幽门螺杆菌东亚型菌株GZ7/cagA^(+)和GZ7/ΔcagA源外膜囊泡的蛋白组学比较

目的通过分离、鉴定和比较细胞毒素相关基因A蛋白(cagA)、阳性幽门螺杆菌(H.pylori)、东亚型菌株GZ7/cagA^(+)及其cagA敲除菌株GZ7/ΔcagA来源的外膜囊泡(OMVs)中的差异表达蛋白(DEPs),分析cagA基因对OMVs中蛋白表达的影响。方法采用超速离心法分别提取GZ7/ΔcagA和GZ7/cagA^(+)的OMVs,通过透射电镜和纳米颗粒追踪技术鉴定其形态和粒径,使用Western blot技术验证两组OMVs中cagA蛋白的表达,分析OMVs的蛋白质组学;对蛋白组学数据进行质控分析和主成分分析鉴定后,以上调蛋白倍数变化(FC)>2.0、下调蛋白FC<0.5,FDR≤0.05为筛选条件筛选DEPs,利用OmicsBean在线工具、Gene Ontology和KOBAS对DEPs进行生物信息学分析;采用免疫荧光鉴定OMVs细胞在细胞中的定位,实时无标记细胞分析仪检测细胞活性。结果通过电镜和粒径证实成功分离纯化了OMVs;蛋白质组分析发现,GZ7/cagA^(+)-OMVs组与GZ7/ΔcagA-OMVs组比较有79个DEPs,其中38个蛋白下调、41个蛋白上调;生物信息学分析显示,DEPs主要与丙酮酸代谢、丙酸代谢、糖酵解/糖异生及柠檬酸循环等代谢途径有关;免疫荧光和实时无标记细胞分析证实H.pylori来源的OMVs能进入细胞并定位在线粒体并抑制细胞增殖。结论cagA能影响H.pylori分泌的OMVs中蛋白质的成分,DEPs可能促进cagA^(+)H.pylori在胃黏膜上的定植及致病性。

中国大鲵组织蛋白酶D基因克隆及其表达特征分析

【目的】明确组织蛋白酶D基因(CTSD)在中国大鲵不同组织中的表达模式及其免疫防御功能,为深入探究大鲵抵抗病原入侵的作用机理提供理论依据。【方法】通过RACE克隆中国大鲵CTSD基因cDNA序列,采用ProtParam、SignalP-5.0、TMHMM 2.0、CELLO、NetPhos 3.1及NetNGlyc 1.0等在线软件进行生物信息学分析,并通过实时荧光定量PCR检测健康中国大鲵不同组织及嗜水气单胞菌感染后的CTSD基因表达情况。【结果】中国大鲵CTSD基因cDNA序列全长1992bp,包括1197bp的开放阅读框(ORF)、136bp的5’端非编码区(5’-UTR)和659bp的3’端非编码区(3’-UTR),共编码398个氨基酸残基。中国大鲵CTSD蛋白相对分子量为43 kD,理论等电点(pI)为6.07,属于酸性稳定疏水性蛋白,主要定位于溶酶体,具有跨膜结构和信号肽,包含1个典型的天冬氨酸蛋白酶结构域和2个天冬氨酸蛋白酶活性位点,以及3个N-糖基化位点(131Asn、222Asn和249Asn)和33个潜在的磷酸化位点。中国大鲵CTSD氨基酸序列与东北小鲵CTSD氨基酸序列的相似性最高,达88.68%;基于CTSD氨基酸序列相似性构建的系统发育进化树也显示中国大鲵与东北小鲵的亲缘关系最近。CTSD基因在健康中国大鲵的肺脏、肌肉、皮肤、肾脏、肝脏、脾脏、心脏、胃、脑和肠道等10个组织中均有表达,且以肺脏、肌肉、肠道和脾脏中的相对表达量较高;嗜水气单胞菌感染后72 h,中国大鲵肾脏和肝脏中的CTSD基因相对表达量极显著升高(P<0.01,下同),分别是对照组的13.88和35.67倍;脾脏和皮肤中的CTSD基因相对表达量显著升高(P<0.05),分别是对照组的5.43和1.74倍;肌肉中的CTSD基因相对表达量则在感染后12 h极显著升高至最高值,是对照组的42.96倍。【结论】中国大鲵CTSD氨基酸序列具有高度的保守性,包含1个典型的天冬氨酸蛋白酶结构域和2个天冬氨酸蛋白酶活性位点;CTSD基因呈组成性表达,可能在中国大鲵抗病原菌入侵的免疫反应中发挥作用。

绝经期糖尿病患者激素替代治疗的进展

雌激素替代治疗（estrogenreelacementtherapy，ERT）或联合应用孕激素统称为激素替代治疗（hormorereplacementtherapy，NRT）。绝经期妇女用HRT可改善更年期症状，减少心血管疾病（cardiovasculardisease，CVD）和骨质疏松的发生率，又献报道较多，而有关绝经期糖尿病（menopausaldiabetesmellitus，MDM）患者的HRT报道较少，现就这方面的研究进展作一综述。

浅析漫画在高中政治教学中的应用策略

受传统教学模式的影响,高中政治教学对学生的吸引力不强,不能最大限度的激发学生学习政治知识的兴趣。自2004年新课改推行以来,打造学生主动学习的课堂、激发学生主动学习的兴趣成为高中教学的重要目标。在这个大背景之下,将漫画引入到高中政治课堂教学中就成为一种必然的趋势。

血管紧张素转换酶抑制剂的临床应用

随着对血管紧张素转换酶抑制剂(ACEI)研究的不断深入和各种ACEI的制剂广泛应用，其优势也日益显现。

东亚与西方幽门螺杆菌菌株感染原代胃癌细胞的转录组学分析

本研究旨在比较、分析和验证东亚与西方幽门螺杆菌(Helicobacter pylori)菌株感染原代胃癌细胞后的差异表达基因(differentially expressed genes,DEGs),探讨东亚与西方菌株的致病差异。用幽门螺杆菌东亚菌株GZ7、西方菌株26695以感染复数(multiplicity of infection,MOI)50∶1感染原代胃癌细胞6 h,收取细胞进行转录组学测序,以|log_(2)FC|>1,FDR≤0.05为标准,筛选DEGs,利用OmicsBean-Cancer在线工具对DEGs进行生物信息学分析。选择4个重要基因进行TCGA数据库分析及Western blot验证。结果表明,GZ7感染胃癌细胞组与未感染胃癌细胞组比较有31个DEGs;26695感染胃癌细胞组与未感染胃癌细胞组比较有109个DEGs;26695感染组与GZ7感染组之间共有的DEGs为22个;GZ7感染组特有的DEGs为9个,26695感染组特有的DEGs为87个。DEGs主要与炎症(TNF信号通路、NF-κB信号通路)、细胞表面受体(Toll样受体信号通路、NOD样受体信号通路)等通路相关。TCGA数据库分析发现IL6和DKK1在胃癌组织中的表达显著高于正常组织的(P<0.001),且IL6和DKK1高表达与胃癌患者10年生存率呈负相关(P<0.01)。Western blot结果证实幽门螺杆菌感染上调胃癌细胞中JUN和FOSL1(两个转录因子),IL6,以及DKK1(东亚菌株特有的DEGs)蛋白的表达;下调细胞中的JUN基因可以抑制IL6和DKK1蛋白的表达,GZ7再感染能够恢复细胞中JUN、IL6和DKK1蛋白的表达水平。总之,东亚、西方幽门螺杆菌菌株感染胃癌细胞产生的DEGs有明显差异,这可能是东亚、西方国家胃癌发病率差异的原因之一。