新鲜芦荟抗局部化学接触性皮肤炎症的作用

目的比较新鲜芦荟、糖皮质激素和万花油对抗局部化学接触性炎症的作用,探讨芦荟对局部化学接触性炎症的疗效。方法二甲苯浸润家兔皮肤,建立局部化学接触性皮炎模型。在炎症部位分别给予新鲜芦荟切片或涂抹丁酸氢化可的松乳膏、万花油,观察它们的抗炎作用。结果丁酸氢化可的松乳膏、万花油和新鲜芦荟均有抗局部化学接触性皮肤炎症作用,显效率从高到低分别为氢化可的松乳膏=新鲜芦荟>万花油。与氢化可的松、万花油相比,新鲜芦荟作用的潜伏期较长,但从抗炎作用开始出现到完全显效所需的时间则较短,与氢化可的松相比,无显著性差异。结论新鲜芦荟可以经皮肤缓慢吸收,具有类似于氢化可的松的抗局部化学刺激性炎症作用。

脂多糖诱导急性肺损伤小鼠中E-cadherin和Brg1的表达及意义

目的探讨上皮钙黏蛋白E-Cadherin及染色质重塑复合物Brg1在脂多糖（LPS）诱导的急性肺损伤（acute lung injury,ALI）小鼠模型中的表达与意义。方法将6~8周龄雌性Balb/c小鼠分为对照和LPS组,分别经气管插管给予等体积的生理盐水或LPS（5 mg/kg）,每组8只,3 d后肺功能测定AHR,收取肺组织、HE染色观察肺部病理损伤,计数肺泡灌洗液（BALF）中细胞总数及分类,Western blot及免疫组化检测E-Cadherin及Brg1蛋白表达,ELISA检测TNF-α、单核趋化因子MCP-1的质量浓度。结果 LPS组肺组织炎症及评分较对照组明显增高。LPS组BALF中细胞总数较对照组增加,且以中性粒细胞为主。LPS组肺组织中E-Cadherin表达较对照组降低,而Brg1表达较对照组明显增高。LPS组BALF中TNF-α、MCP-1的质量浓度都较对照组增高。结论 LPS诱导的ALI模型中上皮钙黏蛋白E-Cadherin蛋白表达降低及染色质重塑复合物Brg1增高,对于研究急性肺损伤疾病的分子机制具有重要的临床指导意义,为疾病早期靶向分子筛查提供了科学依据。

血管内皮钙黏蛋白在非小细胞肺癌中的表达及其意义

目的:探讨血管内皮钙黏蛋白(vascular endothelial cadherin,VE-cadherin)在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)中的表达及其与临床病理特征之间的关系,并分析其与血管内皮生长因子(vascular endothelial grow factor,VEGF)之间的相关性。方法:应用免疫组化SP法检测72例NSCLC组织及相应癌旁正常组织VE-cadherin的表达情况;其中34例用qRTPCR法检测mRNA的表达情况,并以VEGF为阳性参照。Western blot检测肺癌细胞株A549和人正常支气管上皮细胞(normal human bronchial epithelial cells,NHBEC)中VE-cadherin的表达,以及干扰后各细胞株的表达情况。结果:72例NSCLC组织癌细胞和VE-cadherin的阳性表达率分别为69.4%、52.8%,均明显高于对应癌旁正常组织肺泡上皮细胞0%和血管内皮细胞20.8%(P<0.05);有淋巴结转移组中的表达量均明显高于无淋巴结转移组(P<0.05);Ⅲ、Ⅳ期的阳性表达率均明显高于Ⅰ、Ⅱ期(P<0.05)。VEGF在NSCLC组织癌细胞和血管内皮细胞中的阳性表达率分别为84.7%、62.5%,均显著高于对应的癌旁正常组织肺泡上皮细胞16.7%和血管内皮细胞29.2%(P<0.05)。经qRT-PCR分析,VE-cadherin mRNA在癌组织和癌旁正常组织中的相对表达量分别为1.15±0.87、0.70±0.57;VEGF mRNA的相对表达量分别为1.39±1.17、0.79±0.65(P<0.05)。两者在蛋白水平和mRNA水平均呈正相关(P=0.001,P=0.008)。Western blot结果示在A549细胞株中可检测到VE-cadherin表达,但在NHBEC中不表达。siRNA可降低VE-cadherin在A549细胞株中的表达。结论:VE-cadherin可能在NSCLC血管生成中起重要作用,且可能与VEGF具有协同作用,siRNA可有效抑制VE-cadherin在肺癌细胞株A549中的表达。

血管内皮钙黏蛋白在非小细胞肺癌血管生成中的作用

目的:探讨血管内皮钙黏蛋白(VE-cadherin)在非小细胞肺癌(NSCLC)血管生成中的作用,为NSCLC的抗血管生成治疗提供实验依据。方法:将人肺癌A549细胞分为空白对照组、干扰组和阴性对照组,VE-cadherin-siRNA瞬时转染A549细胞,实时定量PCR和Western blotting法检测VE-cadherin在各组细胞中表达水平;新型四唑氮盐(MTS)比色法检测A549细胞吸光度(A490)值的变化;流式细胞术检测细胞周期和凋亡率;ELISA法分析A549细胞瞬时转染上清中VE-cadherin的表达水平;并分析上清液作用后人脐静脉内皮细胞(HUVECs)A490值、各周期(G0/G1、G2/M和S)细胞比率、凋亡率和Matrigel小管形成数的改变。结果:干扰组VE-cadherin mRNA的表达水平(0.299±0.039)明显低于空白对照组(1.137±0.082)和阴性对照组(1.001±0.076)(P<0.05);干扰组VE-cadherin蛋白的表达水平(0.297±0.045)明显低于空白对照组(0.833±0.119)和阴性对照组(0.794±0.095)(P<0.05);各组A549细胞A490值、各周期细胞比率和凋亡率比较差异无统计学意义;干扰组上清液中VE-cadherin的表达水平[(2.89±0.07)μg.L-1]明显低于空白对照组[(11.43±0.09)μg.L-1]和阴性对照组[(11.15±0.04)μg.L-1](P<0.05)。干扰组与阴性对照组上清液作用后G0/G1、G2/M和S期HUVECs所占百分比比较差异无统计学意义(P>0.05);干扰组上清液明显抑制了HUVECs的增殖,作用24、48和72h细胞增殖抑制率分别为29.2%、33.8%和30.1%;作用48h干扰组HUVECs的凋亡率为27.12%±5.22%,显著高于阴性对照组(13.43%±3.50%)(P<0.05)。干扰组HUVECs小管形成数为1.53±0.31,显著低于阴性对照组(14.53±1.51)(P<0.05)。结论:VE-cadherin可能通过促进血管生成参与NSCLC的发生发展,有望成为NSCLC抗血管生成治疗的新靶点。

VE-cadherin在不同侵袭性能非小细胞肺癌细胞株的表达及沉默VE-cadherin对非小细胞肺癌细胞株侵袭、迁移的影响

目的:探讨VE-cadherin在不同侵袭性能非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)细胞株的表达及沉默VEcadherin对NSCLC细胞株侵袭、迁移的影响。方法:通过定量PCR及Western blot检测VE-cadherin在高侵袭性能的NSCLC细胞株PG、中度侵袭性能的NSCLC细胞株H1299及低侵袭性能的NSCLC细胞株PA中mRNA及蛋白的表达;并通过RNA干扰沉默VE-cadherin的表达来探讨其对NSCLC细胞株PG侵袭、迁移能力的影响。结果:VE-cadherin在3种NSCLC细胞株中都有表达,且其mRNA及蛋白在3种细胞株中的表达强度依次为PG、H1299、PA,PG与H1299相比较,差异有统计学意义(P=0.000),PA与PG、H1299相比较,差异均具有统计学意义(P=0.000);Transwell小室基质侵袭实验结果显示,干扰组与对照组的侵袭细胞数分别为(34.33±3.06)个和(86.00±7.93)个,组间比较差异有统计学意义(P=0.000);划痕损伤实验结果显示,对照组与干扰转染组的细胞迁移距离相比,24 h内没有明显差异(P=0.825),而48、72 h内对照组明显高于干扰转染组,差异具有统计学意义(P=0.000)。结论:VE-cadherin可能参与NSCLC的侵袭和迁移,并在此过程中起重要作用;VE-cadherin可能会成为治疗NSCLC侵袭、血管生成和转移的又一新靶点。

稳定敲低人脐带间充质干细胞EPCR基因对其向成纤维细胞分化能力的影响

目的:构建稳定敲低人内皮细胞蛋白C受体(endothelial cell protein C receptor,EPCR)的人脐带间充质干细胞(human umbilical cord mesenchymal stem cells,hUC-MSCs),检测敲低EPCR对hUC-MSCs向成纤维细胞分化能力的影响。方法:根据EPCR基因m RNA序列,合成3条小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)导入hUC-MSCs,通过检测EPCR蛋白表达筛选干扰效果最佳的siRNA。根据最佳siRNA序列构建慢病毒载体,包装重组慢病毒,感染hUC-MSCs,Real-time PCR和Western blot验证敲低效率。体外构建转化生长因子-β1(transforming growth factor beta1,TGF-β1)诱导hUC-MSCs向成纤维细胞分化模型,Real-time PCR和Western blot检测诱导前后α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)和Ⅰ型胶原(typeⅠcollagen,ColⅠ)表达水平,以反映诱导效果。结果:以EPCR最佳siRNA序列构建EPCR基因RNAi慢病毒载体,成功敲低hUC-MSCs内EPCR的mRNA(t=28.86,P=0.000)和蛋白(t=88.60,P=0.000)表达水平。EPCR敲低后,hUC-MSCs合成的COL1A1和COL1A2在m RNA(P=0.044,P=0.000)和蛋白(P=0.000,P=0.000)水平减少。体外TGF-β1诱导可增加hUC-MSCs内α-SMA(F=369.713,P=0.000;F=451.060,P=0.000)、COL1A1(F=42.051,P=0.000;F=759.041,P=0.000)及COL1A2(F=359.205,P=0.000;F=764.348,P=0.000)在mRNA和蛋白水平的表达,促进其向成纤维细胞分化。但敲低EPCR,α-SMA(P=0.002,P=0.002)、COL1A1(P=0.002,P=0.000)及COL1A2(P=0.000,P=0.000)在mRNA和蛋白的升高水平明显降低。结论:成功获得EPCR稳定敲低的hUC-MSCs,证实敲低EPCR可减少hUC-MSCs内ColⅠ表达,并减弱其向成纤维细胞分化的能力。

儿童慢性肉芽肿合并反复肺部感染1例报告

目的报道1例由CYBB基因突变所致常染色体隐性遗传慢性肉芽肿病患儿的临床表现及基因突变特点。方法回顾性分析空军军医大学第一附属医院儿科1例反复发热患儿入院的病史资料及基因检测情况。结果患儿入院后予以抗感染治疗效果不佳,且肺部CT存在多发炎症伴实变,腋窝可见肿大淋巴结;实验室检查免疫系列升高,考虑可能为免疫缺陷病,行基因检测证实由CYBB基因6号外显子上存在错义突变,进一步行家系基因分析证实该患儿为X-连锁慢性肉芽肿病;检索相关文献及基因组数据库,该患儿CYBB基因突变位点未被收录,行生物信息学预测分析可能为CYBB新的致病突变。结论对于无明显诱因出现反复肺部感染,可考虑免疫缺陷病,且CYBB基因分析有助于X-连锁慢性肉芽肿病患儿明确诊断,在检测携带者及产前诊断中起着重要作用,对于早期诊断有很好的指导作用,丰富了CYBB基因疾病谱。

重庆市呼吸专业医生吸烟状况及控烟知信行调查

目的了解重庆市呼吸专业医生的吸烟状况、烟草危害认知情况、控烟知识及技能的掌握情况、辅助戒烟服务态度及帮助吸烟者戒烟情况，为更有效地发挥其在控烟工作中作用提出建议。方法2012年3月采用自行设计的问卷，对分层随机抽样选出的重庆市8家医院全体呼吸专业医生进行调查，采用Epidata3．1软件建立数据库，SPSS13．0软件包分析数据。结果共发放并回收问卷450份，其中有效问卷428份，有效回收率95．1％。呼吸专业医生总吸烟率为12．4％（95％CI：9．3％～15．5％），其中直属教学医院、主城九区医院、区县医院吸烟率分别为7．4％（7／94）、8．1％（13／160）和19．0％（33／174），差异有统计学意义（）（。=11．734，P=0．003）；男性吸烟率远高于女性。呼吸专业医生对烟草依赖是一种神经精神性疾病的知晓率为80．1％，34．8％的受访者对戒烟药物完全不了解。所有受访者均知道二手烟危害，但仍有16．4％对院内吸烟行为从不上前劝阻；会主动劝阻吸烟行为的医生中53．9％是因服从医院规定，仅27．4％是因不愿吸人二手烟。医师对患者吸烟史的询问及记录情况相对较好，但仅有27．1％的受访者曾向患者推荐具体的戒烟方法，而成功帮助患者戒烟的例数较少；主城九区医院和区县医院呼吸专业医生帮助患者戒烟的情况反较直属教学医院好。结论重庆市呼吸专业医生（特别是男性医生）的吸烟率较高，主动劝阻公共场所吸烟行为的积极性不足；对控烟相关知识及技能的掌握较差，需加强控烟培训；基层呼吸专业医生有其特定的控烟优势．府得到雷视与发挥.

儿童社区获得性肺炎严重程度与血清细胞因子相关性研究

目的探讨社区获得性肺炎(community acquired pneumonia,CAP)患儿血清细胞因子与肺炎严重程度及其他基础辅助检测指标的相关性。方法回顾性分析重庆医科大学附属儿童医院2020年10月至2021年1月105例住院CAP患儿临床资料,并对整体样本及不同亚组内重症和非重症CAP组间血清细胞因子水平进行比较。结果重症组CAP组血清白细胞介素(IL)-6水平高于非重症组,但差异无统计学意义(14.98ng/L vs.4.2ng/L,P=0.581),而IL-2、IL-4、IL-10、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、干扰素-γ(IFN-γ)及IL-17A水平在2组患儿间差异无统计学意义。不同病程亚组内,病程<14d组,重症CAP患儿血清IL-6水平明显高于非重症患儿,但差异无统计学意义(34.97ng/L vs.4.04ng/L,P=0.169);而病程≥14d组,重症与非重症CAP患儿血清IL-6水平无明显差异。相关性分析结果显示,仅在重症CAP亚组和病程<14d亚组,IL-6水平与C反应蛋白(CRP)呈显著正相关(r=0.521,P=0.008和r=0.467,P=0.000)。结论血清IL-6水平可作为较短病程CAP患儿病情严重程度的临床辅助指标,而对病程迁延或慢性病程者其临床参考价值待商榷。

人脐带间充质干细胞联合吡非尼酮治疗小鼠肺纤维化

该文旨在研究人脐带间充质干细胞(umbilical cord-derived mesenchymal stem cells,hUC-MSCs)联合吡非尼酮(pirfenidone, PFD)对博来霉素诱导的小鼠肺纤维化的治疗作用及可能机制。C57BL/6小鼠分为正常对照组、MSCs对照组、模型组、30 mg/kg PFD组(P30)、100 mg/kg PFD组、300 mg/kg PFD组、MSCs治疗组及MSCs联合P30组。气管滴注博来霉素后第7天尾静脉注射5×105 hUC-MSCs,第7天起每日予PFD灌胃。造模后第21天收集肺组织, HE、Masson染色分别评估肺部形态变化及胶原沉积情况; Sircol法测胶原含量; PCR和Western blot检测纤维化标志物水平。超滤收集hUC-MSCs条件培养基(conditioned medium, CM),联合PFD体外培养肌成纤维细胞(myofibroblast, MFB), CCK-8与Brdu实验检测MFB生长及增殖。结果显示,与模型组相比, MSCs联合P30组显著改善小鼠生存率及肺部病理,显著降低胶原及纤维化标志物水平(P<0.001),且疗效优于单用PFD和hUC-MSCs组(P<0.05)。PFD部分抑制MFB增殖,联合CM增强了PFD对MFB增殖的抑制(P<0.001)。研究表明, hUC-MSCs联合低剂量PFD可能通过抑制MYB的增殖减轻博来霉素诱导的小鼠肺纤维化。

Ⅱ型肺泡上皮细胞Brg1基因条件敲低小鼠的基因型鉴定

该文旨在鉴定特异敲低Ⅱ型肺泡上皮细胞中Brg1(Brahma-related gene 1)基因小鼠的基因型,为进一步研究Brg1在肺相关疾病中的作用奠定基础。将两对转基因小鼠Brg1fl/fl和SP-C-rt TA/(tet O)7-Cre进行繁殖交配,将得到纯合子、杂合子及野生型3种基因型。出生后1周龄剪尾提取基因组DNA,PCR法判定基因型。用多西环素诱导法诱导(tet O)7-Cre重组酶活性,靶向剪切Ⅱ型肺泡上皮细胞上Brg1基因,磁珠分选法提取小鼠原代Ⅱ型肺泡上皮细胞,通过观察细胞生长特征、检测pro SP-C表达鉴定原代Ⅱ型肺泡上皮细胞,RT-PCR法、Western blot检测Brg1表达水平。结果显示,成功繁殖了Brg1纯合子小鼠,通过磁珠分选法成功分离了原代Ⅱ型肺泡上皮细胞,用多西环素诱导法成功敲低了Ⅱ型肺泡上皮细胞Brg1基因。该结果为相关研究提供动物模型奠定了基础。

体外诱导人脐带间充质干细胞向Ⅱ型肺泡上皮细胞分化

该研究旨在通过条件培养基诱导人脐带间充质干细胞(human umbilical cord mesenchymal stem cells,h UC-MSCs)向II型肺泡上皮细胞(type II alveolar epithelial cells,AEC2s)分化,为后续研究h UC-MSCs来源的AEC2s在肺部疾病中的治疗作用奠定基础。h UC-MSCs分为实验组和对照组,实验组用小气道上皮细胞生长基础培养基培养2天后添加生长因子诱导培养,对照组用20%血清的DMEM/F12培养。第14天观察细胞形态;Western blot、免疫荧光、流式细胞术和ELISA法检测肺泡表面活性蛋白C(surfactant protein C,SP-C)及前肺泡表面活性蛋白C(pro-surfactant protein C,pro SP-C)。利用透射电镜观察板层小体。结果显示,实验组细胞形态由长梭形向多边形转变,细胞内有pro SP-C表达,培养基上清中有SP-C分泌,透射电镜观察到板层小体;而对照组细胞形态无明显改变,未检测到pro SP-C表达、SP-C分泌和板层小体形成。该研究结果表明,体外诱导培养可促进h UC-MSCs向AEC2s分化,通过该方法有望大量获得h UC-MSCs来源的AEC2s用于肺部疾病治疗研究。

结合学生满意度调查探讨教师在儿科多学科整合型PBL教学中的作用

目的 结合PBL教学后对学生的调查情况,探讨教师在儿科多学科整合型PBL教学中的作用.方法 重庆医科大学儿科学院构建了多学科整合型PBL,并在临床医学(儿科方向)五年制专业的部分示教课程中实施已逾2年.研究者从2016年9月28日至10月25日,针对该学院26名在专业课见习阶段接受PBL教学的本科生进行调查.在每次PBL课结束后,通过重庆医科大学网络教学平台,发放复旦大学钱睿哲等推荐的教学情况评价问卷;由学生无记名填写后回收;该调查共实施3次.用Excel 2007对问卷数据进行汇总.结果 共发放问卷77份,收回有效问卷77份.对多学科整合型PBL教学中教师应该达到的各项要求的评价方面,94.8％～97.4％的学生给予高分评价;针对教师的各项评价均达到“优”级.在对问卷开放式问题的回答中学生认为,教师在教学中能启发学生积极思考,鼓励学生发表不同的观点,为学生营造互相信任的环境,培养学生人际交流、沟通合作能力.结论 在儿科多学科整合型PBL教学中,教师应教会学生正确的学习方法,判断每名学生的知识和思维层次,针对每名学生存在问题与特点开展个性化施教.