HES5对肾小管上皮细胞转分化和凋亡的影响及其机制研究

目的探讨HES5(hairy and enhancer of split 5)对TGF-β1诱导的肾小管上皮细胞转分化和凋亡的作用及其潜在机制。方法分析和筛选GSE66494数据中的差异表达基因。建立小鼠的输尿管梗阻模型(unilateral uretera obstruction,UUO),检测肾组织中HES5的表达水平。TGF-β1(10 ng/mL)处理HK-2细胞24 h建立肾小管上皮-间质转化模型后,通过qRT-PCR和Western blot检测HES5的表达水平。用过表达HES5的质粒转染HK-2细胞,24 h后检测其纤连蛋白(Fibronectin,FN)、胶原蛋白Ⅰ(CollagenⅠ)和波形蛋白(Vimentin)及凋亡相关标志物(Bax、Bcl2)等蛋白表达;然后,将HK-2细胞分为4组:Control组、siHES5组、TGF-β1组、siHES5+TGF-β1组,检测各组的纤维化及凋亡标志物的表达情况。运用TUNEL及流式细胞术检测各组细胞的凋亡情况。Western blot检测各组AKT、p-AKT、PI3K、p-PI3K的蛋白表达。通过加入PI3K抑制剂(LY294002)处理过表达HES5的HK-2细胞后,检测Vimentin的表达。结果HES5的表达在慢性肾脏病(chronic kidney disease,CKD)和小鼠纤维化肾组织中均显著上调;过表达HES5可以促进HK-2细胞中FN、CollagenⅠ、Vimentin、Bax的合成,抑制Bcl2的表达(P<0.05);敲低HES5不仅下调纤维化标志物的表达,还抑制了肾小管上皮细胞凋亡;此外,HES5基因敲低使TGF-β1诱导的HK-2细胞内PI3K/AKT信号通路的激活程度降低(P<0.05);PI3K/AKT信号通路抑制剂减弱了HES5对Vimentin的诱导作用。结论敲低HES5可以抑制TGF-β1诱导的肾小管上皮细胞转分化和凋亡,这可能与PI3K/AKT信号通路活性降低有关。

Fgl2对小鼠急性肾损伤中巨噬细胞极化的作用

目的探讨纤维蛋白原样蛋白2(fibrinogen-like protein2,Fgl2)对顺铂诱导的急性肾损伤(cisplatin-induced acute kidney injury,Cis-AKI)中巨噬细胞极化的作用。方法选取24只8~10周龄(体质量20~25 g)的雄性野生型(Fgl2^(+/+))小鼠和Fgl2基因敲除(Fgl2^(-/-))小鼠各12只。单次腹腔注射生理盐水(saline)或顺铂(cisplatin,Cis)处理3 d,按随机数字表法分成4组(n=6):Fgl2^(+/+)Saline组、Fgl2^(+/+)Cis组、Fgl2^(-/-)Saline组和Fgl2^(-/-)Cis组。3 d后,检测肾功能相关指标血肌酐(serum creatinine,Scr)、尿素氮(blood urea nitrogen,BUN)的水平,HE染色评估肾损伤程度;Western blot检测肾组织中Fgl2和肾损伤分子1(kidney injury molecule 1,Kim-1)的表达;RT-qPCR检测Fgl2、Kim-1、中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(neutrophil gelatinase-associated lipocalin,NGAL)、IL-6、IL-12p40、IL-1β、诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)、TNF-α的表达;免疫组化检测肾脏Fgl2和巨噬细胞(F4/80^(+))的表达;免疫荧光检测肾组织中巨噬细胞(F4/80^(+))和M1型巨噬细胞(F4/80^(+)CD86^(+))的表达;流式细胞术检测肾组织中巨噬细胞(F4/80^(+))及M1型巨噬细胞(F4/80^(+)MHCⅡ+)、M2型巨噬细胞(F4/80^(+)CD206^(+))的表达。结果与Fgl2^(+/+)Saline组比较,Fgl2^(+/+)Cis组小鼠肾功能显著下降(P<0.05),肾小管损伤病理评分显著升高(P<0.05),肾组织Fgl2表达显著上调(P<0.05);与Fgl2^(+/+)Cis组相比,Fgl2^(-/-)Cis组小鼠肾功能显著下降(P<0.05),肾损伤相关分子Kim-1、NGAL表达显著升高(P<0.05),肾小管损伤病理评分显著升高(P<0.05),巨噬细胞浸润显著增加(P<0.05),M1型巨噬细胞相关分子IL-6、IL-1β、TNF-α和iNOS表达显著上升(P<0.05),流式细胞术结果显示M1型巨噬细胞百分比显著升高(P<0.05),M2型巨噬细胞百分比无明显变化,且M1型占比显著高于M2型(P<0.05)。结论Fgl2基因敲除可通过促进巨噬细胞向M1型转化加重Cis-AKI。

连续性血液净化治疗多器官功能衰竭对Th1/Th2影响的临床研究

目的研究连续性血液净化治疗(CBP)对多器官功能衰竭患者循环Th1/Th2的影响。方法36例多器官功能障碍综合征(mu ltip le organ dysfunction syndrom e,MODS)患者行CBP治疗。采用中心静脉留置单针双腔导管建立血管通路,采用Prism a连续性血液净化系统、以及配套的M60管路和滤器AN69(PAN膜,2.0 cm2)进行前稀释连续性静脉-静脉血液透析滤过(CVVHDF)。治疗前及治疗后24,48,72 h采血检测Th1/Th2。结果30例患者肾功能均恢复正常。在CBP治疗开始后24 h血Th1/Th2比值逐渐上升,48 h下降后有显著差异,72 h接近正常。24 h时与开始前比较,72 h与24 h比较有非常显著性差异(P<0.01)。结论CBP治疗可能可改善细胞免疫功能。

透析患者动静脉内瘘连续和间断缝合效果的临床评估

目的评估两种不同缝合术对动静脉内瘘成形术的手术成功率及瘘管年通畅率,总结治疗经验,以期进一步提高手术效果。方法回顾性分析我院5年来380例前臂桡动脉一头静脉内瘘成形术患者的临床资料,比较间断及连续动静脉吻合术对手术成功率及瘘管年通畅率的影响并作统计学分析。结果两种缝合术对一次手术成功率明显影响,间断缝合术瘘管1年通畅率好于连续缝合术。而性别、年龄、肾功能等因素对手术成功率及瘘管年通畅率均无影响,缝合方式、血管本身条件、血管吻合技术是导致手术失败及瘘管闭塞的重要影响因素。结论间断缝合术因为良好的吻合口径而优于连续缝合术,应作为动静脉内瘘血管吻合方式的首选。

晚期氧化蛋白产物诱导血管平滑肌细胞表达MCP-1及其信号转导通路的研究

目的研究p38有丝分裂素激活蛋白激酶(p38 mitogen-activated protein kinase,MAPK)在晚期氧化蛋白产物(advanced oxidation protein products,AOPP)诱导的鼠血管平滑肌细胞单核细胞趋化蛋白-1表达中的作用。方法使用200和400μmol/LAOPP分别以不同时间刺激培养的鼠血管平滑肌细胞,在阻断实验中加入特异性p38MAPK阻断剂SB203580阻断p38MAPK信号转导通路。采用免疫印迹法(Western blot)检测细胞中MCP-1和磷酸化p38MAPK的表达情况。结果用特异性p38MAPK阻断剂SB203580预处理后,400μmol/LAOPP刺激4h的鼠血管平滑肌细胞MCP-1表达(平均灰度值)从42.00±0.95降至9.35±1.35受到显著抑制(P<0.01)。结论①p38MAPK信号转导途径参与了AOPP诱导的鼠血管平滑肌细胞MCP-1的表达。②晚期氧化蛋白产物促进平滑肌细胞MCP-1 mRNA和蛋白表达可能是其致动脉粥样硬化机制之一。

连续性血液净化治疗顽固性心力衰竭28例

目的探讨连续性血液净化用于临床药物治疗无效的顽固性心力衰竭患者的作用。方法2000年2月～2007年1月，本院共有28例患者应用日间的连续性血液净化治疗。在28例患者中，男17例，女11例，年龄26～72〈42．5±8．5）岁。术前心功能NYHA分级：Ⅲ级4例，Ⅳ级24例。其中冠心病8例，风湿性心瓣膜病12例，扩张性心肌病6例，高血压性心脏病2例。结果17例使用连续性血液净化治疗者，1周后症状明显改善，3个月后左室射血分数明显提高，左室舒张末期内径（LVED）、左室收缩末期内径（LVESD）明显减少。此后间断行CBP治疗，随访17例存活1年以上，11例3～6个月死于泵衰竭。结论连续性血液净化是治疗顽固性心衰有效手段，应强调早期使用，促使心功能恢复或过渡到心脏移植。

血浆置换成功治疗血栓性血小板减少性紫癜12例报道

目的观察血浆置换治疗血栓性血小板减少性紫癜（TTP）的疗效。方法12例TTP患者，以新鲜冰冻血浆为置换液，进行血浆置换，每日1次，血浆置换次数中位数为7次（1～9次）。结果血浆置换治疗12例患者中10例存活。血浆置换治疗后12-72h，10例存活患者清醒；血浆置换4次后发热消退，皮下无新鲜出血点和淤斑，黄疸消失，红细胞压积和血小板数逐渐升高。结论血浆置换治疗TTP疗效好，值得推广。

连续性血液净化治疗对横纹肌溶解症抢救的临床研究

目的探讨连续性血液净化(CBP)治疗在横纹肌溶解症(rhabdomyolysis,RM)抢救中的作用。方法选择第三军医大学西南医院肾科,济南军区总医院血液净化科1998～2005年42例横纹肌溶解症患者回顾性地研究,其临床救治过程,分析其病情变化规律,探讨治疗时机及连续性血液净化治疗对预后的影响。结果①患者主要表现为肌红蛋白尿及以肌酸磷酸肌酶(CPK)明显的升高。临床症状不典型,易误诊;②经过连续性血液净化治疗及综合治疗,38例痊愈。死亡4例,死亡原因为多器官功能衰竭(MODS)。结论①患者均为青壮年,易忽视,易误诊为中暑;②早期诊断、及时应用连续性血液净化治疗是降低病死率的关键;CBP不但可清除血肌红蛋白,而且降低MODS的发生。

连续性血液净化治疗多器官功能衰竭与Th1/Th2失衡的临床研究

目的 研究连续性血液净化治疗 (CBP)对多器官功能衰竭患者Th1/Th2失衡的影响。方法2 8例多器官功能障碍综合征 (MODS)患者行CBP治疗。采用中心静脉留置单针双腔导管建立血管通路 ,采用Prisma连续性血液净化系统、以及配套的M6 0管路和血滤器AN6 9(PAN膜 ,2 .0cm2 )进行前稀释连续性静脉 -静脉血液透析滤过 (CVVHDF)。治疗前及治疗后 2 4h ,4 8h ,72h采血检测Th1/Th2。结果 2 2例患者肾功能均恢复正常。在CBP治疗开始后 2 4h血Th1/Th2比值逐渐上升 ,4 8h下降有显著差异 ,72h接近正常。 2 4h与开始前比较 ,72h与 2 4h比较有统计学差异 (P <0 .0 1)。结论 CBP治疗可能可平衡Th1/Th2。

医学生生命教育内容之探索

人类社会最严肃的终极命题是生死问题。作为直接对人类种族生老病死负责的医生，除了应精通专业知识以外，对生命和死亡的认识必然会影响到其个人心理的发展、医术的发挥以及患者的存活率和幸福感。就提高医学生人文素质方面的要求来看，在医生培养阶段，加强医学生的生命教育刻不容缓。同时，有数据证明，医学生中的确存在因为生死观不正确，导致医学生本人心理异常现象的出现。该研究也发现对医学生进行适当的生命教育能够有效消解医学生可能出现的各种心理危机［1］。因此，在医学生培养阶段有必要加强医学生的生命教育。

大剂量维生素C预冲透析器对血液透析患者晚期氧化蛋白产物的影响

目的研究大剂量维生素C预冲透析器对血液透析患者晚期氧化蛋白产物(Advancedoxi-dationproteinproducts,AOPP)的影响。方法选择在重庆西南医院住院及门诊接受血液透析患者及同期门诊体检人群160名。分为正常对照组、尿毒症组、常规血液透析组和治疗组,分别检测循环AOPP的水平,差异进行显著性检验。结果尿毒症患者(未行血液透析)的AOPP水平较正常对照组显著升高,而经过半年血液透析的患者其AOPP水平较未透析患者又明显升高,但透析前经过大剂量维生素C预处理透析器后其AOPP明显下降(P均<0.01),差异有统计学意义。结论大剂量维生素C预冲透析器对血液透析患者AOPP升高有抑制作用。

苯那普利对动脉粥样硬化形成及循环内皮细胞与假血管血友病因子的影响作用

观察苯那普利对高胆固醇饲喂的家兔动脉粥样硬化形成及其对循环内皮细胞 (CEC)、假血管血友病因子(vWF)的影响。 2 4只新西兰雄性大白兔随机分成 3组 ,对照组饲喂普通饲料 ,动脉粥样硬化组饲喂 1 %胆固醇饲料 ,苯那普利组饲喂 1 %胆固醇及苯那普利5mg/d。实验前、实验后 5周、实验后 1 0周分别抽血测血脂、vWF、CEC计数。第 1 0周末处死大白兔 ,计算主动脉斑块面积。结果显示 ,苯那普利治疗组与动脉粥样硬化组血脂水平无明显变化 ,但动脉粥样硬化斑块面积却明显减少(P <0 0 1 ) ,其血浆vWF浓度亦明显降低(P <0 0 1 )。提示苯那普利具有抗动脉粥样硬化作用 。

苯那普利对家兔动脉粥样硬化形成和斑块破裂的作用

目的 :观察苯那普利对高胆固醇饲喂的兔动脉粥样硬化形成及斑块破裂的影响。 方法 :34只新西兰雄性大白兔随机分成 4组 ,对照组 (8只 )饲喂普通饲料 ;高脂组 (8只 )饲喂 1%胆固醇饲料 ;苯那普利组 (8只 )饲喂 1%胆固醇饲料及苯那普利 5 m g/ d;斑块破裂组 (10只 ) ,颈动脉球囊扩张损害后喂 1%胆固醇饲料 10周 ,造影证实斑块形成后 ,球囊扩张诱发斑块破裂 ,再随机分苯那普利治疗组和非治疗组 ,继续 1%胆固醇喂养 4周。实验前及实验后 5、10、14周分别抽血测血脂、血管性假血友病因子 (v WF)、循环内皮细胞 (CEC)计数。实验末处死大白兔 ,计算主动脉斑块面积。结果 :苯那普利治疗组较动脉粥样硬化组血脂水平无明显变化 ,动脉粥样硬化斑块面积却明显减少 (P<0 .0 1) ,其血 v WF浓度亦明显降低 (P<0 .0 1)。斑块破裂组球囊扩张术前其血 v WF浓度进行性增高 (P<0 .0 1) ,CEC增高不明显 ,但术后非治疗组 CEC却显著增高 (P<0 .0 1) ,治疗组 CEC、v WF较非治疗组明显减少 (P<0 .0 1,P<0 .0 5 )。结论 :苯那普利具有抗动脉粥样硬化作用。其机制可能与保护内皮功能有关 ;CEC、v WF特别是 CEC对不稳定斑块破裂可能有预测作用 。

晚期氧化蛋白产物对血管平滑肌细胞单核细胞趋化蛋白-1表达的影响

目的研究晚期氧化蛋白产物对血管平滑肌细胞单核细胞趋化蛋白-1表达的影响。方法采用逆转录聚合酶链反应技术和酶联免疫吸附试验测定细胞中单核细胞趋化蛋白-1mRNA的表达量及蛋白的含量。观察晚期氧化蛋白产物对平滑肌细胞单核细胞趋化蛋白-1表达的影响。结果晚期氧化蛋白产物促进平滑肌细胞单核细胞趋化蛋白-1mRNA和蛋白表达的作用(P<0.01)。结论晚期氧化蛋白产物促进平滑肌细胞单核细胞趋化蛋白-1mRNA和蛋白表达可能是其致动脉粥样硬化机制之一。

血液透析患者自主神经损伤及β-受体阻滞剂应用的临床研究

目的 评价血液透析患者自主神经损伤及 β-受体阻滞剂应用等相关因素影响。 方法 选择长期透析的患者及同期门诊体检人群 80例。分为正常对照组、尿毒症组、常规血液透析组和 β -受体阻滞剂组 ,分别校测患者心率变异性 (HRV)时域指标并同步监测患者动态血压。进行显著性差异检验。结果 ①正常对照组与尿毒症组、常规血液透析组 ;倍他乐克组与尿毒症组、常规血液透析组间主要HRV指标存在差异显著性 (P <0 .0 5或P <0 .0 1) ;而尿毒症组与常规血液透析组间 ,HRV指标两两相比差异均无显著性 ;②尿毒症血压正常组与尿毒症肾性高血压组之间HRV各指标比较差异有显著性 (P < 0 .0 5 )。结论 ①尿毒症患者有明显心脏自主神经系统损害 ;②常规血液透析不能改善尿毒症患者心脏自主神经损害 ,而 β-受体阻滞剂治疗可明显改善尿毒症患者心脏自主神经损害 ,对延缓心血管并发症的发生有积极的预防作用 ;③尿毒症肾性高血压可加重尿毒症患者心脏自主神经系统损害 ,所以 ,除了 β -受体阻滞剂的应用外 ,严格控制好血压亦可延缓长期透析尿毒症患者其心血管并发症的发生。

焦虑抑郁对尿毒症患者病情的影响

目的探讨焦虑抑郁对尿毒症患者治疗及转归的影响。方法选择180例尿毒症透析患者,采用医院焦虑抑郁情绪(Hospitalanxietyanddepression,HAD)测定量表进行问卷调查,对其中166例有效问卷资料进行统计学分析。结果166例患者中,出现焦虑者85例,占51.20%;抑郁者45例,占27.11%。年龄、性别、职业、文化程度等对患者焦虑、抑郁状况影响较小;家庭关系、首次发病、性格、病情和有无公费医疗和心理治疗等对患者焦虑、抑郁状况影响显著。心理异常的尿毒症患者其心功能衰竭、高血钾、代谢性酸中毒等并发症的发生率均较心理正常者高。结论焦虑、抑郁等情绪变化可加重尿毒症患者的病情,影响其发展及转归。

连续性血液净化治疗对血管内皮功能的影响

目的研究连续性血液净化治疗(CBP)对血管内皮功能的影响。方法32例多器官功能障碍综合征(MODS)患者行CBP治疗,持续10h/d。采用动静脉内瘘或中心静脉留置单针双腔导管建立血管通路,采用BM25(Gambro)连续性血液净化系统、聚砜膜(AV400S,AV600S,费森尤斯)进行前稀释连续性静脉—静脉血液滤过(CVVHF)。治疗前及治疗后2、4、6、8、10h采血及超滤液检测vWF(假血管血友病因子)水平。结果26例患者肾功能均恢复正常,超滤液中vWF未能测出。血浆vWF水平在CBP治疗开始后2、4、6h逐渐下降,且与开始前比较有统计学差异(P<0.01)。2h时下降最明显,6～10h其浓度无明显变化。结论CBP治疗可改善血管内皮功能。

透析患者血管内皮功能改变的临床研究

目的 观察透析患者血管性假血友病因子(von Willebrand factor ,vWF)及血循环内皮细胞(circu-lating endothlial cells,CEC)数的动态变化过程,探讨透析对血管内皮细胞的影响。方法 肝素化后透析前、透析30分钟、透析60分钟、透析90分钟、停机前用酶联免疫法测定60例慢性肾功能衰竭透析患者血浆中vWF浓度,同时用Percoll密度梯度离心法对患者血中进行CEC计数及形态学观察。结果 透析30分钟、透析60分钟、透析90分钟、停机前其vWF和CEC计数进行性增高,与透析前相比增高显著(P<0.01)。结论 透析可导致血管内皮细胞激活或损伤。