麦胚凝集素慢病毒载体的构建及其对脂肪干细胞的感染

目的探讨麦胚凝集素(WGA)慢病毒载体的构建与表达的方法,以及WGA在神经系统中跨膜示踪的能力。方法采用基因工程方法,将WGA的基因插入到慢病毒表达载体Plvx-IRES-Zs Green1中。再采用慢病毒包装,将构建好的质粒和其他3种包装质粒(RPEV、PRRE、VSVG)在293T细胞中进行共转染,获取病毒液后感染人源的脂肪干细胞(h ADSCs),将感染后的h ADSCs注入小鼠的脑卒中模型,修复神经损伤。结果显微镜下检测到绿色荧光报告蛋白表示感染成功。对感染后的h ADSCs进行免疫组化显色,结果显示WGA已经成功的在h ADSCs中实现了表达,在MCAO小鼠模型脑损伤处追踪到感染了WGA的h ADSCs。结论慢病毒包装WGA蛋白的方法可靠高效,可以作为一种高效的示踪技术广泛应用于各类细胞。

精子代谢与男性不育的相关性研究进展

精子发生和成熟中涉及到多种与代谢相关的过程,任何一种代谢异常都可引起精子活动力、受精能力等受损,最终导致男性不育的发生,如精子中活性氧簇过度产生引起的氧化应激反应,损害了精子的运动和获能;在临床上,男性不育症患者的精浆与正常男性相比,其代谢物成分表现出明显的变化,也可反映精子发育和成熟过程的异常,并间接表明这可能与男性不育相关。本文从精子代谢的相关途径、精子代谢组学检测与精子活动力及临床男性不育症的相关性等方面进行综述。

高脂饮食诱导的肥胖对小鼠精子线粒体及活动力损伤的机制研究

目的探究高脂饮食诱导的肥胖引起C57BL/6小鼠精子线粒体损伤及活动力低下的作用机制。方法构建肥胖实验动物模型。采用计算机辅助精液分析仪(computer-assisted semen analysis, CASA)分析其生育力相关参数,包括精子活动力、前向运动精子百分数以及精子浓度;运用苏木精-伊红染色法(hematoxylin-eosin staining, HE)分析正常与肥胖小鼠的睾丸形态学结构,荧光探针JC-1和罗丹明123对小鼠精子线粒体进行染色,采用流式细胞仪分析两组精子染色后的平均荧光强度,最后使用Real-time PCR对两组小鼠精子线粒体DNA(mitochondrial DNA, mtDNA)的拷贝数进行分析。结果与正常野生型小鼠相比,肥胖小鼠的精子活动力、前向运动精子百分数明显减弱且睾丸形态存在异常,而精子浓度没有明显变化。进一步研究发现,与正常小鼠相比,肥胖小鼠的精子线粒体膜电位显著降低,但两者mtDNA拷贝数没有明显差异。结论肥胖能够引起精子线粒体功能损伤从而导致精子活动力及前向运动精子百分数低下,最终损伤雄性的生殖功能。