小鼠母体糖尿病(DM)对胚胎早期发育的影响

通过腹腔注射链脲佐菌素(STZ)建立小鼠糖尿病模型后,运用体外受精技术研究母体高血糖对早期胚胎发育的影响。选取6～8周龄ICR母鼠2次腹腔注射小剂量STZ构建小鼠糖尿病模型,并设实验对照组。成功造模后对实验小鼠眼底静脉丛采血并测定14项血生化指标。通过孕马血清促性腺激素(PMSG)配合人绒毛膜促性腺激素(hCG)对实验母鼠进行超数排卵,所得卵子与正常ICR公鼠的精子体外受精并培养24h后,观察胚胎的发育情况并进行比较。结果表明实验组小鼠的空腹血糖明显升高(P<0.001),空腹血糖值≥9.5mmol/L的小鼠比例为76.6%。14项血生化指标中,实验组的谷丙转氨酶、肌酐、低密度脂蛋白、胆碱酯酶和糖化血红蛋白均较对照组显著升高(P<0.01)。高血糖模型小鼠卵子与正常精子体外受精后的受精率较正常小鼠低,且有血糖越高比例越低的趋势,说明体外受精技术虽可以改善糖尿病母鼠胚胎的受精率,但母体高血糖仍影响早期胚胎的发育。

诱发性糖尿病小鼠体外受精早期胚胎的差异基因分析

目的运用体外受精技术改变糖尿病小鼠胚胎的早期发育环境，研究母体糖尿病环境对早期胚胎基因表达的影响。方法选取6-8周龄ICR雌鼠2次腹腔注射小剂量STZ构建小鼠糖尿病模型，模型雌鼠超数排卵后通过体外受精的方法将培养至2一细胞的胚胎转移至正常假孕ICR雌鼠的输卵管内，取14d胎龄的胚胎提取总RNA。用Agilent 2100 Bioanalyzer系统对总RNA进行质检合格后，经过逆转录、标记、杂交、洗脱，芯片结果用Affymetrix Scanner 3000进行扫描，用Command Console Software3．1读取原始数据，实验重复3次。结果筛选出差异表达基因121个（P〈0．05），其中有119个基因实验组的表达量是对照组的0．5倍以下，2个基因实验组的表达量是对照组的2倍以上。结论母体糖尿病环境能影响其卵子的生长发育，通过上调代谢相关基因和下调发育相关基因影响早期胚胎的生长发育。

三种不同冷冻保护剂对小鼠附睾冷冻效果的比较

目的：探讨三种不同冷冻保护剂对C57BL/6J小鼠附睾冷冻的效果。方法性成熟并交配过的6～8周龄C57BL/6J雄鼠附睾，分别用3种不同冷冻保护剂二甲基亚砜（DMSO）、丙二醇（PROH）、R18S3进行玻璃化冷冻、复苏和精子采集，观察比较三个实验组的复苏精子形态、存活率以及生殖能力。结果三组冷冻复苏分离后的精子形态完整，具有镰刀头状结构；荧光染色后PROH组精子存活率为（88.17±3.43）％，明显高于DMSO组：（61.17±10.65）％和R18S3组（16.83±6.49）％（ P＜0.05）；经辅助体外受精后均具有受精能力。获得的胚胎移植后可得到正常子代小鼠（DMSO∶PROH∶R18S3＝13∶8∶17）。结论3种冷冻保护剂均适用于C57BL/6J小鼠附睾冷冻，但PROH冷冻效果较好。

移植部位对小鼠睾丸移植效果的影响

目的比较不同的移植部位对睾丸移植效果的影响,以探索建立疾病模型小鼠安全保存的新方法。方法按移植部位的不同分为3组:背部皮下组,睾丸白膜内组和肾包膜下组。移植后处死受体鼠回收移植物。测试和分析受体精囊的重量,移植物存活率,回收物增重的倍数和生殖细胞的分化情况。结果不同实验组移植睾丸的生殖细胞分化差异显著。睾丸白膜内组的分化情况最好与假移植对照组相似;背部皮下移植组睾丸的分化率为29.2%;肾包膜下组未见分化。结论睾丸白膜内移植最利于精子的发生;背部皮下移植是睾丸移植的次优选择;肾包膜下睾丸移植不适合用于小鼠雄性生殖器官的安全保存。

三种冷冻保护剂对新生小鼠睾丸组织冷冻效果的比较

目的探讨三种不同冷冻保护剂对新生C57BL/6J小鼠睾丸冷冻的效果。方法 5日龄C57BL/6J雄鼠睾丸组织,分别用3种不同冷冻保护剂(二甲基亚砜<dimethyl sulfoxide,DMSO>、丙二醇<propylene Glycol,PROH>、EFS20/40)进行玻璃化冷冻。复苏冷冻后的睾丸组织,每组一部分进行组织学分析,另一部分进行组织移植,移植后检测关键基因表达水平以及卵胞质内单精注射,并设相应对照组。结果 3个实验组睾丸组织形态改变与对照组相比均具有显著性差异(P<0.01),其中EFS组分值最低即改变最小;原位移植8周后组织块生长发育,存活率分别为DMSO组16.7%、PROH组13.3%、EFS组23.3%,存在成熟精子;睾丸组织特异性基因pgk-2和TESK1正常表达;卵胞质内单精注射表明移植后睾丸内精子均具有受精能力,胚胎移植后可得到正常子代小鼠(DMSO∶PROH∶EFS=5∶2∶8)。结论 3种冷冻保护剂均能良好保存睾丸组织结构和功能。其中,EFS方法保存的睾丸组织形态改变最小、功能完善更适于睾丸组织的冷冻。

母体糖尿病环境对体外受精胚胎早期发育的影响

目的通过腹腔注射链脲佐菌素（streptozotocin，STZ）构建小鼠糖尿病（diabetesmellitus，DM）模型后，运用体外受精技术研究母体高血糖环境对早期胚胎发育的影响。方法选取6～8周龄ICR雌鼠经2次腹腔注射小剂量STZ构建小鼠糖尿病模型，并设实验对照组。实验母鼠体外受精得到2-细胞胚胎，统计受精率等，并将2．细胞胚胎移植至代孕母鼠体内。取14d胎龄的胚胎提取总RNA，用Agilent2100 Bioanalyzer系统对总RNA进行质检合格后，经过逆转录、标记、杂交、洗脱，芯片结果用Affymetrix Scanner3000进行扫描，用Command Console Software3．1读取原始数据，实验重复3次，比较实验组与对照组的基因表达的差异情况。结果较高血糖组陋潍为9．5～15．5mmol／L）母鼠卵子体外受精后发育到2-细胞胚胎的比例为52．3％与对照组的72．1％存在显著统计学差异（P〈0．01），高血糖组（血糖值〉15．5retool／L）,％胎发育到2-细胞的比例为44．2％与对照组相比也存在显著统计学差异（P〈0．01）。芯片筛选出差异表达基因121个（P〈0．05），其中有119个基因实验组的表达量是对照组的0．5倍以下，2个基因实验组的表达量是对照组的2倍以上。结论糖尿病小鼠的卵子与正常精子体外受精后发育到2．细胞的比例较对照组小鼠低，并且血糖值越高比例越低。由此说明母体糖尿病环境能影响其卵子的生长发育，并且这些影响可能是通过上调代谢相关基因和下调发育相关基因产生的。

小鼠冷冻胚胎、精子常见病原菌快速检测方法的建立

目的建立实验动物冷冻资源(胚胎、精子等)常见病原菌的微量、快速监测方法。方法以实验动物三个常见病原菌(金黄色葡萄球菌、肺炎克雷伯氏菌和乙型溶血性链球菌)为研究对象,分别提取三个阳性菌株的DNA,通过引物设计和相应PCR条件的优化,建立三种阳性菌株的PCR检测方法。然后提取冷冻资源(胚胎、精子等)中的DNA,按照三个阳性菌的PCR条件进行检测,并将一部分样品DNA用荧光定量PCR方法进行检测。结果 1成功建立三个阳性菌株的PCR检测方法。三种病原菌的最低检测浓度,金黄色葡萄球菌为4.19×10^(-5)ng/μL,肺炎克雷伯氏菌为1.98×10^(-5)ng/μL,乙型溶血性链球菌为1.07×10^(-3)ng/μL.2通过普通PCR和荧光定量PCR方法均未检测出样品中三种阳性菌的存在。结论建立了小鼠冷冻胚胎、精子常见病原菌微量、快速检测方法。

供应商来源的实验大鼠和小鼠微生物监测结果分析:以复旦大学实验动物科学部为例

目的对供应商来源的实验大鼠、小鼠进行常规微生物监测,为实验动物设施科学管理提供重要依据,确保相关实验结果的可靠性。方法以复旦大学实验动物科学部为例,在2021年4月到2023年4月间,按照单纯随机抽样原则,对来自7家供应商的大鼠、小鼠进行微生物质量抽检。具体参照国家标准中SPF级实验动物必须排除的微生物指标及其检测方法进行。结果抽检动物的检测总合格率为80.36%。其中SPF级大鼠抽检合格率为52.63%,SPF级近交系小鼠抽检合格率为82.76%,SPF级远交系小鼠抽检合格率为86.67%,SPF级免疫缺陷小鼠抽检合格率为86.36%。检测不合格的细菌学指标集中在金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌、肺炎克雷伯杆菌和啮齿杆菌H型,检出率分别为10.76%、3.16%、2.53%和0.63%。不合格的血清学指标为仙台病毒,发生率为2.53%。此外,除国家标准规定SPF级小鼠必须排除的微生物指标外,还在近交系小鼠中检测到阿米巴原虫和肠杆菌属菌株;在免疫缺陷小鼠中检测到产酸性克雷伯杆菌,检出率分别为1.15%、2.30%和4.55%。结论供应商来源的大小鼠动物中存在一定的病原体感染发生率,相关动物设施有必要强化实验动物微生物监测,确保接收和饲养动物的质量,这对提高实验结果准确性和保护实验动物从业人员的职业健康具有重要意义。

受体和移植时间对小鼠睾丸移植效果的影响

通过比较不同受体和不同移植时间对睾丸移植效果的影响,以期探索建立疾病模型小鼠安全保存的新方法。按受体不同分为C57BL/6J受体8周组和裸鼠受体8周组,按移植时间的不同分为裸鼠受体8周组和裸鼠受体10周组。移植后处死受体鼠回收移植物。测试和分析移植物存活率、回收物增重的倍数和生殖细胞的分化情况。结果表明:不同试验组移植睾丸的生殖细胞分化差异显著,裸鼠受体8周组的分化情况好于C57BL/6J受体8周组(P<0.01);裸鼠受体10周组分化好于裸鼠受体8周组(P<0.05)。由此可见裸鼠受体的移植效果要好于同品系受体,将睾丸移植时间从8周延长到10周有利于生殖细胞的分化。