ENDOD1在前列腺癌组织及细胞中的表达及意义

目的:观察比较核酸内切酶结构域内含蛋白1(endonuclease domain containing1,ENDOD1)在良性前列腺增生和前列腺癌组织中的表达差异;筛选存在ENDOD1特异性低表达的前列腺癌细胞系,继而通过调控该细胞ENDOD1蛋白表达,研究其在前列腺癌细胞中的生物学功能,初步探索ENDOD1基因与前列腺癌发生、进展的联系。方法:利用免疫组化SP法检测20例良性前列腺增生和21例前列腺癌术后标本组织中ENDOD1表达情况;利用RT-qPCR和Western blot方法观察ENDOD1的mRNA和蛋白在前列腺正常上皮细胞和不同类型前列腺癌细胞中的表达差异,筛选出特异性低表达细胞系;构建pCMV-N-Flag-ENDOD1重组质粒,转染前列腺癌细胞株,过表达ENDOD1蛋白,通过MTT法测定调控前后前列腺癌细胞活力的变化,流式细胞术检测细胞周期和凋亡,Transwell实验评价肿瘤细胞迁移和侵袭能力的改变。结果:免疫组化评分的方差分析结果显示ENDOD1表达与前列腺癌Gleason评分呈负性关联;RT-qPCR和Western blot实验结果表明ENDOD1在雄激素非依赖性前列腺癌细胞系PC3和DU145中存在着特异性低表达(P<0.05)。同时,MTT实验显示,在DU145细胞中,过表达ENDOD1肿瘤细胞活力显著下降(P<0.05);而流式细胞术检测结果表明过表达ENDOD1能够使DU145细胞周期停滞在G_0/G_1期,但细胞凋亡率无明显差异。此外,在Transwell实验中,过表达ENDOD1的DU145细胞迁移和侵袭能力明显下降(P<0.05)。结论:ENDOD1在Gleason评分越高的前列腺癌中表达越低,同时在雄激素非依赖性前列腺癌细胞系存在着特异性低表达;而过表达ENDOD1能明显抑制雄激素非依赖性前列腺癌细胞的生长、迁移和侵袭能力。

腹腔镜腹股沟淋巴结清扫术治疗阴茎癌疗效研究

目的探讨腹腔镜腹股沟淋巴结清扫术治疗阴茎癌的临床疗效。方法选取2015年6月至2017年10月13例阴茎癌患者,行腹腔镜腹股沟淋巴结清扫术,评估手术时间、术中出血量、术后并发症及术后住院时间等。结果 13例患者均在全身麻醉下成功施行腹腔镜腹股沟淋巴结清扫术,平均手术时间为176 min,平均出血量为20 m L,双侧腹股沟平均清扫淋巴结12个,平均住院时间8.7 d,术后恢复佳,无皮肤感染、缺血坏死、血肿等并发症,无复发。结论阴茎癌患者行腹腔镜腹股沟淋巴结清扫术安全、可行,值得临床推广。

单孔腹腔镜技术在泌尿外科手术中的应用

目的探讨单孔腹腔镜手术(LESS)技术在泌尿外科腹腔镜手术中的作用与价值。方法应用单孔腹腔镜技术实施125例泌尿外科腹腔镜手术,记录手术时间、术中出血量、术后禁食时间、引流管停留时间、术后住院时间、术中及术后并发症等指标。结果所有手术均顺利完成,其中上尿路手术109例(87.2%),肿瘤相关手术51例(40.8%);经腹膜后途径手术93例(74.4%),经脐切口手术32例(25.6%)。其中11例术中增加1个3 mm或5 mm辅助操作通道,所有患者在围手术期均无发生严重并发症。结论单孔腹腔镜技术可有效应用于泌尿外科部分术式,在掌握手术适应证的前提下可有序开展。

王不留行籽耳穴贴压联合超声透入治疗对泌尿系腹部手术后肠功能恢复的疗效观察

目的探究王不留行籽耳穴贴压联合超声透入治疗对泌尿系腹部手术后肠功能恢复的效果。方法选取收治的543例行腹部手术患者,随机分为对照组(133例)、王不留行籽耳穴贴压组(135例)、超声透入治疗组(138例)、王不留行籽耳穴贴压联合超声透入治疗组(137例)。比较四组患者首次排气、首次排便时间、术后腹胀评分、住院时间。结果对照组126例完成研究,王不留行籽耳穴贴压组127例完成研究,超声透入治疗组131例完成研究,王不留行籽耳穴贴压联合超声透入治疗组128例完成研究。干预后王不留行籽耳穴贴压联合超声透入治辽组首次排气时间、首次排便时间均早于其它三组(均P<0.05),王不留行籽耳穴贴压联合超声透入治疗组腹胀评分低于其它三组(均P<0.05),王不留行籽耳穴贴压联合超声透入治疗组住院时间少于对照组(P<0.05),与王不留行籽耳穴贴压组及超声透入治疗组比较无统计学差异(P>0.05)。结论王不留行籽耳穴贴压联合超声透入治疗能促进患者术后肠道功能的恢复、减轻患者术后腹胀,且不增加住院时间。

微小RNA-301a介导高血糖对前列腺癌细胞裸鼠移植瘤的促生长作用

目的观察微小RNA（miRNA，miR）-301a介导高血糖对人前列腺癌细胞PC3裸鼠移植瘤的促生长作用。方法以40mg／kg链脲佐菌素连续5d腹腔注射建立高血糖裸鼠模型，以慢病毒构建miR-301a过表达载体（LV-miR-301a）及其阴性对照，并构建miR-301a抑制剂载体（LV-miR-301a—inhibitor）及其阴性对照，转染PC3细胞，得到稳转细胞株。将上述稳转细胞（5×10 6个）分别接种到高血糖及正常糖裸鼠的皮下，成瘤后连续观察移植瘤的生长。5周后处死裸鼠，剥离瘤体组织，实时定量反转录聚合酶链反应（RT—qPCR）检测miR．301a的表达。结果接种空白PC3细胞后，高血糖组裸鼠瘤体组织miR-301a的表达量是正常组的（30．83±5．42）倍（P〈0．01），且前者最终瘤体体积[（850．46±72．54）mm3]明显比后者瘤体体积[（430．35±49．56）mm3]大（P〈0．01）。在正常组中，过表达miR-301a的移植瘤体积为（925．26±83．43）mm3，明显大于其阴性对照组瘤体（461．25±58．74）mm3（P〈0．01）。在高血糖组中，miR-301a抑制型移植瘤体积为（550．13±55．12）mm3显著小于其阴性对照组的（830．16±64．86）mm3（P〈0．01）。结论高血糖可以通过上调前列腺癌细胞miR-301a的表达，促进肿瘤生长，抑制miR-301a的表达，可以部分阻断高血糖对前列腺癌细胞的促生长作用。

6-磷酸果糖激酶-2／果糖双磷酸酶-2同工酶3基因敲除小鼠模型的构建

目的建立6-磷酸果糖激酶-2／果糖双磷酸酶-2同工酶3（PFKFB3）基因敲除小鼠模型。方法利用类转录激活样效应因子核酸酶（TALEN）技术，通过构建针对PFKFB3基因的TALEN质粒，并将构建好的TALEN质粒在体外反转录为mRNA。利用原核显微注射分别将0．1μl转录后的浓度为50ng／山的mRNA注射到C57BL／6品系小鼠受精卵中，将受精卵回送到ICR代孕母鼠输卵管中，得到F0代基因敲除杂合子小鼠。将FU代饲养至10周龄后合笼，从而构建基因敲除纯合子小鼠。所有子代鼠出生1周后剪尾，提取RNA后反转录，PCR产物作为模板进行基因测序鉴定基因型。结果通过TALEN技术成功构建了f1D代基因敲除杂合子小鼠3只，基因测序结果表明分别于靶基因位置缺失了10、4、1对碱基对；因PFKFB3基因敲除纯合子具有胚胎致死性，6只F1代基因敲除小鼠的基因测序结果显示，针对靶基因，编号4、5的小鼠缺失了1对碱基对，6号小鼠缺失4对碱基对，7、8、9号小鼠缺失10对碱基对。结论成功构建了PFKFB3基因敲除杂合子（＋／-）小鼠．。

取石网篮与传统取石钳在输尿管镜碎石术中的对比研究

目的比较取石网篮与取石钳在输尿管镜治疗输尿管结石术中的取石效率及安全性。方法回顾性分析中山大学附属第三医院2015年7月至10月开展输尿管钬激光碎石取石术病例共45例,其中采用取石网篮取石22例作为研究组,以同一术者主刀的23例采用输尿管镜取石钳取石作为对照组,进行统计学分析,比较两种方法的取石效率、安全性等相关临床指标。结果取石网篮组和取石钳组的结石一次清除率分别为95.4%和86.9%(P>0.05),平均手术时间前者少于后者[(30±10)min vs(58±18)min,P<0.05],平均单次取石时间,前者远低于后者[(15.3±2.7)s vs(35.3±10.2)s,P<0.05],平均单次取石大小,结石长径前者大于后者[(6.2±1.3)mm vs(4.3±2.2)mm,P<0.05]。取石网篮组因取石输尿管以及尿道黏膜损伤者2例,取石钳组因钳夹结石引发上述轻微损伤者7例;出现已取得结石在尿道滑脱者,取石网篮组0例,取石钳组13例。结论在输尿管镜下钬激光碎石取石术中,采用取石网篮套取输尿管结石具有一定的优势,是一种安全有效的取石方法。

水分离技术在小儿腹腔镜疝囊高位结扎术中的应用探讨

目的:探讨水分离技术在腹腔镜疝囊高位结扎术治疗交通性鞘膜积液术中游离腹膜和结扎疝囊的作用。方法:2017年7月~2018年7月有33例交通性鞘膜积液患儿(1岁5个月~9岁8个月)在我科接受腹腔镜疝囊高位结扎术手术治疗。术中采用硬膜外麻醉穿刺针经皮在腹膜外游离内环口处腹膜,穿刺针潜行至输精管边缘时,以注射器经穿刺针尾部注入3~5 ml生理盐水形成水床,分离输精管及腹膜间隙,穿刺针贴近腹膜顺利穿过此间隙,随后常规操作完成精索与腹膜的游离,在腹壁外完成未闭疝囊口的结扎。结果:33例患儿共接受腹腔镜下疝囊高位结扎41次,单次疝囊高位结扎时间2.5~14.0 min,平均(7.1±3.3)min;随访1~12个月,平均7.0个月,无复发,切口愈合良好。结论:利用水分离技术在穿刺针游离内环腹膜时避开输精管时加宽腹膜与输精管之间的距离,穿刺时能顺利避开输精管,在收紧疝囊口的结扎线时,减少了输精管被勾入到结扎线圈内的可能性,避免了输精管的扭曲及成角,有效减少手术并发症的发生。