一种有效的黑曲霉启动子捕获探针的构建及其应用

启动子对基因的表达起着关键的作用,为获得黑曲霉强启动子,该文以柠檬酸生产菌株黑曲霉(Aspergillus niger)CGMCC 10142为出发菌株,运用启动子捕获探针和基因重组技术筛选菌株高强度启动子,并确定其核心启动区域。结果显示:以红色荧光蛋白基因(Rfp)为报告基因,潮霉素抗性基因(HygR)为筛选标记,构建黑曲霉启动子捕获探针质粒pN3,借助T-DNA随机整合到黑曲霉基因组,筛选具有高潮霉素抗性和强红色荧光表型的突变株,进而通过交错热不对称链式聚合酶反应(thermal asymmetric interlaced polymerase chain reaction,Tail-PCR)获得整合位点上游核苷酸序列,测序确定该序列为糖苷水解酶基因启动子区(Pgh),通过分析其具有多个转录因子结合元件。对Pgh启动子进行5'端缺失分析,获得6个不同长度5'端缺失的启动子序列,并与强启动子PglaA对比,根据报告基因Rfp表达情况确定启动子Pgh的-1 066~-766 bp为其核心区域。

过表达kojR高产曲酸米曲霉的转录组差异分析

曲酸是一种真菌次生代谢产物,在化妆品、食品和制药工业中有多种用途。为揭示米曲霉发酵生产曲酸的生物合成机制,该研究利用基因工程的手段获得一株kojR过表达菌株T58号,摇瓶发酵曲酸产量最高达到29.54 g/L,较原始米曲霉菌株3.042的10.12 g/L提升191.9%。将发酵过程中获得的菌株T58与3.042菌丝体进行转录组分析,发现两者之间存在2450个显著差异表达基因,其中1203个基因表达上调,1247个基因表达下调。菌株T58差异性表达量最高的前20个基因中,上调基因主要为不同类别的氧化还原酶,与氮源利用相关基因的转录水平显著下调。基因本体数据库分析显示,与转运活性相关的差异基因数量最多。

一株产黄色素细菌的筛选鉴定及其产黄色素培养条件优化

对一株从芦苇根部土壤中分离得到的产黄色素菌株BX-1进行分离鉴定并优化BX-1菌株产黄色素培养条件。采用形态学观察、分子生物学鉴定方法与单因素、正交试验的试验设计,可得BX-1菌株为革兰氏阳性细菌,盐生谷氨酸杆菌(Glutamicibacter halophytocola);该菌株产胞内黄色素,易溶于甲醇,在411、438、467 nm处存在吸收峰;BX-1菌株最适固态培养条件:20℃光照培养240 h;固态培养基组成为3%谷氨酸钠、3%豆粕粉、0.5%酵母浸出粉、1%氯化钠、0.25%磷酸二氢钾、0.1%硫酸镁、初始pH7.0。

基于OPC服务的上位机与PLC系统在自动化项目中的开发与应用

本文简要介绍了OPC原理、KEPServerEX等第三方OPC服务器，以及通过0Pc服务实现通讯的IFIXSCADA和SIEMENSs7系列PLC的自动化控制系统，并根据工程实践简述该方式的工业自动化控制系统的控制结构和功能，可供该领域的自动化设计及工程人员参考。