二烯丙基二硫对人小细胞肺癌NCI-H446细胞裸鼠移植瘤生长的影响

目的二烯丙基二硫(diallyl disulfide,DADS)在多种肿瘤治疗研究中取得了显著的成果。文中探讨DADS对人小细胞肺癌细胞裸鼠移植瘤生长的影响,并研究其作用机制。方法取裸鼠25只,建立NCI-H446细胞裸鼠移植瘤模型。成瘤裸鼠按随机列表法分为阳性对照组、阴性对照组、DADS 20mg/kg组、DADS 60mg/kg组、DADS 180mg/kg组,顺铂(DDP)浓度66mg/kg为阳性对照组,等渗盐水作阴性对照。定期观察浓度不同的DADS对肿瘤生长的影响;HE染色,利用光学显微镜观察移植瘤的形态特征;通过流式细胞术实验,验证DADS对瘤组织细胞周期分布及凋亡的影响。结果 DADS 20mg/kg组、60mg/kg组、180mg/kg组抑瘤率(40.6%、53.1%、66.4%)较阴性对照组明显升高(0),差异有统计学意义(P<0.05);与DADS 20 mg/kg组比较,DADS 60 mg/kg组、DADS 180 mg/kg组抑瘤率差异有统计学意义(P<0.05);HE染色后,阴性对照组瘤细胞密度大,瘤细胞排列紊乱,细胞核异型性大,染色深,核分裂像增多,可见明显的细胞坏死。而DADS处理组,细胞密度较小,瘤细胞排列较规则,核异型性小,呈圆形淡染,核分裂像减少。流式细胞术检测显示,DADS 180 mg/kg组、DADS 60mg/kg组处于G2/M期的细胞数(33.1个、24.8个)较阴性对照组(8.5个)明显增多,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 DADS能抑制人小细胞肺癌裸鼠移植瘤生长,并对细胞周期产生阻滞,促进细胞凋亡。

S100A11慢病毒表达载体的构建及其在肝癌细胞中的表达

目的构建S100A11基因慢病毒表达载体,建立Huh-7 S100A11稳定细胞株,并鉴定其表达。方法 RT-PCR扩增S100A11基因片段,与pWPT载体经MluⅠ和NotⅠ同时酶切后连接,构建慢病毒表达载体pWPTS100A11;将表达载体pWPT-GFP和pWPT-S100A11与慢病毒包装质粒pMD2.G和psPAX2共同感染293T细胞,获得携带GFP和S100A11基因的慢病毒,将两种慢病毒分别感染Huh-7细胞,获得Huh-7 S100A11和Huh-7GFP稳定细胞株;利用Real-Time PCR和Western Blotting实验方法检测感染后S100A11的过表达情况。结果成功构建慢病毒表达载体pWPT-S100A11;慢病毒感染Huh-7细胞株后,阳性对照Huh-7GFP经荧光镜检测传染率达95%;感染Huh-7细胞后S100A11的mRNA和蛋白表达量均增加。结论成功构建慢病毒表达载体pWPT-S100A11,并建立了Huh-7 S100A11稳定细胞株,为进一步研究S100A11基因在肝癌中的生物学功能和机制奠定了基础。

DADS对人小细胞肺癌NCI-H446细胞系增殖抑制的研究

目的：研究二烯丙基二硫（diallyldisulfide，DADS）对人小细胞肺癌NCI．H446细胞增殖的抑制作用，并探讨其作用机制。方法：体外培养NCI-H446细胞，采用MTT、细胞计数实验方法检测DADS抑制NCI—H446细胞增殖；通过HE染色和AO—EB荧光染色方法，观察DADS处理后NCI—H446细胞的形态学改变。结果：MTT结果显示：DADS作用于NCI—H446细胞48h后，代谢MTT的能力明显降低，显示出较强的细胞毒性反应，IC50值介于20-40μg／ml之间。细胞计数结果表明：DADS作用于NCI—H446细胞后，随DADS浓度增加NCI—H446细胞倍增时间延长。HE染色显示：NCI—H446细胞经DADS处理24h后，与对照组相比，细胞体积变小，胞浆丰富，细胞核变小，染色变淡。AO-EB荧光染色显示：NCI-H446细胞经DADS处理24h后，与对照组相比，细胞皱缩、呈圆形，胞质黄色或橘红色，细胞核或细胞质内可见致密浓染的黄绿色或橘红色荧光，并可见橘红色碎片且随DADS浓度增加，随DADS浓度增加细胞密度逐渐减少。结论：DADS能抑制体外培养的NCI—H446细胞增殖，作用效果与药物浓度及作用时间相关。