食品及环境样品中肠球菌快速检验方法的建立及优化

目的建立并优化食品及环境样品中肠球菌的快速检验方法。方法用mEI培养基作为选择性培养基,肠球菌tuf基因为靶基因设计引物,建立食品及环境样品中肠球菌的快速检验方法。通过添加肠球菌和非肠球菌标准菌株,验证方法的检测限、灵敏度及特异性,并使用优化后的方法对北京市丰台区某大型生鲜猪肉集贸市场的地面、墙壁、污水和生鲜猪肉等样品中的肠球菌进行检验。结果所建方法的检测限为1 CFU/100cm2和1 CFU/25 g(mL),且与10种非肠球菌无交叉反应;地面涂抹、墙壁涂抹、污水和生鲜猪肉等样品中均检验出肠球菌,检出率为100%。结论建立了简便、快速、灵敏、特异的肠球菌检验方法;集贸市场内部环境和生鲜猪肉存在肠球菌污染。应加强市售生鲜肉中肠球菌的监测,并采取相应措施降低其污染水平。

细菌素抗菌作用机理及其应用

细菌素是微生物在代谢过程中通过核糖体途径合成的一类具有抗菌活性的多肽物质，对细菌素产生菌自身没有抑制作用。细菌素在自然界中普遍存在，30％～999／6的细菌和古生菌可以产生至少一种细菌素。细菌素对多种蛋白酶敏感，因此在体内不容易产生残留和抗药性，另外细菌素对高温、酸性环境具有良好的耐受性，因此细菌素可以被用于开发低毒、低残留、安全、高效的生物饲料和生物药品替代传统抗生素类药品。

醋酸钙不动杆菌PHEA-2苯酚降解调控蛋白MphR化学信号域的研究

MphR是醋酸钙不动杆菌PHEA-2调控苯酚代谢的激活蛋白。通过分析苯酚羟化酶启动子的lacZ融合子(PmphK::lacZ)在21种苯酚及苯酚衍生物诱导时的β-半乳糖苷酶活性,确定了调控蛋白MphR化学信号域可以识别苯酚,邻甲酚,间甲酚,邻氯苯酚等酚类衍生物。大肠杆菌中逐段截短MphR化学信号域试验证实,当化学信号域截短后,MphR受苯酚诱导激活转录的功能丧失。结果表明,化学信号域对于苯酚激活转录功能极为重要。

固态发酵豆粕营养价值及其应用研究

固态发酵法是一种切实可行的提高豆粕营养价值的方法。豆粕是畜禽最重要的植物性蛋白源,但其含有的抗营养因子限制了幼龄动物对蛋白质的有效利用。研究结果表明,发酵豆粕对动物的生长性能、消化和免疫功能具有积极的影响。作者就固态发酵豆粕的营养价值研究及其在动物饲养中的应用进行了综述。

苯酚羟化酶的功能与调控研究进展

苯酚是一种广泛存在的芳香烃污染物,可以被一些环境微生物降解。苯酚好氧降解的第一步是苯酚被苯酚羟化酶催化为邻苯二酚。苯酚羟化酶的转录主要由XylR/DmpR调控蛋白激活,另外在一些多组分苯酚羟化酶操纵子中也发现了起抑制作用的调控蛋白。综述了苯酚降解菌中苯酚羟化酶的功能和调控机制等方面的研究进展。

猪β-防御素-2转化酿酒酵母方法的比较分析

为了建立操作简单、高效率的猪β-防御素-2转化酿酒酵母的方法,试验比较了酿酒酵母的两种转化方法,即电转化和醋酸锂法。结果显示,两种转化方法对细胞生长状态均有严格的要求。在醋酸锂转化中,以培养10h,D600nm为1.051的细胞制备感受态,热激时间为60min时,转化率为136个/μg DNA;在电转化中,以培养12h,D600nm为1.359的细胞制备感受态,电击电压2.5kV时转化效率为154个/μg DNA。但综合操作效率,最终选择醋酸锂法进行酿酒酵母的转化。

猪β-防御素-2基因在大肠杆菌中的融合表达及抑菌活性检测

将猪β-防御素-2基因(pBD-2)片段正确连接到pET32a载体上,从而得到稳定表达pBD-2的大肠杆菌表达株。根据已报道的pBD-2基因序列,按大肠杆菌密码子优化原则合成了5条pBD-2基因片段,通过重叠延伸PCR(SOE PCR)方法将这5段延伸成完整的pBD-2基因序列,将该基因定向插入原核表达质粒pET32a的多克隆位点上,成功地在大肠杆菌BL21(DE3)中表达出TrxA-pBD2融合蛋白。结果显示,表达的融合蛋白用肠激酶切掉TrxA后做琼脂孔穴扩散法检测,pBD-2对金黄色葡萄球菌有较好的抑菌活性,表明试验获得表达pBD-2的大肠杆菌菌株。

基于弹幕文本挖掘的猪肉价格上涨舆论研究

弹幕作为一种新的交互方式,能直观反映猪肉价格上涨时间对公众舆论产生的影响。本文以弹幕文本信息为研究对象,利用词频、语义网络分析、LDA主题挖掘和SnowNLP情感分析模型等方法,进行了内容分析与情感解读,实现对网络舆情弹幕的情感分类和主题分析。在此基础上建立了物价预测模型。该项研究可为相关政策的调整提供一定的参考。

陕西一养猪场4种细菌的流行状况及分型研究

为了解陕西省养猪场大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌和肠球菌的流行状况,按照国家食品安全风险评估中心'动物源食物链中耐药性细菌污染和传递机制研究工作方案'规定,分别于生猪育肥前期(50~90日龄)和育肥后期(120~130日龄)在陕西省扶风县某养猪场采集猪粪、猪鼻拭子、猪舍地面涂抹样品和饲养员粪便等样品共150份。按照工作方案推荐的方法对4种细菌进行分离、鉴定,采用PCR技术对大肠杆菌和肠球菌进行分型,PCR结合DNA测序技术对金黄色葡萄球菌进行葡萄球菌蛋白A(Staphylococcus Protein A;SPA)和耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(Methicillin-resistant Staphylococcus aureus;MRSA)分型,采用血清凝集方法对沙门氏菌进行血清分型。结果表明,育肥前期采集的75份样品中,肠球菌阳性样品检出率(89.3%)最高,其次是大肠杆菌(69.3%)、沙门氏菌(38.7%)和金黄色葡萄球菌(12.0%)阳性样品。育肥后期75份样品中,肠球菌阳性样品检出率仍为最高(73.3%),其次分别为大肠杆菌(64.0%)、沙门氏菌(6.67%)和金黄色葡萄球菌(1.33%)阳性样品。肠黏附性大肠杆菌(Enteroadhersive Escherichia coli, EAEC)在检出的大肠杆菌中最为流行(40.0%),肠球菌则以粪肠球菌(Enterococcus faecalis)最为常见(58.6%)。检出的沙门氏菌均为鼠伤寒沙门氏菌(Salmonella Typhimurium)。1株金黄色葡萄球菌为T441型MRSA,2株金黄色葡萄球菌为T701型,T189型和T899型各1株,剩余2株未分出型。因此,该养猪场4种细菌污染严重,细菌型别相对单一,且在生猪育肥前期和后期均有检出,需要及时加以控制和防范。

基于文献计量学与VOSviewer的中国学术发展脉络量化研究

通过文献计量学和可视化工具的应用,系统地分析中国2000—2020年的学术成果,从中发现学术研究的热点问题和前沿方向,对于梳理中国学术的发展脉络、理清存在的问题与挑战具有一定现实意义。结果表明:近20年间,我国学术研究成果丰富,研究成果数量总体上呈递增趋势,2018年的研究成果数量呈现激增态势,学术文章的主题受国家政策和经济社会发展需求驱动显著,文章更侧重于基础科学研究。

北京市集贸市场生鲜猪肉肠球菌的耐药特征分析

目的了解北京市某大型集贸市场内部环境样品和零售生鲜猪肉中分离肠球菌的耐药性特征。方法采用肉汤稀释法测定86株肠球菌对10种临床常用抗生素的药物敏感性。结果 86株肠球菌对四环素、红霉素、高浓度链霉素、环丙沙星、高浓度庆大霉素和氯霉素的耐药率分别为67.44%(58/86)、54.65%(47/86)、38.37%(33/86)、26.74%(23/86)、23.26%(20/86)和20.93%(18/86),耐3种以上抗生素的多重耐药肠球菌有30株,占34.88%,耐药谱共有22种。所有肠球菌对氨苄西林、青霉素和万古霉素均敏感。耐药谱型分析发现,不同样品来源肠球菌的耐药谱差异较大。另外,本研究从国内食品中分离到对达托霉素耐药的肠球菌,此前我国未见相关报道。结论北京市集贸市场内部环境和零售生鲜猪肉中分离的肠球菌耐药严重,并呈现一定的耐药谱型差异,而且分离到达托霉素耐药株,应引起关注。

北京市集贸市场生鲜猪肉肠球菌种水平鉴定及耐药特征

目的评价和比较不同肠球菌种水平鉴定方法的准确性,了解北京市集贸市场生鲜猪肉肠球菌的种水平分布及耐药特征。方法利用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)和VITEK 2 COMPACT两种方法对北京市集贸市场生鲜猪肉肠球菌开展种水平鉴定,两种方法鉴定结果不一致的菌株使用API 20 Strep、16S rRNA和23S rRNA序列分析再次鉴定。比较不同种肠球菌对10种临床常用抗生素的药物敏感性。结果在5种肠球菌种水平鉴定方法中,16S rRNA序列分析和最终结果的符合率最高,为100.0%;VITEK 2 COMPACT符合率最低,仅为4.0%(1/25)。在86株肠球菌中,粪肠球菌占82.6%(71/86),其次为希拉肠球菌占14.0%(12/86)。粪肠球菌对环丙沙星(CIP)的耐药率高于希拉肠球菌,差异有统计学意义(χ~2=10.751,P<0.01);对四环素(TET)、高浓度链霉素(HLSR)和高浓度庆大霉素(HLGR)的耐药率均高于希拉肠球菌,但差异无统计学意义(TET:χ~2=3.865,P>0.05;HLSR:χ~2=1.608,P>0.05;HLGR:χ~2=0.553,P>0.05),但对红霉素(ERY)和氯霉素(CHL)的耐药率明显低于希拉肠球菌,差异有统计学意义(ERY:χ~2=20.244,P<0.01;CHL:χ~2=14.139,P<0.01)。结论 16S rRNA和MALDI-TOF-MS序列分析技术在肠球菌种水平快速鉴定上有较高准确性,不同种属肠球菌呈现不同耐药特征,本研究为有效监测食源性耐药肠球菌的传播和流行提供了科学数据。

猪防御素的研究进展及其在饲料中的应用

防御素是一类富合半胱氨酸的阳离子活性多肽,是动物先天性免疫防御系统的重要组成部分,防御素在动物组织细胞中广泛表达,是宿主抵抗外界病原微生物入侵的第一道防线。防御素具有的抗菌谱广、抗菌机制特殊、不易产生耐药性、残留低、对动物自身正常细胞没有伤害等特点,使防御素成为替代抗生素的最佳候选之一,未来将在畜禽生产中具有广阔的应用前景。本文主要对猪防御素基因的特点及其在动物组织中的表达谱、防御素在猪体内的表达调控特性、基因工程菌以及防御素在饲料业中的应用等方面进行阐述。

抗菌肽在断奶仔猪生产中的应用效果研究进展

抗菌肽是由宿主先天性免疫防御系统产生的一类可抵抗外界病原体感染的小分子阳离子多肽。抗菌肽具有抗菌谱广、对多重耐药菌有良好杀伤作用、热稳定性和水溶性好、对哺乳动物正常细胞几乎无毒害作用等特点,因此在畜牧业中有望替代抗生素成为新一代抗菌添加剂。本文主要就抗菌肽在提高断奶仔猪生长性能、减少腹泻、改善肠道平衡以及促进机体免疫功能等方面的作用进行了阐述。

我国熟制坚果与籽类食品中霉菌及其毒素污染状况研究

目的调查我国熟制坚果与籽类食品中霉菌及其毒素污染状况,掌握该类食品中霉菌及真菌毒素污染风险的关联性。方法通过采集市售商品,检测霉菌及其毒素,采用内转录间区(ITS)测序法对样品中污染的霉菌进行属鉴定。结果19.32%(560/2912)的熟制坚果与籽类食品霉菌计数>25 CFU/g。单一、混合坚果超过该限值的比例分别为14.78%(322/2178)和32.56%(239/734),差异有统计学意义(P<0.05)。单一坚果中核桃超过该限值的比例最高,为24.10%(47/195),杏仁、巴达木和花生分别为17.44%(15/86)、16.81%(20/119)和16.22%(73/450),其余种类均在15%以下。对26份霉菌计数>25 CFU/g的样品进行真菌毒素检测,1份采自云南的花生检出白僵菌素污染量为16.37μg/kg。ITS扩增子测序发现熟制坚果与籽类食品中主要污染曲霉属、交链孢霉属、念珠菌属等,和真菌毒素检出有相关性。结论熟制坚果与籽类食品中霉菌污染较高,检出的霉菌属有产真菌毒素的风险,提示应加强该类食品中污染霉菌的监测、种属鉴定及产毒情况研究,掌握其污染途径和产毒规律,为开展风险评估,采取有效防控措施提供科学依据。

春天的聚会

春天来了,天气也渐渐暖和了,万物复苏,百花齐放。野外,一场春天的聚会正在举行。柳树长出了嫩芽;路边五颜六色的小花花瓣徐徐张开;嫩绿的小草迫不及待地从泥土里钻出来,像是给大地穿上了一件绿色的衣裳。活泼机灵的小燕子从南方赶回来了,嘴里不停地念着:“春天真的太美丽了!”

鼠伤寒沙门菌婴幼儿分离株耐药基因及毒力基因研究

目的基于全基因组测序结果,分析鼠伤寒沙门菌耐药表型和耐药基因的关系,研究其耐药发生机制和毒力因子。方法利用美国临床和实验室标准委员会(CLSI)推荐的微量肉汤稀释法对5岁以下腹泻患儿粪便中分离的321株鼠伤寒沙门菌开展药物敏感性试验,从中选择不同耐药表型的3株鼠伤寒沙门菌(S1:敏感;S2:TET耐药;S3:ESBLs阳性,10重耐药)进行全基因组测序,通过与抗生素抗性基因数据库(ARDB)和病原毒力因子数据库(VFDB)比对以及美国国立生物技术信息中心(NCBI)核酸数据库人工检索,对耐药基因和毒力基因进行注释。结果 321株鼠伤寒沙门菌对IPM和MEM均敏感,对TET和AMP的耐药率最高,分别为84.4%(271/321)和83.8%(269/321),206株菌株显示为耐3类以上抗生素(64.2%,206/321),11株CIP-CTX耐药株均为ESBLs阳性(3.4%,11/321);全基因组测序结果显示,S1、S2和S3的全基因组大小依次为4 876 427、4 970 690、5 133 380 bp,预测编码基因数分别为4 825、4 936和5 082个,GC含量依次为52.18%、52.14%、51.87%;对S1、S2和S3基因组中18、20和32个耐药基因进行注释,除共有基因外,S2主要携带tet A和sul2基因,S3主要携带sul1/2/3、tetB、AAC(3)-IV、AAC(6')-I、ANT(2″)-I、ANT(3″)-I、aph A1、bla_(CTX-M-14)、bla_(OXA-1)、catB3、cml_e1和cml_e3基因。与阳性鼠伤寒沙门菌株LT2的gyr A基因进行序列比对发现,S3 gyr A基因第87位密码子由GAC突变为AAC(Asp87→Asn);分别注释S1、S2和S3基因组的130、129和120个毒力基因,发现主要以三型分泌系统和粘附因子为主。结论 5岁以下腹泻患儿粪便样品中鼠伤寒沙门菌耐药现象严重;全基因组测序分析发现耐药基因与耐药表型一致,且存在多种毒力因子;为后续开展耐药基因传播机制和菌株致病性研究,评估其对人群的健康风险,防控鼠伤寒沙门菌感染提供技术支持。

坚果及籽类食品中霉菌与真菌毒素防控技术研究进展

坚果及籽类食品富含蛋白质、脂肪酸等多种营养素,深受消费者喜爱。然而这类食品易被霉菌及其产生的真菌毒素污染,危害人体健康。本文综述了国内外坚果及籽类食品中霉菌与真菌毒素防控技术的研究进展,旨在为坚果及籽类食品的安全生产和有效监管提供科学依据。

现制饮料中微生物污染及其防控措施研究

鲜榨果蔬汁、现磨咖啡、新式茶饮等现制饮料深受消费者的喜爱,然而由于原材料品质把控不严、加工过程操作不规范等,导致现制饮料存在微生物污染的风险。本文综述了我国现制饮料中微生物污染状况及行业监管现状,分析了现制饮料在加工过程中微生物污染的原因,找出关键控制点并提出干预措施,为促进我国现制饮料行业的健康发展提出了建议。

2020年我国20个省份禽肉来源弯曲菌的耐药性及基因组特征分析

目的分析2020年我国20个省份禽肉来源弯曲菌的耐药性及基因组特征。方法收集2020年来自全国零售禽肉制品中的弯曲菌265株(空肠弯曲菌:244株;结肠弯曲菌:21株),采用琼脂稀释法测定菌株对9种抗生素的耐药表型;对筛选出的38株耐药菌进一步开展全基因组测序,分析其携带耐药基因、毒力基因、序列型和遗传多样性特征。结果265株弯曲菌对四环素、萘啶酸和环丙沙星的耐药率最高(84%~100%),多重耐药率达53.2%;其中结肠弯曲菌对红霉素、阿奇霉素、泰利霉素、庆大霉素、克林霉素的耐药率高于空肠弯曲菌(均P<0.05)。38株弯曲菌基因组中β-内酰胺类(100%,38/38)、喹诺酮类(94.7%,36/38)、四环素类(81.6%,31/38)和氨基糖苷类(50%,19/38)抗生素耐药基因携带率较高;空肠弯曲菌携带毒力基因种类和数量要明显多于结肠弯曲菌;20株测序空肠弯曲菌共获得19个序列型,18株测序结肠弯曲菌共获得17个序列型,共发现5个新的序列型,菌株表现出较高的遗传多样性。结论我国禽肉来源弯曲菌耐药现象较为严重,耐药和毒力基因在弯曲菌中分布广泛,弯曲菌存在遗传多样性。