基于JAK/STAT信号通路探讨复方竹节参片对膝关节骨性关节炎兔的作用机制

目的探讨JAK/STAT信号通路在膝关节骨性关节炎(KOA)发生、发展和转归中的作用,初步揭示复方竹节参片治疗KOA的作用环节和靶点。方法取6只雄性日本大耳白兔作为对照组,取34只雄性日本大耳白兔采用关节腔注射木瓜蛋白酶诱导KOA模型。将造模成功的兔随机分为模型组8只和复方竹节参片高、中、低剂量组各6只。造模结束后,复方竹节参片高、中、低剂量组分别按150 mg/kg、75 mg/kg、37.5 mg/kg的剂量灌胃给予复方竹节参片混悬液,模型组和对照组同法给予蒸馏水,均每天1次,连续14 d。分别于造模前、造模结束后、灌胃7 d和灌胃14 d测量各组兔脚踝周径;于末次灌胃后24 h,取膝关节、血清和滑膜组织,采用HE染色法观察膝关节组织病理学形态,ELISA法测定血清中白细胞介素-6(IL-6)水平,Western blot法测定滑膜组织中JAK2、p-JAK、STAT3、ERK1蛋白表达量。结果与对照组比较,模型组兔脚踝周径显著增加(P<0.05),血清IL-6水平及滑膜中JAK2、p-JAK、STAT3、ERK1蛋白表达量均显著升高(P均<0.05)。与模型组比较,复方竹节参片各组兔脚踝周径明显缩短(P均<0.05),复方竹节参片高、中剂量组血清IL-6水平均显著降低(P均<0.05);复方竹节参片高剂量组滑膜组织中JAK2蛋白表达量及复方竹节参片各组滑膜组织中p-JAK2、STAT3、ERK1蛋白表达量均显著降低(P均<0.05)。结论复方竹节参片能显著缓解KOA的关节肿胀,其机制可能与调控JAK/STAT信号通路上下游相关的细胞因子和蛋白表达有关。

中药及其有效成分治疗溃疡性结肠炎调控细胞因子的研究进展

细胞因子(CK)作为炎症介质参与肠黏膜的病理性损伤,在溃疡性结肠炎(UC)发病机制中起着至关重要的作用。UC是一种病因病机尚未完全明确的肠道非特异性炎症性疾病,目前西药治疗以氨基水杨酸类、皮质类固醇类与免疫抑制剂为主。近年来发现许多中药治疗UC效好、复发率低及副作用小,部分机制与调节CK有关。本文从中药及其有效成分通过调节CK对UC的干预作用作一综述。

从“肝者,凝血之本”探讨原发免疫性血小板减少症的病机与论治思路

原发免疫性血小板减少症(ITP)归属于中医学“血证”“发斑”“肌衄”等范畴,临床表现以出血为主,治疗上以防止出血为要。肝脏是调节血液运行的重要脏器。明代章潢《图书编》曰:“肝者,凝血之本”,认为肝为凝血之本,主凝血,具有收摄血液、防止出血的功能,为从肝论治ITP提供了良好的理论依据。文章以“肝者,凝血之本”为切入点,论述其内涵主要包括肝气摄血、肝阴凝血和肝主疏泄能防止出血3个方面;ITP病机上以肝之气、血、阴虚为本,虚热、血热、气滞、血瘀为标,可以概括为肝不主凝血;从补肝以止血(益肝气、养肝血、滋肝阴)、凉肝清肝以止血、疏肝化瘀以止血3个方面论治ITP,冀为ITP的防治和诊疗提供新思路。

基于PP2A/AKT通路探讨扶正祛毒汤对急性髓系白血病-完全缓解患者CD34^(+)细胞源DC激发T细胞的影响

目的:探讨扶正祛毒汤治疗急性髓系白血病-完全缓解(AML-CR)的可能作用机制。方法:运用血清药理学、Ficoll密度梯度离心、免疫磁珠阳性选择、细胞培养、流式细胞分析、Western Blot和RT-qPCR等技术检测DC表面CD1a、CD80、CD83、CD86、HLA-DR的表达,DC激发T细胞中CTLA-4、PP2A、AKT、p-AKT蛋白和mRNA的表达。结果:扶正祛毒汤含药血清能诱导AML-CR患者CD34^(+)细胞形成典型的DC形态,显著增加DC表面CD1a、CD80、CD83、CD86、HLA-DR的表达(P<0.05),上调DC激发T细胞中PP2A蛋白及mRNA的表达(P<0.05),下调CTLA-4、AKT蛋白及mRNA的表达(P<0.05),下调p-AKT蛋白表达(P<0.05)。结论:扶正祛毒汤治疗AML-CR的作用机制可能与该方能够促使AML-CR患者CD34^(+)细胞源DC成熟,抑制CTLA-4与CD80、CD86的结合,有效激活T细胞,调控PP2A/AKT信号通路,进而杀伤白血病细胞有关。

基于B7-1/2/CD28/CTLA-4通路探讨扶正祛毒汤干预急性髓系白血病完全缓解患者CD34~+细胞诱导成树突细胞激发T细胞的影响

目的探讨扶正祛毒汤治疗急性髓系白血病完全缓解的可能作用机制。方法12只新西兰大白兔随机分为正常组以及扶正祛毒汤低、中、高剂量组,每组3只。扶正祛毒汤低、中、高剂量组兔分别给予扶正祛毒汤浓缩煎剂5、10、20g/(kg·d)灌胃3d,正常组兔给予等体积蒸馏水灌胃,末次灌胃后心脏取血获得正常血清和扶正祛毒汤低、中、高剂量血清。将急性髓系白血病完全缓解患者骨髓稀释后分离提纯CD34~+细胞,将扩增后的CD34^(+)细胞分为空白组、细胞因子组、正常血清组和扶正祛毒汤低、中、高剂量血清组。除空白组外,其余各组均添加细胞因子诱导9d成为树突细胞。流式细胞术(FCM)检测各组树突细胞表面抗原分子CD83、CD1a、HLA-DR的表达,以及共刺激分子B7-1、B7-2的表达。诱导成熟后的树突细胞分别激发自体和异体T细胞,免疫印迹试验(WB)和RT-qPCR法检测T细胞中特异性表面糖蛋白CD28(CD28)和细胞毒性T淋巴细胞相关蛋白4(CTLA-4)蛋白和mRNA的表达。MTT比色法检测激发后的T细胞在不同效靶比时对人髓系白血病细胞株K562的杀伤作用。结果与空白组相比较,细胞因子组、正常血清组和扶正祛毒汤低、中、高剂量血清组树突细胞表面抗原分子CD83、CD1a、HLA-DR的表达明显升高(P<0.05),共刺激分子B7-1、B7-2的表达明显升高(P<0.05);与细胞因子组和正常血清组相比较,扶正祛毒汤低、中、高剂量血清组树突细胞表面抗原分子CD83、CD1a、HLA-DR的表达明显升高(P<0.05),共刺激分子B7-1、B7-2的表达明显升高(P<0.05)。与空白组、细胞因子组和正常血清组相比较,扶正祛毒汤低、中、高剂量血清组CD28蛋白及mRNA表达均明显增加(P<0.05),CTLA-4蛋白及mRNA表达均明显降低(P<0.05),T细胞对K562细胞的杀伤率明显增加(P<0.05),且杀伤作用随效靶比的增加而增强,但正常人T细胞与患者T细胞对K562细胞的杀伤作用无明显差异(P>0.05)。结论扶正祛毒汤治疗急性髓系白血病完全缓解的机制可能与该方能够有效促进急性髓系白血病完全缓解患者骨髓CD34^(+)细胞源树突细胞的成熟,从而抑制共刺激分子B7-1、B7-2与CTLA-4结合,且促进B7-1、B7-2与CD28结合,调控B7-1/2/CD28/CTLA-4信号通路有关。

扶正祛毒汤含药血清对急性髓系白血病完全缓解患者CD34^(+)细胞诱导成树突细胞及共刺激分子B7-1、B7-2表达的影响

目的探讨扶正祛毒汤治疗微小残留白血病的可能作用机制。方法12只新西兰大白兔随机分为扶正祛毒汤低、中、高剂量组以及正常组,每组3只。扶正祛毒汤低、中、高剂量组兔分别给予扶正祛毒汤浓缩煎剂5、10、20g/(kg·d)灌胃3天,正常组兔每天给予7.5ml蒸馏水灌胃,末次灌胃后心脏取血获得正常血清和扶正祛毒汤低、中、高剂量血清。将急性髓系白血病完全缓解患者骨髓稀释后分离提纯CD34细胞,将扩增后的CD34细胞分为空白组、细胞因子组、正常血清组和扶正祛毒汤低、中、高剂量血清组。除空白组外,其余各组均添加细胞因子诱导9天成为树突细胞,诱导前及培养过程中观察细胞形态。9天后检测树突细胞表面抗原分子CD83、CD1a、人白细胞DR抗原(HLA-DR)、B7-1、B7-2表达,检测树突细胞中B7-1、B7-2蛋白及mRNA表达。结果空白组细胞始终未观察到树突状改变;细胞因子组、正常血清组和扶正祛毒汤低、中、高剂量血清组细胞胞体明显增大,细胞表面呈现星状多形性或树枝状典型突起,其中扶正祛毒汤中剂量血清组最为典型。与空白组比较,其余各组树突细胞表面标志物CD1a、CD83、HLA-DR、B7-1、B7-2表达均升高(P<0.05);与细胞因子组和正常血清组比较,扶正祛毒汤低、中、高剂量血清组DC表面各标志物表达均升高(P<0.05)。与空白组、细胞因子组和正常血清组比较,扶正祛毒汤低、中、高剂量血清组B7-1和B7-2蛋白及mRNA表达均升高(P<0.05)。与扶正祛毒汤中剂量血清组比较,扶正祛毒汤低、高剂量血清组B7-1和B7-2蛋白及mRNA表达均降低(P<0.05)。结论扶正祛毒汤可促进急性髓系白血病完全缓解患者CD34*细胞源树突细胞的成熟,增加树突细胞中共刺激分子B7-1、B7-2的表达,提高抗原提呈能力,这可能是其治疗微小残留白血病的作用机制之一。

加味青蒿鳖甲汤对急性髓系白血病缓解后CD34^(+)细胞源DC共刺激分子B7-1、B7-2的影响

目的探讨加味青蒿鳖甲汤治疗急性髓系白血病完全缓解(AML-CR)的可能作用机制。方法将12只新西兰大白兔用随机数字表法分为正常组和加味青蒿鳖甲汤高、中、低剂量组,每组3只。加味青蒿鳖甲汤高、中、低剂量组兔分别给予加味青蒿鳖甲汤浓缩煎剂30、15、7.5g/(kg·d)灌胃3d,正常组兔灌胃等体积蒸馏水,末次给药后心尖取血,获得正常兔血清和加味青蒿鳖甲汤高、中、低剂量兔血清。将AML-CR患者骨髓稀释后采用免疫磁珠法分离提纯CD34^(+)细胞,并对CD34^(+)细胞进行扩增,将扩增后的CD34^(+)细胞分为加味青蒿鳖甲汤高、中、低剂量血清组、正常血清组、细胞因子组以及空白组。除空白组外,其余各组均添加细胞因子(GM-CSF+IL-4+IFN-α+TNF-α)诱导9d成为树突细胞(DC),培养过程中用倒置显微镜观察细胞形态。用FCM检测DC表面抗原分子B7-1、B7-2、CD83、CD1a、HLA-DR表达率,用qRT-PCR、Western blot检测DC中B7-1、B7-2蛋白及mRNA表达。结果空白组DC细胞始终未观察到树突状改变;加味青蒿鳖甲汤高、中、低剂量组、细胞因子组和正常血清组细胞胞体显著增大,细胞表面出现星状多形性和树枝状突起。与空白组相比较,加味青蒿鳖甲汤高、中、低剂量组DC表面标志物B7-1、B7-2、CD83、CD1a、HLA-DR表达均显著升高(P<0.05);与细胞因子组和正常血清组相比较,加味青蒿鳖甲汤高、中、低剂量组DC表面标志物B7-1、B7-2、CD1a、HLA-DR表达均明显升高(P<0.05);加味青蒿鳖甲汤高、中剂量组DC表面标志物CD83明显升高(P<0.05)。空白组、细胞因子组和正常血清组三组间B7-1和B7-2 mRNA及蛋白相对表达无明显差异(P>0.05);与空白组、细胞因子组和正常血清组比较,加味青蒿鳖甲汤高、中、低剂量血清组B7-1和B7-2 mRNA及蛋白相对表达均显著升高(P<0.05)。结论加味青蒿鳖甲汤治疗AML-CR的作用机制可能与该方能够有效促进AML-CR患者CD34^(+)细胞源DC的成熟,从而增加DC中共刺激分子B7-1、B7-2的表达,增强DC的抗原提呈能力有关。

创伤性股骨头坏死外周血蛋白修饰组学研究

[目的]筛查创伤性股骨头坏死(TIONFH)患者外周血中特异性修饰蛋白,进一步探索TIONFH发生的表观遗传机制。[方法]采集TIONFH患者(TIONFH组)和创伤非坏死患者(NC组)的外周血样本各3例,提取全蛋白,通过泛抗体实验考察外周血蛋白磷酸化、乙酰化、泛素化以及琥珀酰化水平,确定TIONFH中变化较明显的修饰化类型。通过联合串联质量标签(TMT)标记、高效液相色谱分级技术、酰化肽段的富集技术以及基于质谱的定量蛋白质组学技术等,进一步对TIONFH特异性修饰化定量组学进行研究,并对筛选出的差异位点对应的蛋白进行聚类分析和蛋白互作分析。[结果]和NC组相比,TIONFH组外周血中乙酰化修饰水平存在明显差异。进一步乙酰化定量组学分析结果显示,93个蛋白的145个位点包含定量信息,其中TIONFH组中修饰水平发生上调的乙酰化位点有10个,含8个蛋白;修饰水平发生下调的乙酰化位点有2个,含2个蛋白。[结论]TIONFH患者外周血蛋白乙酰化位点修饰水平存在明显变化,筛选出的差异修饰化位点及蛋白可作为TIONFH的候选分子标志物。