310例慢性乙型肝炎患者肝脏炎症及纤维化的临床病理特征

目的:长期的乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)感染可引起肝脏反复出现炎症坏死,进而发展为肝纤维化、肝硬化甚至肝癌。肝脏病理改变程度是指导慢性乙型肝炎(chronic hepatitis B,CHB)患者抗病毒治疗的重要依据之一。由于肝穿刺活检临床使用的局限性,有必要寻找到更好的无创性指标以评估CHB患者的肝脏病变程度,指导抗病毒治疗。本研究旨在分析CHB患者不同程度肝脏病变的临床特征,并探索谷丙转氨酶(alanine aminotransferase,ALT)正常的CHB患者肝脏炎症及纤维化程度的影响因素。方法:回顾性纳入完善肝脏病理活体组织检查(以下简称“活检”)的CHB患者310例。收集患者临床资料,以肝脏病理活检结果为金标准,分析总体样本相关临床指标与肝脏病理改变程度的关系。筛选ALT正常的CHB患者,探索影响其肝脏炎症及纤维化程度的独立危险因素。结果:310例CHB患者中,显著性肝脏炎症[肝脏炎症程度分级(liver inflammation grade,G)≥2]和显著性肝纤维化[肝纤维化程度分期(liver fibrosis stage,S)≥2]的患者分别为249例(80.3%)和119例(38.4%)。总体样本单因素分析结果显示:ALT、谷氨酰转肽酶、碱性磷酸酶水平以及HBV DNA定量与显著性肝脏病理改变(G/S≥2)相关(均P<0.05)。ALT正常的132例CHB患者中,肝脏病理G/S≥2、G≥2、S≥2的患者分别为80.3%(106/132)、68.2%(90/132)、43.2%(57/132)。显著性肝脏炎症的独立危险因素为HBV DNA定量>2000 U/mL(OR=3.592,95%CI 1.534~8.409);显著性肝纤维化的独立危险因素为碱性磷酸酶升高(OR=1.022,95%CI 1.002~1.043)、血小板计数降低(OR=0.990,95%CI 0.982~0.998)及乙型肝炎e抗原(hepatitis B e antigen,HBeAg)阳性(OR=14.845,95%CI 4.898~44.995)。根据多因素分析建立ALT正常的CHB患者显著性肝纤维化诊断模型,并绘制受试者操作特征曲线,曲线下面积为0.844(95%CI 0.779~0.910)。结论:肝脏的病理改变程度需综合不同临床指标进行评估。ALT正常的CHB患者中仍有相当一部分存在肝脏显著病理改变,需及时识别并进行抗病毒治疗。在这部分患者中,HBV DNA定量>2000 U/mL提示存在显著性肝脏炎症;而基于碱性磷酸酶、血小板计数及HBeAg水平建立的显著性肝纤维化诊断模型有助于评估肝脏纤维化程度。

MEIA法测定HBV血清标志物的临床应用意义

目的通过与酶联免疫吸附试验(ELISA)的比较,了解微粒子酶免疫分析法(MEIA)对乙型肝炎病毒(HBV)血清标志物的检测性能。方法分别用MEIA法和ELISA法对HBV感染者的血清标志物(HBsAg、HBeAg、抗HBc和抗HBe)进行检测。结果1140例患者血清HBV标志物检测,MEIA法阳性率为:HBsAg94.00%,HBeAg46.75%,抗HBc97.96%,抗HBe61.41%;ELISA法阳性率为:HBsAg91.89%,HBeAg36.14%,抗HBc93.26%,抗HBe18.11%;MEIA法阳性率高于ELISA法,其中对HBeAg和抗HBe的检测,两种方法差异有高度显著性(P<0.01)。与MEIA法比较,ELISA法检测HBsAg的相对灵敏度达97.46%,抗HBc为94.93%,HBeAg为73.41%,抗HBe最低,为41.73%。对一些低滴度的HBeAg/抗HBe的HBV感染者,ELISA法检测可出现假阴性。结论对于血清HBV标志物的检测,MEIA法和ELISA法均有较高的特异性,但MEIA法敏感性优于ELISA法。

胸腺素α_1治疗慢性重型乙型病毒性肝炎的疗效观察

目的观察胸腺素α1对慢性重型乙型病毒性肝炎的治疗效果。方法将44例慢性重型乙型病毒性肝炎患者分为治疗组(综合治疗+胸腺素α1)20例和对照组(综合治疗)24例,观察8周,测定两组治疗前后血清总胆红素(TBIL)、凝血酶原活动度(PTA)、病毒学标志物(HBsAg与HBeAg)以及HBV DNA等指标,比较自发性细菌性腹膜炎(SBP)治愈率以及患者存活率。结果治疗后,与对照组比较,治疗组血清TBIL明显下降(P<0.01),PTA明显上升(P<0.01);治疗组SBP治愈率为81.25%,对照组为42.11%,两组比较,差异有显著性(P<0.05);治疗组存活率为75.00%,对照组为45.83%,两组差异有显著性(P<0.05)。治疗前后两组血清病毒标志物和HBV DNA无明显变化;未发现明显毒副反应。结论胸腺素α1能显著提高慢性重型乙型病毒性肝炎SBP治愈率,改善肝功能,并提高其存活率。

人sTNFR1基因原核表达及体外抗肝细胞凋亡的活性研究

采用RT-PCR,从Hela细胞的mRNA中扩增人sTNFR1基因,构建含有目的片段的T载体克隆及原核表达载体pMAL-c2x重组质粒亚克隆,转化入大肠杆菌,测序证实其序列与基因数据库中sTNFR1基因一致.经异丙基-β-D半乳糖苷酶(IPTG)诱导表达,淀粉树脂亲和层析法纯化,得到融合蛋白sTNFR1-MBP.结果显示:经Western-blotting检测,sTNFR1-MBP具有免疫活性L流式细胞术检测目的蛋白对TNF-α诱导QSG7701凋亡有抑制作用,这为今后的研究打下了基础.

人sTNFR1基因的克隆以及在NIH3T3细胞中的稳定表达

以Hela细胞的总RNA为模板,用RT-PCR方法扩增sTNFR1全编码区基因片段,构建含有目的片段的T载体克隆及真核表达载体pcDNA3.1(-)重组质粒亚克隆,将重组质粒和脂质体共同转染NIH3T3细胞系,G418筛选稳定转染细胞株.经核苷酸序列测序和酶切鉴定,成功构建了pcDNA3.1(-)-sTNFR1真核表达质粒,脂质体法建立了高效表达sTNFR1的稳定转染细胞系,并经RT-PCR和Western Blotting鉴定.人sTNFR1基因能在NIH3T3细胞系中稳定表达,为今后的研究打下了基础.

传染病学实行双语教学的思考

对传染病学实行双语教学，实施教学目标的制定、双语教学材料的编写、培养师资力量以及加强与学生的沟通交流等一系列教学实践具有重要的意义。

人可溶性肿瘤坏死因子受体1基因真核表达载体的构建

目的构建人可溶性肿瘤坏死因子受体1基因(sTNFR1)的真核表达载体,为进一步研究打下基础。方法以Hela细胞的总RNA为模板,用RT-PCR方法扩增人sTNFR1全编码区基因片段,构建含有目的片段的T载体克隆及真核表达载体pCDNA3.1(-)重组质粒亚克隆,并用酶切分析和序列测定进行鉴定。结果经酶切鉴定和测序证实,人sTNFR1基因被正确克隆入真核表达载体pCDNA3.1(-)。结论真核表达质粒pCDNA3.1(-)-sTNFR1的构建为今后的研究打下了基础。

双重血浆分子吸附治疗肝衰竭的临床研究

目的评价双重血浆分子吸附(DPMAS)治疗肝衰竭的疗效及安全性。方法回顾性分析68例肝衰竭患者的病例资料,根据其治疗方式不同分为DPMAS组(内科治疗联合DPMAS,39例)和对照组(内科治疗组,29例);分析两组患者治疗前后的临床症状、体征以及血常规、肝肾功能、凝血功能等生化指标,比较分析两组患者的总体疗效、不同病情分期和不同并发症的有效率,记录相关的副作用。结果与对照组相比,DPMAS组患者的临床症状好转,总体有效率提高,差异有统计学意义(P<0.05)。DPMAS可有效改善早期肝衰竭的预后,但对中晚期肝衰竭,疗效不显著,与对照组相比,二者差异无统计学意义(P>0.05)。所有经DPMAS治疗的患者,未发生电解质紊乱、出血等不良事件,副作用以轻度血压下降为主要表现。结论 DPMAS可改善肝衰竭患者的临床症状,提高治疗的有效率,尤其对早期肝衰竭治疗效果较好,且无明显副作用,是一种安全有效的人工肝治疗方法。

慢性乙型肝炎患者体内不同来源标本中miR-146a和miR-155的表达

目的:通过检测慢性乙型肝炎(chronic hepatitis B,CHB)患者不同来源标本中miR-146a和miR-155的表达,了解不同来源标本中2种miRNAs表达的相关性,为研究miRNA在肝病中的作用机制提供标本选择的理论依据。方法:采用real-timePCR对41例CHB患者核苷(酸)类似物抗病毒治疗基线期和第104周血浆、外周血单个核细胞和肝组织中miR-146a和miR-155的表达进行检测,分析3种来源标本中这2种miRNAs表达的相关性。结果:治疗第104周时血浆、外周血单个核细胞和肝组织miR-146a和miR-155的表达水平均较基线期显著下调(P<0.05)。基线期血浆和肝组织(r=0.560,P=0.007)、外周血单个核细胞和肝组织(r=0.428,P=0.047)miR-146a的表达均相关。基线期血浆和肝组织(r=0.587,P=0.004)、外周血单个核细胞和肝组织(r=0.483,P=0.023)miR-155的表达相关,miR-146a和miR-155在血浆中的表达与外周血单个核细胞中的表达不相关(P>0.05)。结论:与外周血单个核细胞相比,血浆中miR-146a和miR-155的表达能更好地反映和预测肝组织miR-146a和miR-155的表达,血浆可作为研究miR-146a和miR-155在肝病中作用机制的标本来源。

MELD对慢性病毒性重型肝炎近期预后的预测价值

目的探讨MELD在慢性病毒性重型肝炎近期预后预测中的作用,并与CTP评分系统比较,为临床应用提供参考。方法以2005年1月～2008年12月于该院治疗的慢性重型病毒性肝炎76例患者为研究对象,入院24h内进行MELD和CTP模型评分。常规治疗出院后随访90d,Kaplan-Meier曲线描述生存,评价MELD对病情及预后作用。并以校准度和分辨度来比较MELD和CTP对预后的评价效力。结果随访90天时,失访1例。90d时生存率为78.7%和95%CI为67.6%～89.8%。晚期MELD评分均明显高于早期和中期(F=9.571,P=0.000),慢性重型肝炎分期也与MELD评分呈正相关(rs=0.742,t=6.781,P=0.000),而死亡者MELD评分均明显高于生存者(t=10.170,P=0.000)。两种评分预后的预测模型分别为:logitP=-4.61+0.15MELD和logitP=3.74+0.25CTP。MELD的预测模型与实际死亡拟合良好(χ2=2.145,P=0.854),而CTP的预测模型拟合相对较差(χ2=4.761,P=0.184)。两种评分都具有良好预测分辨度,曲线下面积分别为0.869(P=0.000)和0.855(P=0.000),95%CI分别为0.801～0.937和0.782～0.928。MELD评分取最佳截断值23分时,判断患者死亡的敏感性为81.8%,特异性为82.8%,预测准确性为82.7%;CTP评分取最佳截断值为10分,判断患者为死亡的敏感性为81.8%,特异性为78.1%,预测准确性为78.7%。结论MELD对慢性病毒性重型肝炎的病情及预后有很好的预测价值。和CTP相比,同样具有较好的预测分辨度,但MELD校准度更佳。

持续ALT正常的慢性乙型肝炎患者外泌体miRNAs表达谱

目的:通过分析持续丙氨酸氨基转移酶(alanine aminotransferase,ALT)正常的慢性乙型肝炎(以下简称慢乙肝)患者外泌体mi RNAs的表达情况,试图找出更好反映肝组织炎症的外泌体mi RNAs。方法:收集持续ALT正常并行肝活检的慢乙肝患者,选取肝组织炎症分级≥A2和<A2的患者各5例,提取血浆外泌体并鉴定;提取外泌体mi RNAs行高通量测序,比较两组患者的外泌体mi RNAs表达情况。结果:扫描电镜示外泌体呈囊泡状,直径30~100 nm;粒径检测示其体积峰度集中在10~100 nm之间。高通量测序共筛出591个表达有差异的外泌体mi RNAs,与对照组相比,肝组织炎症分级≥A2组有18个显著上调;6个显著下调。结论:对于肝组织炎症分级不同的持续ALT正常的慢乙肝患者,其外泌体mi RNAs的表达有差异,某些外泌体mi RNAs有望成为判断肝组织炎症的敏感生物学标志物。

MicroRNA-33b通过靶向调控SALL4的表达抑制肝细胞癌细胞增殖

目的:探索微小RNA-33b(micro RNA-33b,mi R-33b)在肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)中的表达及调控HCC细胞增殖的相关分子机制。方法:收集配对的HCC及癌旁组织32对,分别采用实时荧光定量PCR和Western印迹法检测人类婆罗双树样基因4(Sal-like 4,SALL4)RNA和蛋白表达,MTT实验检测HCC细胞增殖,萤光素酶报告基因检测验证mi R-33b与SALL4基因的靶点关系。结果:Mi R-33b在HCC组织中的表达显著低于癌旁组织(P<0.001)。过表达mi R-33b能显著降低HCC LH86细胞的增殖。SALL4是mi R-33b的靶基因,其蛋白表达被mi R-33b负调控。过表达SALL4能逆转mi R-33b对LH86细胞增殖的抑制作用。SALL4在HCC组织中的表达显著高于癌旁组织(P<0.001)。结论:Mi R-33b对HCC细胞增殖的抑制作用是通过负调控SALL4的表达而实现。

人sTNFR1基因的克隆、融合表达与生物学活性

采用RT-PCR,从Hela细胞的mRNA中扩增人sTNFR1基因,构建含有目的片段的T载体克隆及原核表达载体pMAL-c2x重组质粒亚克隆,转化入大肠杆菌,测序证实其序列与基因数据库中sTNFR1基因一致。经异丙基-β-D半乳糖苷酶(IPTG)诱导表达,淀粉树脂亲和层析法纯化,得到融合蛋白sTNFR1-MBP。结果显示:经Western-blotting检测,sTNFR1-MBP具有免疫活性;MTT检测目的蛋白可有效地封闭TNFα对QSG7701的细胞毒性作用;流式细胞术检测目的蛋白对TNF-α诱导QSG7701凋亡有抑制作用;sTNFR1-MBP具有良好的生物活性,为今后的研究打下了基础。

结核性脑膜炎脑脊液多项指标的动态研究

目的:探讨结核性脑膜炎患者脑脊液(Cerebrospinal flaid,CSF)常规、生化检测及脑脊液细胞学检查对结脑的诊断以及疗效评估的价值。方法:动态分析80例结脑患者治疗前、后CSF常规、生化、脑脊液细胞学变化特点及检测结果。结果:结脑患者治疗前CSF开放压力高(87.5%),治疗后压力升高率下降明显,差异具极显著性意义(P<0.01);多数结脑患者治疗前CSF常规镜下清晰透明(87.5%),经治疗后差异对比不明显(P>0.05);治疗前,多数结脑患者CSF细胞数总数升高(94.19%);治疗12周下降至25%(P<0.01);结脑患者治疗前CSF的生化异常率高达90%以上,治疗12周后氯化物和葡萄糖异常率下降(P<0.01),蛋白质与治疗前比较,差异均无显著性意义(P>0.05)。典型的结核性脑膜炎早期呈以粒细胞增多为主的混杂细胞反应,治疗中期粒细胞逐渐减少,免疫细胞、激活单核细胞增多,治疗晚期以激活淋巴细胞反应为主,粒细胞逐渐消失,治愈后细胞学恢复正常。结论:CSF常规及生化改变异常率高,对结脑患者早期诊断与疗效评估有重要价值;脑脊液细胞学的动态监测有助于结核性脑膜炎的早期快速诊断及判断预后。

ELISA法和MEIA法测定HBV血清标志物的比较研究

目的比较酶联免疫吸附法(ELISA)和微粒子酶免疫分析法(MEIA)对HBV血清标志物的检测性能。方法用ELISA法和MEIA法对HBV的血清标志物(HBsAg,HBeAg,Anti-HBc和Anti-HBe)分别进行检测。结果对1140例病人的血清进行乙肝标志物的检测,MEIA法阳性率高于ELISA法。与MEIA法相比较,ELISA法检测HBsAg的相对灵敏度达97.5%,Anti-HBc(94.9%)和HBeAg(73.4%)次之,Anti-HBe最低,为41.7%。对一些低滴度的HBeAg/Anti-HBe的HBV感染者,ELISA法可以引起假阴性。结论对于血清乙肝标志物的检测,MEIA法和ELISA法均有较高的特异性,但MEIA法敏感性优于ELISA法。