细胞凋亡比例增加(P<0.05);与pCDH组比较,Shc3表达上调增加细胞对索拉菲尼耐受性(P<0.05),并且MEK/ERK通路激活程度明显增强(P<0.05)。结论Shc3可通过干扰HCC细胞凋亡,激活MEK/ERK通路,增加HCC细胞对索拉菲尼的耐药性,本研究结果为靶向Shc3治疗肝细胞癌提供了理论依据和实验室基础。

PBL教学模式在留学生药理学实验教学中的探索

结合留学生药理学实验教学中出现的问题及留学生自身的特点,将PBL教学模式引入留学生药理学实验教学,以提高教学效果,培养高素质的留学生。实践教学对象为天津医科大学临床医学专业本科留学生,教学效果由期末考试和问卷调查综合评价。经过此次教学研究证实,经过PBL教学训练的学生,自学能力、自我实验设计能力、与人沟通能力及表述能力、融会贯通药理学知识及建立系统实验知识结构方面有显著提高。PBL实验组的实验考试成绩平均为(79. 6±8. 2)分,传统教学组平均成绩为(69. 8±7. 3)分,两组之间存在显著差异,P <0. 05。此次教学探索提示在留学生药理学实验教学中引入PBL模式势在必行。

GDF15表达下调促进人胶质母细胞瘤细胞系U87MG增殖

目的探讨生长分化因子15(GDF15)表达下调对人胶质母细胞瘤U87MG细胞系增殖的影响。方法选取稳定下调GDF15的人胶质母细胞瘤U87MG细胞作为shGDF15组,以scramble细胞作为对照组。Western blot检测GDF15蛋白表达;增殖曲线和BrdU掺入实验检测细胞增殖;Western blot检测ERK1/2和p-ERK1/2蛋白表达;CCK-8实验检测细胞增殖。结果与scramble组相比较,shGDF15组细胞增殖明显加快(P<0.05);细胞周期S期DNA合成增加(P<0.01);ERK通路激活水平明显增加(P<0.05);对化疗药物VM-26的耐受性明显增强(P<0.05),并且ERK通路抑制剂可降低GDF15表达下调促进细胞增殖作用。结论GDF15可通过下调ERK通路抑制人胶质母细胞瘤U87MG细胞S期DNA合成及细胞增殖,可作为提高胶质瘤临床化疗敏感性的潜在靶点。

生长分化因子15过表达对心肌缺血再灌注的保护作用及与其自噬的关系

目的通过构建生长分化因子15(GDF15)稳定过表达的心肌细胞株,探讨其对H9c2心肌细胞缺血/再灌注(I/R)损伤凋亡和自噬的影响。方法建立H9c2 I/R损伤模型,用靶向GDF15过表达慢病毒和阴性空载体病毒转染H9c2细胞,筛选出GDF15稳定过表达细胞株。分为3组:对照组、空载体组和GDF15过表达组。用MTT法检测I/R后细胞存活率,以LDH试剂盒检测细胞培养上清液中乳酸脱氢酶活力,以免疫印迹法检测凋亡相关蛋白Caspase-3、Bcl-2、Bax和自噬相关蛋白Beclin-1、LC3-B的表达。结果 I/R 2 h,对照组、空载体组和过表达组的细胞存活率分别为(60.47±5.03)%,(63.21±17.13)%,(74.93±10.03)%,过表达组细胞活性较对照组与空载体组均增高,差异有统计学意义(P<0.01)。对照组和过表达组LDH活力值分别为108.72±7.20,50.29±10.05,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.01)。在I/R干预下,凋亡相关蛋白Caspase-3在对照组和过表达组的灰度值分别为99.73±0.61,67.68±0.47,过表达组低于对照组,差异有统计学意义(P<0.01)。Bcl-2/Bax在对照组、空载体组和过表达组的灰度值分别为72.52±2.05,39.55±0.46,82.52±1.39,过表达组明显高于对照组和空载体组,差异有统计学意义(P<0.01)。在I/R后,自噬相关蛋白Beclin-1在对照组、空载体组和GDF15过表达组的灰度值分别为58.93±0.64,36.71±0.35,88.39±0.72,过表达组明显高于对照组和空载体组,差异有统计学意义(P<0.01)。LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ在空载体组和GDF15过表达组的灰度值分别为2.11±0.02,3.32±0.04,过表达组明显高于空载体组,差异有统计学意义(P<0.01)。结论上调H9c2细胞的GDF15水平可保护H9c2大鼠心肌细胞,其作用机制可能通过促进细胞的自噬作用得以实现。