IGF2基因印记丢失对胚胎干细胞向胰岛样细胞诱导分化的影响

背景:IGF2是一种重要的胚胎有丝分裂生长促进因子,在维持细胞正常生长过程中起关键作用,其基因表达以基因组印迹方式受表观遗传调控。当IGF2发生印迹丢失时,与个体的非正常发育以及肿瘤发生存在一些联系。目的:探讨IGF2基因发生印记丢失对小鼠胚胎干细胞定向诱导分化为胰岛样细胞的影响。方法:体外诱导2种小鼠胚胎干细胞(SF1-G和SF1-1)向胰岛样细胞分化;Real-Time PCR和细胞免疫荧光检测Insulin基因的表达;聚合酶链式反应-限制性内切酶片段长度多态性(PCR-RFLP)检测印迹基因IGF2在诱导分化前后细胞中的亲本表达;体外胰岛素释放实验检测诱导终末细胞的胰岛素释放水平。结果与结论:(1)IGF2基因印记正常(SF1-G)和印记丢失(SF1-1)的2种小鼠胚胎干细胞在诱导分化前后印迹状态没有发生改变;(2)在诱导的终末细胞中,尽管2种细胞的胰岛素释放水平差异无显著性意义,但是Insulin基因在SF1-1组中的表达水平要高于其在SF1-G组的表达水平;(3)IGF2基因印记丢失可能与诱导分化来源的终末细胞中Insulin基因的表达上调相关。

siRNA沉默ECT2对人SW1990胰腺癌细胞中时钟基因PER表达的影响

目的研究小RNA干扰上皮细胞转化序列2癌基因(ECT2)对于人SW1990胰腺癌细胞中时钟基因PER1、PER2表达的影响。方法采用高糖培养基培养胰腺癌细胞并采用siRNA-ECT2沉默ECT2表达,在干预24、48、72、96 h后采用CCK-8法检测其增殖能力变化,流式细胞术检测各组细胞凋亡率的改变,荧光定量PCR法检测时钟基因PER1、PER2表达的变化。结果siRNA-ECT2沉默ECT2表达后,SW1990胰腺癌细胞抑制率和凋亡率均有不同程度增加,差异有统计学意义(P<0.05),时钟基因PER1、PER2表达显著上调(P<0.05)。结论沉默ECT2可能通过调控肿瘤细胞时钟基因PER1、PER2的表达水平来抑制人SW1990胰腺癌细胞的增殖能力,诱导其凋亡。

二甲双胍对人胚肾HEK293T细胞增殖、凋亡和Cyclin D1表达的影响

目的研究二甲双胍对人胚肾细胞系HEK293T增殖的抑制和诱导凋亡的作用,并初步探讨其可能的机制。方法采用0mmol/L、5mmol/L、10mmol/L、20mmol/L二甲双胍浓度梯度处理HEK293T细胞,各组分别处理24、48、72h后,通过MTT实验分析细胞增殖变化;在二甲双胍浓度梯度处理48h后,利用Annexin V-FITC/PI染色检测细胞凋亡;采用实时定量PCR检测Cyclin D1基因mRNA的表达变化。结果二甲双胍处理后,所有处理组在24、48、72h的细胞存活率均显著下降(P<0.05),但并未发现有时间依赖和浓度依赖效应;经流式细胞仪检测,二甲双胍干预48h之后,5mmol/L、10mmol/L和20mmol/L浓度处理组HEK293T细胞凋亡率均明显高于对照组(P<0.05);0mmol/L、5mmol/L、10mmol/L、20mmol/L二甲双胍分别处理HEK293T细胞48h后,实时定量PCR结果显示,10mmol/L和20mmol/L处理组的CyclinD1表达量出现明显降低(P<0.05),但5mmol/L处理组未发现有明显变化(P>0.05)。结论二甲双胍对HEK293T细胞增殖有明显抑制作用,而对HEK293T细胞凋亡有明显的促进作用,这可能是通过抑制细胞内CyclinD1表达来实现的。

植物源性碱性成纤维细胞生长因子维持人胚胎干细胞的生长与分化

背景:碱性成纤维细胞生长因子是维持人胚胎干细胞长期培养的重要生长因子,提供来源可靠、无动物源性以及低成本的碱性成纤维细胞生长因子产品对维持人胚胎干细胞生长以及规模化制备至关重要。目的:为了排除动物源性或者其他细菌类的潜在干扰,该研究评估植物源性碱性成纤维细胞生长因子对人胚胎干细胞生长与分化的影响。方法:以人胚胎干细胞系(H9)作为研究材料,采用免疫荧光染色、流式细胞仪检测、碱性磷酸酶染色、RT-PCR方法比较不同质量浓度植物源性碱性成纤维细胞生长因子维持干细胞特性的能力以及其向外、中、内三胚层分化和胰腺细胞分化的潜能。结果与结论:植物源性碱性成纤维细胞生长因子(4μg/L和0.4μg/L)和常规碱性成纤维细胞生长因子(4μg/L)都能很好地维持人胚胎干细胞的生长和分化能力,提示植物源性碱性成纤维细胞生长因子可以作为有效支持人胚胎干细胞生长和分化的备选产品。