双侧卵巢切除大鼠下丘脑⁃垂体的转录组学特征及二仙汤的调节效应

目的利用RNA测序技术研究围绝经期综合征模型大鼠下丘脑-垂体的转录组学特征及二仙汤的作用。方法以大鼠双侧卵巢切除术模拟围绝经期综合征雌激素骤然下降状态。48只雌性SD大鼠,随机取假手术组12只,其余36只大鼠双侧卵巢切除术后再随机分为双侧卵巢切除组、17β-雌二醇组、二仙汤组,每组12只。大鼠双侧卵巢切除术后第7天,17β-雌二醇组灌胃17β-雌二醇(0.1 mg·kg^(-1)·d^(-1)),二仙汤组灌胃二仙汤提取液(8 g·kg^(-1)·d^(-1)),每日灌胃1次,持续6周;假手术组与双侧卵巢切除组均灌胃等量的灭菌水。采用酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测血清雌二醇(E2)、促性腺激素释放激素(GnRH)与β-内啡肽(β-EP)含量。采用mRNA转录组测序技术检测下丘脑与垂体,根据FPKM值与edgeR算法筛选组间差异表达基因,进行基因本体(GO)与京都基因与基因组百科全书(KEGG)富集分析,并以实时荧光定量逆转录聚合酶链式反应(RT-qPCR)法验证下丘脑雌激素受体α(Esr1)与线粒体编码的NADH脱氢酶亚基4(Mt-nd4)、垂体钙/钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱα(Camk2a)与甲状腺激素受体α(Thra)共4个差异表达基因。结果①与假手术组比较,双侧卵巢切除组大鼠血清E2与β-EP显著下降(P<0.05);与双侧卵巢切除组比较,二仙汤组E2与β-EP水平显著升高(P<0.05)。②大鼠下丘脑与垂体可检测基因数量均为30957个。③与假手术组比较,双侧卵巢切除大鼠下丘脑上调基因135个、下调基因348个,垂体上调基因409个、下调基因82个。与双侧卵巢切除组比较,17β-雌二醇治疗后大鼠下丘脑上调基因126个、下调基因225个,垂体上调基因93个、下调基因273个;二仙汤治疗后大鼠下丘脑上调基因91个、下调基因92个,垂体上调基因390个、下调基因376个。④GO分析表明,下丘脑与垂体差异表达基因富集于细胞过程、生物学调控、代谢过程等。⑤KEGG呈现了下丘脑与垂体的差异表达基因富集前30个信号通路,其中二仙汤调节尼古丁成瘾、氮代谢、突触囊泡循环等信号通路。⑥RT-qPCR所验证的二仙汤显著调节的Esr1、Mt-nd4、Camk2a基因表达变化与转录测序结果一致。结论双侧卵巢切除大鼠下丘脑与垂体的神经内分泌系统处于紊乱状态,17β-雌二醇侧重于调节下丘脑基因,二仙汤对垂体调节更广、更深。

顺铂对小鼠下丘脑-垂体-肾上腺/性腺轴功能的损伤作用及脱氢表雄酮的干预效应

目的研究顺铂(又名顺式-二氯二氨合铂,cis-dichlorodiamineplatinum,DDP)抑制小鼠类固醇激素合成的作用途径,并观察脱氢表雄酮(dehydroepiandrosterone,DHEA)的干预效应。方法将60只成年ICR小鼠随机分为3组:对照组、DDP建模组、DHEA治疗组,每组10只雄性和10只雌性小鼠。DDP建模组小鼠按2.5 mg·kg^(-1)·d^(-1)剂量腹腔注射DDP溶液,每3 d注射1次,共7次;造模同日,对照组小鼠腹腔注射等量的生理盐水;而DEHA治疗组小鼠在予以DDP处理的同时,按8.3 mg·kg^(-1)·d^(-1)剂量给予DHEA灌胃,连续给药21 d。通过旷场、抓力和转棒试验观察小鼠疲劳指标的变化,采用常规组织切片的HE染色法观察肾上腺、睾丸与卵巢组织形态的变化,运用高效液相色谱串联质谱方法检测小鼠血清类固醇激素的含量,运用实时荧光定量PCR和蛋白质印迹技术检测下丘脑、垂体、肾上腺、睾丸和卵巢组织中相关基因的mRNA和蛋白表达水平。结果与对照组比较,DDP建模组雄性与雌性小鼠的体重以及旷场运动能力均显著下降(P<0.05),同时雌性小鼠的抓力和转棒时间也均显著下降(P<0.05);而DHEA治疗组小鼠的上述疲劳指标均显著改善(P<0.05)。DDP建模组雄性小鼠睾丸组织中各级生精细胞排列紊乱且睾丸间质水肿,雌性小鼠卵巢组织中大量原始卵泡被激活,闭锁卵泡增多,卵泡颗粒细胞减少;而DHEA治疗组小鼠睾丸和卵巢受损伤表型均得到显著改善。与对照组比较,DDP建模组雄性与雌性小鼠血清睾酮、二氢睾酮含量均显著降低(P<0.01),雄性小鼠血清孕烯醇酮含量下降而皮质酮含量显著升高(P<0.05),雌性小鼠血清皮质酮含量显著降低(P<0.05);与DDP建模组比较,DHEA治疗组雄性小鼠的孕烯醇酮含量和雌性小鼠的孕酮含量均显著增高(P<0.05),而雌性小鼠的孕烯醇酮含量和雄性小鼠的孕酮含量均显著降低(P<0.05)。与对照组比较,DDP建模组雄性与雌性小鼠的肾上腺Cyp21a1、Cyp11a1基因和下丘脑Gnrh基因表达均显著下调(P<0.05);雌性小鼠肾上腺Hsd3b2基因,卵巢Star、Cyp11a1、Lhr基因,下丘脑Crh、垂体Pomc和Lhb基因表达均显著下调(P<0.05);雄性小鼠睾丸Star基因及StAR蛋白以及垂体Fshb和Lhb基因表达均显著下调(P<0.05)。与DDP建模组比较,补充DHEA后,雄性小鼠肾上腺Cyp17a1基因和睾丸Cyp17a1、Lhr、Fshr基因表达均显著下调(P<0.05);雌性小鼠肾上腺Cyp11a1基因表达显著下调(P<0.05),而肾上腺Hsd3b2基因和卵巢Star、Cyp11a1、Hsd3b2、Lhr基因,以及垂体Lhb基因表达均上调(P<0.05)。结论DDP间断给药可以抑制下丘脑-垂体-肾上腺皮质与性腺轴功能,并且雌性受抑制更显著;补充DHEA有助于调节体内类固醇激素水平的自身稳态。

泼尼松龙致不同品系小鼠药源性证候的比较

目的研究糖皮质激素药物作用于不同品系小鼠后肾上腺皮质功能抑制程度及其诱导药源性证候的差异性。方法选用ICR、BALB/c、C57BL/6J、KM和裸小鼠5种小鼠为实验对象,采用泼尼松龙进行干预。每种小鼠16只,其中正常对照组8只,泼尼松龙组8只。以0.5 mg/(kg·d)泼尼松龙连续灌胃14 d,每日观测小鼠体重,在给药第14天,运用小鼠辨证论治实验方法学检测小鼠中医四诊信息,次日处死小鼠,取脾、胸腺称重并计算脏器指数;运用ELISA检测血清皮质酮和ACTH含量;采用实时荧光定量PCR技术检测肾上腺Star、Cyp11a1、Cyp21a1、Cyp11b1、Cyp11b2基因表达;运用Western blot方法检测肾上腺LDLR、SRBI、StAR蛋白表达。结果与各自对照组比较:1)0.5 mg/(kg·d)泼尼松龙给药后第7天起ICR小鼠体重显著下降(P<0.01);给药后第13天起BALB/c小鼠体重显著下降(P<0.01);给药后第5天起C57BL/6J小鼠体重显著下降(P<0.01);给药后第13天裸鼠体重显著下降(P<0.05)。2)泼尼松龙导致ICR小鼠抓力显著下降以及躯干平均温度显著降低(P<0.05)。3)泼尼松龙导致ICR小鼠和裸鼠脾重量显著下降(P<0.01)以及裸鼠脾指数下降(P<0.05),泼尼松龙导致ICR、C57BL/6J和KM小鼠胸腺重量和胸腺指数均显著下降(P<0.01)。4)泼尼松龙显著导致BALB/c与KM小鼠血清皮质酮下降(P<0.05),也显著引起BALB/c小鼠血清促肾上腺皮质激素(ACTH)含量下降(P<0.01)。5)泼尼松龙显著下调ICR小鼠肾上腺Cyp21a1基因表达(P<0.05),下调C57BL/6J小鼠Star基因表达(P<0.01),下调KM小鼠Cyp11a1、Cyp21a1基因表达(P<0.01),下调裸鼠Star与Cyp21a1基因表达(P<0.05);且泼尼松龙抑制ICR小鼠肾上腺LDLR蛋白表达以及KM小鼠肾上腺StAR蛋白表达。结论泼尼松龙造成的小鼠药源性虚证主要表现为"气虚",涉及中医"肾藏象"与"脾藏象",其物质基础以肾上腺皮质类固醇激素合成酶分子表达被抑制以及垂体-肾上腺皮质轴功能被抑制为主;开展糖皮质激素药源性虚证研究建议首选ICR小鼠。

α-常春藤皂苷协同雷公藤红素对SMMC7721肝癌细胞增殖和周期的影响

目的 探索α-常春藤皂苷协同雷公藤红素对SMMC7721肝癌细胞增殖和周期的影响。方法 MTT法检测细胞存活率,CompuSyn软件获取相互作用指数(CI)并筛选出最佳协同组合。流式细胞仪检测细胞凋亡和周期分布,Western blot法检测细胞凋亡相关蛋白Bax和Bcl-2、周期蛋白依赖性激酶(CDKs)和细胞周期蛋白(Cyclins)的表达。结果 单用α-常春藤皂苷或雷公藤红素均能抑制细胞增殖,且呈剂量依赖性;作用48 h后,当α-常春藤皂苷质量浓度为10.0μg/mL,雷公藤红素质量浓度为0.30μg/mL时,CI值为0.24,协同效应最佳。在以上质量浓度条件下,协同组早期凋亡率高于其余3组(P<0.05)。α-常春藤皂苷组及协同组晚期凋亡率高于对照组(P<0.05);总凋亡率以协同组最高且高于对照组(P<0.05)。雷公藤红素及协同组G_(0)/G_(1)期比例较对照组升高(P<0.05);α-常春藤皂苷组S期比例较对照组升高(P<0.05);协同组G_(1)+S期总比例最高且高于对照组(P<0.05)。与对照组比较,各给药组Bax、Bcl-2及Bax/Bcl-2比值无明显变化(P>0.05);协同组CDK2和CDK4蛋白表达降低(P<0.05);雷公藤红素组和协同组Cyclin D1表达均升高(P<0.05);各给药组Cyclin E1表达均升高(P<0.05)。结论 α-常春藤皂苷协同雷公藤红素抑制SMMC7721细胞增殖效应确切,该效应可能与诱导G_(0)/G_(1)期周期阻滞、G_(1)+S期总比例增加有关,而Cyclin D1可能是参与其中的关键分子。

预知子联合雷公藤红素对肝癌荷瘤裸鼠的抑瘤作用及对NF-κB通路的影响

目的 观察预知子联合雷公藤红素对肝癌荷瘤裸鼠的抑瘤作用及对核因子(NF)-κB通路的影响,并探讨其作用靶点。方法 皮下接种肝癌SMMC7721细胞建立荷瘤裸鼠模型,将裸鼠随机分为模型对照组、预知子提取物组、雷公藤红素组和联合组,将药物包载于壳聚糖/甘油磷酸钠温敏性凝胶系统,分别于分组后第1、6、11日经皮瘤内注射相应药物,共3次。每2日测量裸鼠体质量和瘤径,第16日称量瘤体及肝、脾、左肾脏器质量,计算瘤指数、抑瘤率及脏器指数;ELISA测定血清肿瘤坏死因子(TNF)-α含量;HE染色观察瘤组织形态变化;Western blot检测瘤组织NF-κB通路相关蛋白表达。结果 与模型对照组比较,各给药组裸鼠体质量、去瘤体质量、瘤体积、瘤质量和瘤指数均呈下降趋势,其中以雷公藤红素组最为显著(P<0.05),联合组瘤体积和瘤质量显著下降(P<0.05),各给药组裸鼠肝和左肾质量及指数均显著下降(P<0.05),预知子提取物组、雷公藤红素组和联合组抑瘤率分别为6.68%、35.08%和22.00%;各给药组裸鼠血清TNF-α含量显著增加(P<0.05);HE染色显示,各给药组裸鼠瘤组织均出现间质增多现象,且联合组部分区域出现炎症细胞浸润、堆积;Western blot结果显示,雷公藤红素组裸鼠瘤组织IκB激酶α(IKKα)、周期蛋白依赖性激酶2(CDK2)、周期蛋白D1(Cyclin D1)、NF-κB p65蛋白表达显著降低(P<0.05),联合组裸鼠瘤组织NF-κB抑制蛋白α(IκBα)和p-IκBα蛋白表达显著降低(P<0.05)。结论 预知子联合雷公藤红素能抑制肝癌荷瘤裸鼠肿瘤生长,NF-κB通路p-IκBα分子可能是二者联合发挥抑瘤作用的重要靶点。

基于关联规则和复杂系统熵聚类研究历代原发性肝癌方剂遣药组方规律

目的:我国是肝癌大国,自秦汉起就有对其症状的描述和用药的记载。本研究基于历代医案,揭示自秦汉至现代治疗原发性肝癌内服方剂的遣药组方规律。方法:收集《中医方剂大辞典》自秦汉至现代治疗原发性肝癌相关的方剂727首,涉略医书235本,运用中医传承辅助系统(V2.5)中关联规则和复杂系统熵聚类分析历代肝癌用药遣药组方规律;通过大数据挖掘和比对,发现治疗原发性肝癌的新处方。结果:历代肝癌用药频次前30味中药以甘草、陈皮、茯苓、当归、木香为主,158个常用药对以陈皮–甘草、黄芩–甘草、陈皮–茯苓和甘草–柴胡为主,36个核心组合以三棱–莪术–青皮为主,以及以柴胡类方为主的8个演化新方。结论:历代肝癌用药体现了原发性肝癌多以脏腑气血亏虚为主,夹杂湿、热、痰、瘀等实证的病机特点,用方侧重于柴胡类方,旨在条达肝气、和解少阳、疏利三焦,为现代临床治疗肝癌用药思想及新药研发提供了一定的理论依据,以期指导临床遣药组方并推进中医肝癌的精准治疗。

九年制中医学专业屠呦呦班科创初阶训练课程的实践、评价与反思

“科创初阶训练”是上海中医药大学在九年制中医学专业屠呦呦班大一学生中开设的一门课程,旨在通过理论与实验相结合的方式激发大学生中医药科研兴趣,培养其基本的科研素养。文章详细介绍了该课程的实践过程,并以计分的方式(10分为满分)对其教学设计和效果进行了评价,同时分析了学生的课后感想。结果表明,学生在对课程的教学形式、内容、条件和考核方式,科研素养和能力的提升,以及教学的总体评价中给予了8.53~10.00的不同分数;学生的课后感想主要关注实验过程不同环节的注意事项、团队协作和教师指导、收获这三个方面。最后,就授课对象的特点、教学内容及其难度、理论与实践相结合的教学形式等进行了教学反思,并提出了优化和改进措施。

四君子汤调控肝癌癌旁组织NF-κB p65的O-GlcNAc糖基化修饰抑制肝细胞癌进展的机制

目的:探究四君子汤通过调控肝癌癌旁组织核因子-κB p65(NF-κB p65)的O-连接的β-N-乙酰葡糖胺(O-Glc NAc)糖基化修饰,干预肝癌发展的分子机制。方法:建立原位肝癌小鼠模型,将24只C57BL/6小鼠,随机分为4组,每组6只,分别为正常组、模型组、四君子汤低剂量组(10 g·kg^(-1))、四君子汤高剂量组(25 g·kg^(-1)),通过蛋白免疫印迹法(Western blot)检测肝癌癌旁组织中O-Glc NAc糖基化水平和p65的磷酸化修饰水平;免疫沉淀法(IP)检测p65的O-Glc NAc糖基化修饰水平;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测癌旁组织中白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、转化生长因子-β_(1)(TGF-β_(1))、血管内皮生长因子A(VEGFA)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)m RNA表达水平;观察各组小鼠肿瘤数量,称量肝脏质量;检测各组小鼠的旷场运动情况和抓力,分析小鼠的气盛衰度。结果:与正常组小鼠肝组织比较,模型组小鼠癌旁组织中O-Glc NAc糖基化水平显著下降(P<0.01);p65的O-Glc NAc糖基化修饰水平显著下降(P<0.01);p65的磷酸化水平显著升高(P<0.01);IL-6、TNF-α、TGF-β_(1)、VEGFA、MMP-2、MMP-9 m RNA水平显著升高(P<0.01);肝脏质量显著升高(P<0.01);小鼠抓力、旷场水平跨格数和垂直站立次数显著下降(P<0.01),气盛衰度显著下降(P<0.01)。与模型组小鼠比较,四君子汤低剂量组和四君子汤高剂量组小鼠癌旁组织中O-Glc NAc糖基化水平明显升高(P<0.05,P<0.01);p65的O-Glc NAc糖基化修饰水平明显上调(P<0.05,P<0.01);p65的磷酸化水平显著下降(P<0.01);四君子汤低剂量组IL-6、TGF-β_(1)、VEGFA m RNA水平明显降低(P<0.05,P<0.01);四君子汤高剂量组中IL-6、TNF-α、TGF-β_(1)、VEGFA、MMP-2、MMP-9 m RNA水平显著降低(P<0.01),直径>3 mm肿瘤数量显著减少(P<0.01),小鼠肝脏质量明显降低(P<0.05),小鼠抓力、旷场水平跨格数和垂直站立次数明显升高(P<0.05,P<0.01),气盛衰度显著升高(P<0.01)。结论:四君子汤可以抑制小鼠原位肝癌的进展,该作用可能是通过增加肝癌癌旁组织中O-Glc NAc糖基化水平,增加癌旁组织中p65的O-Glc NAc糖基化修饰,抑制p65的磷酸化修饰,最终抑制下游IL-6、TNF-α、TGF-β_(1)、VEGFA、MMP-2、MMP-9的表达而实现。

任务驱动教学法在大学生“科创中阶训练”课程中的应用

在上海新型冠状病毒肺炎严重时期,我校全部课程转为在线授课。据此,我们在中医学九年制屠呦呦班大二学生中尝试采用任务驱动教学法开展“科创中阶训练”课程的在线教学,即教师提出问题(任务)——学生完成任务——师生交流讨论——教师总结的教学形式,取得了较好的效果。调查问卷显示,86.67%的学生认可这种教学形式,66.67%的学生觉得教学内容和进度安排合理;几乎所有的学生认为该课程对激发科研兴趣、形成科研思维、提升科研相关能力、形成创新和开拓精神、促进团队协作等方面具有较大帮助。针对部分学生反映课程安排比较紧、自主探索学习时间偏长的问题,后期将进行相应的优化和改进。

启发式案例教学在中医学九年制屠呦呦班科创初阶训练课程中的实践

文章探索启发式案例教学对低年级大学生科研思维的启迪作用。针对上海中医药大学2021级中医学专业九年制屠呦呦班学生,观察科创初阶训练课程的案例教学与虚拟实验融合式培训的效果。结果表明,84%以上的学生对课程设计满意,90%以上的学生对案例教学满意。其中,沈自尹院士的肾虚证物质基础研究案例对学生中医药科研思维的启发作用很大,医学论文写作在低年级的介绍使学生受益,提示启发式案例教学有利于培养低年级学生的中医药科研思维。

红景天苷抗纤维化作用研究进展

红景天苷是从红景天根茎中分离出的苯乙醇类化合物,是中药红景天的主要活性成分,具有抗炎、抗氧化、抗肿瘤、改善循环、免疫调节等药理作用。近年来大量研究发现,红景天苷可有效抑制肺纤维化、肝纤维化、肾纤维化、眼小梁网纤维化等多种器官或组织纤维化病变。其抗纤维化机制主要针对组织炎症、间质细胞活化、细胞外基质合成等纤维化形成的重要环节。笔者对纤维化疾病中红景天苷的实验研究进行综述,以期阐明其抗纤维化的现代药理学机制,为纤维化疾病的治疗及药物研发提供参考。

实验中医学课程德育的实践探索

在"大思政"的格局下,为了更深入地挖掘本门课程的育人职能,从德育素材的收集、融合方式的设计、教师育人意识的提高等方面探索课程德育的教学方式,并从教师和学生两方面进行评价和分析。结果表明实验中医学课程德育对学生正确人生观的树立产生积极的影响,对提高中医专业学生思想道德水平和专业自信发挥了正向促进作用,提高了学生的学习效率。同时,实施课程德育使专业课教师的思政育人能力得到锻炼和提升。

在实验中医学考核方式中引入探究式学习的实践及其效果分析

为提升实验中医学学习成果的探究性和个性化,课程组对课程的考核模式进行了改革,在原来单一的闭卷考核中引入探究性学习的考核方式(占总分的25%)。由教师根据课程的教学内容和培养目标要求学生提出一个假说并设计实验进行验证,学生根据自己兴趣,开展探究性的学习,并形成学习报告用于成绩评定。分析发现,探究性学习的成绩与闭卷考核成绩具有显著的正相关性;在探究性学习中,学生重点关注的是失眠、抑郁等精神神经相关疾病,更倾向于开展中药复方作用于相关疾病动物的药效药理实验。通过探究性学习,学生的探究能力、知识点融会贯通等能力得到了提高,培养并开拓了研究的思维,同时也暴露出一些问题,有待后续进一步完善和优化。

个性化辅导在实验中医学探究性学习中的实践

通过在实验中医学课程考核方式中引入探究性学习实践,发现学生在理论向科研实践过渡的过程中,暴露出的一系列问题。由此,在学生探究性学习基础上,加入个性化辅导的教学环节,针对每名学生的探究性学习报告,评价其科研设计的优势及薄弱环节、分析问题原因、找到解决思路,帮助学生构建完整的科研思维框架。结果显示,个性化辅导有助于学生对本课程知识点的巩固,学生探究性学习报告的成绩及科研设计的各方面能力均有显著提升。据此形成的"理论学习—探究性学习(暴露问题)—个性化辅导(解决问题)"教学模式,更有助于学生科研思维的形成,从而实现本课程的教学目标。

线上混合式教学在中医学研究生分子生物学实验中的运用

随着互联网的蓬勃发展,线上教学得到了广泛应用。面对新冠疫情防控的新形势,中医学研究生分子生物学实验课采用了线上混合式教学,通过任务驱动式教学法(MIMPS),在理论与实验操作视频教学的基础上增加了在线师生答疑论坛、虚拟仿真实验和综合性实验设计的辅助教学模块,弥补了因疫情而无法进行线下实验的不足。问卷调查学生对该教学模式的评价。结果表明,与传统方式比较,88%的学生认为线上混合式教学效果更好。对于虚拟仿真实验,72%的学生认为对理解实验原理有很大帮助,仅36%的学生认为自己已能熟练掌握分子生物学实验操作,表明线上混合式教学对实验原理和步骤的效果较好,对实验操作则不够理想,学生仍需进行线下实验操作学习。此次线上混合式教学方式的探索与运用,为中医学研究生分子生物学实验课“线上线下混合式教学方式”的开展提供了宝贵经验。

大柴胡汤通过调控p38 MAPK/IL-6/STAT3信号通路抑制肝癌的作用机制

目的:探讨大柴胡汤抗小鼠肝癌的体内外活性及潜在作用机制。方法:取对数生长期Hepa1-6细胞,培养1、2、4、8 d后,用噻唑蓝(MTT)比色法、结晶紫染色法检测大柴胡汤(0、125、250、500、1000 mg·L^(-1))对小鼠肝癌细胞(Hepa1-6)增殖活性的影响。通过肝内注射1×10^(6)个Hepa1-6细胞建立小鼠肝癌原位模型,随机分为空白组,模型组,大柴胡汤低、中、高剂量组(0.21、0.625、1.875 g·kg^(-1)),灌胃给药,每日1次;5-氟尿嘧啶(5-FU)组,(25 mg·kg^(-1))腹腔注射,隔日注射,连续给药14 d后处死小鼠,取肝,用4%多聚甲醛(PFA)固定,苏木素-伊红(HE)染色检测大柴胡汤抑制肝癌的活性。运用中药系统药理学数据库和分析平台(TCMSP)、Cytoscape3.7.2软件、STRING平台、DAVID平台数据库对大柴胡汤和肝癌靶基因进行关键靶基因的筛选及蛋白质-蛋白质相互作用(PPI)网络构建、京都基因和基因组百科全书(KEGG)通路富集分析。采用实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测大柴胡汤对Hepa1-6细胞及小鼠肝脏中白细胞介素-6(IL-6)mRNA的影响。蛋白免疫印迹法(Western blot)检测丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)、信号转导与转录活化因子3(STAT3)相关通路蛋白的表达。结果:MTT比色法、结晶紫染色结果显示,与空白组比较,大柴胡汤组(500、1000 mg·L^(-1))第4、8天时能够显著性地抑制Hepa1-6细胞增殖(P<0.05),呈浓度和时间依赖性;体内实验结果显示,大柴胡汤给药14 d后,与模型组比较,大柴胡汤组(1.875 g·kg^(-1))的肿瘤细胞多呈高分化,异型不明显,坏死区少见。网络药理学结果显示大柴胡汤作用于肝癌的核心基因,以调控肝癌微环境为主如IL-6、白细胞介素^(-1)β(IL^(-1)β),肿瘤坏死因子-α(TNF-α)等;信号通路以肝癌生长、分化、免疫和炎症为主,如MAPK、STAT3等。在Hepa1-6细胞中,与空白组比较,大柴胡汤(1000 mg·L^(-1))第1、2、4、8天能抑制IL-6 mRNA表达(P<0.05)。与模型组比较,大柴胡汤组(0.625、1.875 g·kg^(-1))处理的小鼠肝脏中IL-6 mRNA表达下降(P<0.05)。体外实验显示,与空白组比较,大柴胡汤(1000 mg·L^(-1))第4、8天和大柴胡汤(500、1000 mg·L^(-1))能够抑制Hepa1-6细胞中细胞外信号调节激酶(ERK1/2)、c-Jun氨基末端激酶(JNK)、p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)和STAT3的磷酸化表达(P<0.05),呈时间和浓度依赖性;体内实验结果显示,与模型组比较,大柴胡汤组(0.625、1.875 g·kg^(-1))能显著性地抑制p38 MAPK和STAT3的磷酸化(P<0.05)。结论:大柴胡汤通过调控p38 MAPK/IL-6/STAT3信号轴,从而达到抑制肝癌的活性。

木通属植物提取物抗肿瘤作用的研究进展

木通属AkebiaDecne.目前发现5种,其植物在中医药治疗上应用广泛,药用品种主要是木通(五叶木通)Akebia quinate、三叶木通A.trifoliata和白木通A.trifoliate subsp.australis;主要药用部位为其藤茎和果实,具有利尿通淋和疏肝理气等功效。近年来木通属植物也常用于中医药的肿瘤防治,许多研究表明其提取物对胃癌、肝癌等肿瘤细胞的增殖产生抑制作用,而来自木通属植物不同部位提取物的抗癌作用也不尽相同,其抗肿瘤机制包括诱导凋亡、抑制侵袭与转移、阻滞细胞周期、抑制肿瘤细胞血管生成等。对木通属植物的藤茎、果实、种子提取物和其天然产物的抗肿瘤作用研究进行归纳综述,为木通属植物在中医药肿瘤防治方面的应用提供新思路。

中药成分联用抑制肝癌细胞增殖及机制研究进展

肝癌属难治性恶性肿瘤,癌细胞增殖迅速且拥有抵御药物干预的复杂分子应激网络,是其难以治愈的重要原因。发展包含中医药在内的综合治疗手段,开发新药(如中药提取物或有效成分),开展联合用药研究,具有一定的应用前景。通过综述中药成分联用抑制肝癌细胞增殖及机制研究,以期为肝癌的综合治疗及中医药相关研究提供参考。

以科研案例为引导的《实验中医学》教学改革实践与思考

实验中医学作为中医学新兴发展的一门学科,其教、学、研工作对培养中医药创新型人才起着重要作用。随着国家中医药事业快速发展及其新的定位要求,结合当前大学生认知特点,研究者对《实验中医学》教材进行了修订与再版,其中突出特色是采用科研案例引导相关知识点,并应用至上海中医药大学2013级"5+3"培养模式下的本科生授课中。课后问卷调查显示,学生认为以科研案例为引导的教学,既有助于培养自身采用当代实验方法研究和发展中医药的素质与能力,又可普及当代中医药研究的重大成果,还有利于增强自身对中医药现代化研究的责任感。研究者建议在普通高等中医药院校推广开设《实验中医学》课程。

科研案例中德育素材融合至"实验中医学"教学的实践与评价

目的评价科研案例隐含的德育素材融合至"实验中医学"教学的效果。方法挖掘以往"实验中医学"教学中科研案例隐含的德育素材,并将其巧妙融入课程专业知识的教学中。设计调查问卷,从"通过案例讲解引申出其中潜在的人文精神的形式可好,是否有助于提高对科学探索的兴趣,对今后的学习、生活和工作态度是否有所触动""科学家的感人事迹触动学生的10项具体内容及认可度"等方面对教学效果进行评价。结果肯定授课形式,且认为此形式有助于提高科学探索兴趣的学生均占到95.8%,认为所融入的人文精神对今后学习、生活和工作有所触动的学生占87.5%;对科学家感人事迹触动学生的10项内容持肯定态度的学生占77.1%~89.6%,其中肯定比例最低和最高的分别为"甘于寂寞、默默耕耘、无私奉献的精神"和"尊重他人及其科研成果,同时又具有挑战科研权威的勇气"。结论将科研案例隐含的德育素材融入"实验中医学"教学的形式和效果均较好,基本达到了教学目标,但仍有提升的空间。