非对称性二甲基精氨酸在不明原因复发性流产患者绒毛及外周血的表达及其意义

目的 探讨不明原因复发性流产(URSA)患者绒毛及外周血非对称性二甲基精氨酸(ADMA)表达及其临床价值。方法 选取URSA患者168例,采用计算机产生随机数法将就诊患者以3∶1的比例分为训练集126例(URSA组)和测试集42例,另选取同期于我院进行终止妊娠的126例孕妇作为对照,对比训练集及对照组临床资料及外周血和绒毛组织ADMA表达,通过拟合曲线和阈值效应分析患者血清URSA表达与URSA发生的关系,采用多因素Logistics回归模型分析发生URSA的独立危险因素,构建列线图模型。结果 与对照组比较,URSA组患者IL-6、IL-117、Th17、Th17/Treg及血浆、绒毛组织ADMA表达显著增加,孕酮、IL-10、TGF-β及Treg显著降低(P<0.05)。IL-6、IL-17、Th17、Th17/Treg及血浆ADMA、绒毛组织ADMA是发生URSA的独立危险因素,而IL-10、TGF-β及Treg是发生URSA的保护因素(P<0.05)。当血浆ADMA≥1.43μmol/L时,血浆ADMA每增加0.6μmol/L,孕妇发生VRSA的风险增加17%,差异具有统计学意义(OR=0.115,95%CI:0.102~0.133,P<0.05);当绒毛ADMA≥1.92μmol/L时,绒毛ADMA每增加0.6μmol/L,孕妇发生URSA的风险增加14%,差异具有统计学意义(OR=1.192,95%CI:1.085~1.302,P<0.05)。依据独立影响因素构建的列线图预测模型具有较高的区分度、准确性和临床适用性。结论 ADMA在URSA患者血浆及绒毛组织中的表达增加,是URSA发生的独立危险因素,对URSA的发生具有一定的预测价值。

shRNA转染对异位内膜细胞survivin基因的靶点抑制作用

目的构建靶向人survivin基因的短发夹状RNA(shRNA)慢病毒载体,观察其对异位内膜细胞survivin基因的抑制作用。方法设计干扰人survivin基因shRNA序列,合成、退火形成双链寡核酸后克隆到pGCL-GFP载体,PCR鉴定和测序分析及阳性克隆质粒抽提,在脂质体的介导下将慢病毒包装辅助质粒和survivin基因重组慢病毒载体导入293T细胞包装病毒,测定病毒滴度。感染人异位子宫内膜细胞,采用RT-PCR测定细胞中survivin mRNA的表达,并与未转染及空转染细胞进行比较。结果慢病毒载体PCR和测序结果与预期结果一致,经包装产生的病毒滴度为8×108U/ml。Survivin shRNA慢病毒载体感染人异位内膜细胞后,Survivin mRNA水平为0.15±0.03,明显低于阴性对照组0.42±0.06和空白对照组0.48±0.08(P<0.01);而阴性对照组与空白对照组相比无统计学差异。结论成功构建针对survivin基因的shRNA慢病毒载体,体外感染人异位内膜细胞后可有效抑制survivin基因的表达,为研究子宫内膜异位症分子病因和基因治疗提供了新的平台。

广东汉族妇女CYP1A1基因MspⅠ多态性与子宫内膜异位症的关系

目的探讨广东汉族妇女解毒酶细胞色素P450 1A1（CYP1A1）基因 MspⅠ多态性与子宫内膜异位症（内异症）的遗传易感性的关系。方法用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性技术,检测76例经腹腔镜或手术证实为内异症的患者（内异症组）和80例非内异症的妇科手术患者（对照组）CYP1A1基因3’端限制性内切酶MspⅠ位点的3种基因型（m1m1、m1m2、m2m2）的分布频率并加以分析,2组检测对象均为广东籍汉族妇女。结果CYP1A1基因 MspⅠ位点基因型m2m2在内异症组和对照组中各占19.7％和12.5％,基因型m1m1在2组中分别占30.3％和42.5％,基因型m1m2在2组中分别占50.0％和45.0％,各基因型在2组中所占比例无显著性差异（P>0.05）;m1、m2等位基因频率2组间比较亦无显著性差异（P>0.05）。结论解毒酶CYP1A1基因MspⅠ多态性的单独存在可能与广东籍汉族妇女内异症的易感性无关。

经脐单孔腹腔镜辅助阴式子宫切除术30例临床分析

目的:探讨经脐单孔腹腔镜(laparo-endoscopic single-site surgery,LESS)辅助阴式子宫切除术的可行性、安全性及临床价值。方法:将2011年5月至2012年4月经筛选符合纳入标准的60例患者随机分为两组,30例行LESS辅助阴式子宫切除术(单孔组),30例行常规腹腔镜辅助阴式子宫切除术(常规组)。比较两组手术时间、术中出血量、术中并发症、术后疼痛程度、术后排气时间、术后住院时间、切口愈合情况等多项指标。结果:两组手术均顺利完成,无中转开腹或由单孔改多孔手术病例。术中均无肠道及泌尿道损伤、大出血等并发症。术后疼痛程度单孔组明显低于常规组,差异有统计学意义(P<0.05)。术后排气时间及术后住院时间单孔组均明显短于传统组,差异有统计学意义(P<0.05)。而平均手术时间、术中出血量两组均无统计学差异(P>0.05)。两组患者切口均甲级愈合。结论:LESS辅助阴式子宫切除术不增加手术时间和术中出血量,术后疼痛轻,恢复快,住院时间短,更具有微创、美容的优势。现阶段筛选合适的病例开展LESS手术是安全可行的。

慢病毒介导shRNA沉默survivin基因对鸡胚绒毛尿囊膜子宫内膜异位症模型的影响

目的研究慢病毒介导生存素基因特异性短发夹状RNA(shRNA)对子宫内膜异位症异位内膜生长及新生血管形成的影响。方法建立鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)子宫内膜异位症模型,随机分成单纯接种组、shRNA慢病毒组、空载慢病毒组和空白载体组,每组30只。通过Image-proplus软件测量新生血管面积与鸡胚尿囊膜面积比(VA/CAM)评价沉默survivin基因对CAM血管生成的影响,TUNEL检测异位内膜细胞凋亡,组织病理学观察异位内膜病灶生长行为。结果 shRNA慢病毒处理组种植内膜存活率最低,该组VA/CAM明显低于单纯接种组、空载慢病毒组和空白载体组(P<0.001),后3组间比较无显著性差异(P>0.05)。shRNA慢病毒处理组种植内膜细胞凋亡率明显高于其他3组(P<0.05),另3组间比较无显著性差异(P>0.05)。shRNA慢病毒处理组病灶在光镜下可见腺体结构不完整,间质伴有不同程度的坏死。结论慢病毒介导survivin基因特异性shRNA能够显著抑制人子宫内膜异位症种植CAM模型的新生血管形成,抑制子宫内膜在CAM上的种植生长。

慢病毒介导短发夹状RNA沉默生存素基因对人异位内膜细胞增殖和凋亡的影响

目的:研究慢病毒介导生存素(survivin)基因特异性短发夹状RNA(shR-NA)对人异位内膜细胞中survivin基因表达及细胞增殖和凋亡的影响。方法:构建靶向survivin基因的shRNA慢病毒表达载体,将重组慢病毒感染原代培养的异位内膜细胞,以未转染及空载慢病毒感染异位内膜细胞为对照。采用RT-PCR、Western blot法分别检测各组异位内膜细胞中survivin mRNA和蛋白表达的变化,用四甲基偶氮唑蓝法检测细胞的增殖,Cy5-Annexin V/PI双染标记流式细胞仪测定细胞凋亡。结果:与未转染细胞及空载慢病毒转染细胞相比,shRNA慢病毒感染人异位内膜细胞后survivin mRNA及蛋白表达水平明显下降,survivin mRNA及蛋白表达抑制率分别为64%和59%。转染后1～5天实验组细胞生长速度较阴性对照组及空白对照组明显减慢,除第1天外,差异均有统计学意义(P<0.01);阴性对照组及空白对照组细胞生长速度的差异无统计学意义(P>0.05)。流式细胞仪分析显示,实验组细胞凋亡率为(41.61±3.64)%,明显高于阴性对照组的(9.14±1.88)%和空白对照组的(7.07±1.16)%(P<0.01),后两组的差异无统计学意义(P>0.05)。结论:慢病毒介导survivin基因特异性shRNA可有效沉默异位内膜细胞中survivin基因表达,明显抑制异位内膜细胞的增殖并促进细胞凋亡。

靶向shRNA抑制survivin基因对子宫内膜异位症裸鼠模型异位内膜caspase-3表达的影响

目的:利用慢病毒介导特异性短发夹状RNA(LV-shRNA)靶向沉默生存素基因,观察其对子宫内膜异位症裸鼠模型异位病灶中caspase-3表达的影响。方法:建立人子宫内膜裸鼠皮下种植模型,将LVshRNA、空载慢病毒及磷酸盐缓冲液分别注射至裸鼠皮下异位病灶,观察病灶生长情况。分别采用RT-PCR及免疫组化检测异位病灶中生存素、caspase-3 mRNA及蛋白的表达。结果:LV-shRNA处理组病灶体积、重量明显低于两对照组。与两对照组相比,LV-shRNA处理组生存素mRNA及蛋白的表达量明显降低,caspase-3的表达量明显升高,而生存素及caspase-3的表达在两对照组之间相比,差异均无统计学意义。结论:LVshRNA可明显抑制裸鼠异位子宫内膜病灶的生长,其机制可能与其通过下调生存素蛋白、激活下游的caspase-3诱导细胞凋亡有关。

CYP1A1和GSTM1基因变异对子宫内膜异位症易感性的联合效应

目的 探讨细胞色素P4 5 0 1A1(CYP1A1)和谷胱甘肽S -转移酶M1(GSTM1)基因变异对广东籍汉族妇女子宫内膜异位症 (内异症 )的遗传易感性的联合效应。方法 应用等位基因特异PCR和多重差别PCR技术检测 76例内异症患者 (内异症组 )和 80例非内异症妇女 (对照组 )的CYP1A1Ile/Val及GSTM1+/ 0的等位基因型。结果 CYP1A1纯合变异基因型和GSTM1纯合缺失基因型的个体患内异症的风险增加 ,前者的比值比 (OR)及95 %可信区间 (95 %CI)为 3 4 4 (1 16～ 10 0 5 ) ,后者的OR值及 95 %CI为 2 2 4 (1 17～ 4 2 7) ,两者联合基因型个体的OR值及 95 %CI为 9 90 (1 80～ 5 4 4 5 )。结论 CYP1A1和GSTM1基因多态性可能是内异症的遗传易感因素 ,在内异症发生中 。

慢病毒介导靶向survivin基因的shRNA对裸鼠子宫内膜异位病灶生长的影响

目的:研究慢病毒介导生存素(survivin)基因特异性短发夹状RNA(shRNA)对裸鼠子宫内膜异位病灶生长的影响。方法:建立人子宫内膜裸鼠皮下种植模型,将survivin-shRNA慢病毒(治疗组)、空载慢病毒(阴性对照组)及磷酸盐缓冲液(空白对照组)分别注射至裸鼠皮下异位病灶。观察3组异位病灶的形态、重量、体积及组织学情况;TUNEL法检测异位内膜细胞的凋亡情况。结果:成功建立人子宫内膜异位症裸鼠皮下种植模型。shRNA慢病毒治疗组的病灶体积、重量显著低于阴性对照组和空白对照组(P<0.001),后两组则无显著差异(P>0.05)。shRNA慢病毒治疗组的种植内膜细胞凋亡率显著高于其他两组(P<0.001),后两组则无显著差异(P>0.05)。shRNA慢病毒治疗组病灶在光镜下可见腺体萎缩,腺体结构不完整,间质伴有不同程度的坏死。结论:慢病毒介导survivin基因特异性shRNA能显著促进裸鼠皮下异位病灶组织的细胞凋亡,抑制裸鼠异位子宫内膜病灶的种植生长。

论剖宫产术的异化与对策

近年来剖宫产率不断上升 ,已成为一种社会问题。文章介绍了剖宫产率升高的现象及可能原因 ,指出了剖宫产率升高的本质在于技术异化 ,并着重探讨了剖宫产术异化的具体表现及消除剖宫产术异化的对策。

电视腹腔镜下手术治疗卵巢良性畸胎瘤126例临床分析

目的:探讨电视腹腔镜下卵巢良性畸胎瘤手术的技巧及临床应用价值。方法:对126例卵巢成熟型囊性畸胎瘤患者在腹腔镜下行囊肿剔除术或附件切除术,分析其手术适应证、术中、术后情况及并发症。结果:本组卵巢畸胎瘤均在腹腔镜下完成手术,单侧118例,双侧8例,囊肿直径3～9cm,104例行囊肿剥除术,22例行患侧附件切除术。平均手术时间50min,术中出血量平均45ml。术后体温第2天恢复正常115例,占91.3%。术后住院平均4.2d。术后无1例切口感染、出血、脏器损伤或化学性腹膜炎及肉芽肿等并发症发生。随访6～40个月,所有病例均无复发。结论:该手术是一种安全、有效的方法,具有损伤小、出血少、恢复快、并发症少等优点。

细胞色素P450 1A1在自然流产患者胎盘绒毛组织中的表达及意义

目的 探讨细胞色素P4 5 0 1A1(CYP1A1)mRNA在自然流产患者胎盘绒毛组织中的表达及其意义。方法 采用半定量逆转录聚合酶链反应 (RT -PCR)法检测 4 5例自然流产患者 (研究组 )中及 30例正常妊娠孕妇 (对照组 )胎盘绒毛组织中CYP1A1mRNA的表达。结果 自然流产及正常妊娠胎盘绒毛组织中CYP1A1mRNA相对表达强度分别为 0 .5 6± 0 .2 0、0 .35± 0 .14、两组比较差异显著 (P <0 .0 1)。自然流产患者中孕期有被动吸烟及孕期有饮茶或咖啡习惯者的胎盘绒毛组织中CYP1A1mRNA表达最强。结论 胎盘绒毛组织中CYP1A1mRNA表达增强可能与自然流产的发生相关 ,同时可在一定程度上说明孕妇吸烟、被动吸烟及摄入过多咖啡因可通过增强胎盘绒毛组织中CYP1A1的转录水平而增加自然流产的风险。

细胞色素P450 1A1在子宫腺肌病组织中的表达

目的探讨细胞色素P4501A1(CYP1A1)mRNA在子宫腺肌病组织中的表达及意义。方法采用半定量逆转录聚合酶链反应法检测42例子宫腺肌病(研究组)异位内膜及在位子宫内膜以及40例非子宫腺肌病患者(对照组)子宫内膜组织中CYP1A1 mRNA的表达。结果子宫腺肌病异位子宫内膜、在位子宫内膜及对照组子宫内膜CYP1A1 mRNA相对表达强度分别为0.62±0.15、0.42±0.12、0.40±0.14,子宫腺肌病异位子宫内膜CYP1A1 mRNA相对表达强度明显高于在位子宫内膜及对照组子宫内膜(均P<0.01)。子宫腺肌病在位子宫内膜与对照组子宫内膜之间CYP1A1 mRNA相对表达强度比较差异无显著性(P>0.05)。子宫内膜CYP1A1 mRNA相对表达强度增殖期与分泌期比较两组差异均无显著性(P>0.05)。结论异位子宫内膜组织中CYP1A1 mRNA表达明显增加可能与子宫腺肌病的发生和发展相关。

116例不孕症患者宫颈沙眼衣原体和解脲支原体检测分析

１引言沙眼衣原体和解脲支原体是引起非淋菌性尿道炎的主要病原体，近年来的研究表明，生殖道上述两种病原体感染是盆腔炎和不孕症的常见病因［１］。为了解不孕症患者宫颈沙眼衣原体和解脲支原体感染情况，我们应用ＰＣＲ技术，对不孕症患者宫颈分泌物进行两种病原体ＤＮ...

慢病毒介导靶向survivin基因的shRNA抑制子宫内膜在裸鼠腹腔种植生长

目的研究慢病毒介导生存素(survivin)基因特异性短发夹状RNA(sh RNA)对人子宫内膜在裸鼠腹腔种植生长的影响。方法将45只裸鼠随机分为实验组、阴性对照组及空白对照组,每组15只,将子宫内膜异位症患者在位内膜注射入裸鼠腹腔,同时将survivin-sh RNA慢病毒、空载慢病毒及磷酸盐缓冲液分别注射至3组裸鼠腹腔内,2周后观察各组子宫内膜种植成功率,光镜下观察异位病灶的形态学特点,免疫组化方法检测各组病灶中survivin的表达水平。结果实验组子宫内膜种植成功率(26.67%)明显低于阴性对照组(73.33%)及空白对照组(80%,P<0.01);实验组成活的异位内膜腺体发育不良,间质伴有不同程度的坏死;该组病灶中survivin蛋白表达亦明显下降,与两对照组比较差异有显著性(P<0.001)。结论慢病毒介导survivin基因特异性sh RNA能够通过靶向沉默survivin基因明显抑制人子宫内膜在裸鼠腹腔中的种植生长。

子宫内膜异位症异位内膜细胞原代培养方法的改良

目的:建立一种简易的人异位子宫内膜细胞体外原代培养方法。方法:通过胰蛋白酶消化、贴壁纯化等技术,分离及培养10例子宫内膜异位症患者的异位子宫内膜细胞。在光学显微镜下观察细胞形态,以免疫细胞化学法鉴定细胞类型。结果:8份标本获得成功,培养的异位内膜细胞均有腺上皮细胞和间质细胞两种形态细胞。膜上皮细胞和基质细胞分别经角蛋白单抗和波形蛋白单抗免疫组化染色为阳性,腺上皮细胞平均生长时间为5周,间质细胞平均生长时间为14周。结论:成功建立了子宫内膜异位症异位内膜细胞体外原代培养方法,该改良培养法经济、简单、高效。