基于生物信息学分析类风湿关节炎铜死亡相关基因及中药筛选预测

目的 利用生物信息学研究类风湿关节炎(Rheumatoid arthritis, RA)铜死亡相关分子模式和诊断性生物标志物,同时预测具有潜在治疗作用的中药。方法 从基因表达综合数据库中下载GSE55235、GSE55457、GSE77298表达谱数据作为训练数据集,提取铜死亡相关基因进行分析。选择RA患者和健康对照组之间差异表达的铜死亡相关基因(Differentially expressed cuproptosis-associated gene, DECAG),分析DECAG相关的免疫浸润、生物学功能。根据DECAG的表达量对RA患者进行共识聚类分型,基于分型进行加权基因共表达网络分析(Weighted gene co-expression network analysis, WGCNA)来识别核心基因。取degree值前100的核心基因做GO和KEGG富集分析并构建训练模型,训练模型包括随机森林模型(Random forest, RF)和支持向量机模型(Support vector machine, SVM)、极端梯度提升(eXtreme gradient boosting, XGB)模型和广义线性模型(Generalized linear model, GLM),筛选与RA特征最相关的5个基因作为诊断性生物标志物并进行验证。最后进行中药预测。结果 获得6个DECAG(NLRP3、SLC31A1、LIAS、CDKN2A、DBT、DLST)。使用共识聚类方法将RA基因分为两个亚型(C1,C2),分型WGCNA获得核心基因418个。取degree值前100的核心基因构建训练模型,基于对|残差|的反向累积分布图和|残差|的箱线图的分析,发现SVM模型与其他3种模型相比,SVM模型维持最低的|残差|分布。总体受试者工作特征曲线(Receiver operating characteristic curve, ROC)结果显示,SVM模型比其他3个模型具有更高的网络曲线下面积(Area under the curve, AUC)值(AUC:0.966)。综合考虑,SVM模型为最合适的训练模型。获得5个与RA特征最相关的基因(TMOD3、PIK3CG、WASL、FGF4、GSN),基于5个RA特征基因的表达水平,建立了临床应用列线图,并且决策曲线分析(Decision curve analysis, DCA)图和校正曲线图也显示结果具有良好的预测准确度。中药预测结果显示郁金、莪术、红花最有可能具有治疗RA的作用。结论 铜死亡在RA的发生和诊断中起重要作用。

基于网络药理学和分子对接探究黄芪桂枝五物汤干预紫杉醇诱导周围神经毒性的作用机制

目的使用网络药理学的方法探究黄芪桂枝五物汤干预紫杉醇诱导的周围神经毒性的机制。方法通过中药系统药理学数据库和分析平台(Traditional Chinese medicine systems pharmacology database and analysis platform,TCMSP)获得黄芪桂枝五物汤的有效活性成分及其作用靶点,汇总DrugBank数据库、OMIM(Online Mendelian Inheritance in Man,OMIM)数据库、PharmGkb(PharmacogenomicsKnowledgebase,PharmGkb)数据库、TTD(Therapeutic Target Database,TTD)数据库、GeneCards数据库中有关紫杉醇诱导周围神经毒性的相关疾病靶点,Cytoscape 3.7.2用于构建复方有效成分—靶点网络,将作用靶点导入String数据库构建PPI(Protein-protein interaction,PPI)蛋白互作网络,再通过DAVID(Database for Annotation,Visualization and Integrated Discovery,DAVID)数据库进行GO、KEGG富集,最后进行分子对接验证。结果获得了黄芪桂枝五物汤中有效活性成分74个,干预神经毒性的潜在靶点76个,复方有效活性成分—作用靶点网络显示槲皮素、豆甾醇、β-谷甾醇等与靶点具有较多的对应关系,TP53、AK1、JUN是蛋白互作网络中degree值较高的蛋白,GO富集与KEGG富集显示细胞对氧化应激的反应、膜筏、结合DNA转录因子、铂耐药是复方干预神经毒性的主要途径。PPI中关键靶点蛋白与活性成分的分子对接结果良好。结论初步研究了黄芪桂枝五物汤干预紫杉醇周围神经毒性的作用机制,探明了黄芪桂枝五物汤可以通过多个靶点、多条通路来发挥干预紫杉醇周围神经毒性的作用。

桂郁金提取物对人肝星状细胞增殖、细胞周期及凋亡影响的研究

目的观察桂郁金提取物对人肝星状细胞的作用,了解其对该细胞的增殖、细胞周期和凋亡情况的影响。方法将人肝星状细胞株(HSC-LX2)与药物孵育48 h后,用MTT比色法测定细胞的增殖抑制率。用流式细胞术(PI染色法)检测各周期细胞的DNA含量及细胞凋亡的概况。结果低、中、高浓度桂郁金提取物均可抑制HSC-LX2细胞的增殖,48h的增值抑制率分别为15.4%、49.1%、58.3%;48 h的IC50为45μmol/L;均可阻止HSC-LX2细胞进入DNA合成增殖周期,并诱导HSC-LX2细胞发生早期及晚期凋亡,48 h的S期+G2/M期细胞总数百分比分别为70.1%、63.6%、50.2%;凋亡概率分别为13.9%、18.9%、23.5%。结论桂郁金提取物具有抑制HSC-LX2细胞增殖、阻止细胞进入DNA合成增殖周期、诱导细胞发生凋亡的能力,从而可以干预肝纤维化病程;以上能力均具有剂量依赖性;且中、高剂量桂郁金提取物组以上能力明显比秋水仙碱组和复方鳖甲软肝片组强。

桂郁金提取物对人肝星状细胞增殖、凋亡影响的研究

目的:观察桂郁金提取物对人肝星状细胞的作用,了解其对该细胞的增殖和凋亡的影响。方法:将人肝星状细胞株(HSC-LX2)与药物孵育48h后,用MTT比色法测定细胞的增殖抑制率。用流式细胞术(ANNEXIN V-PE/7-AAD双染色法)检测细胞凋亡各阶段的情况。结果:低、中、高浓度桂郁金提取物均可抑制HSC-LX2细胞的增殖,48h的增值抑制率分别为15.4%、49.1%、58.3%;48h的IC50为45μmol/L;均可诱导细胞发生早期及晚期凋亡,48h的总凋亡细胞百分比分别为20.7%、29.8%、34.4%。结论:桂郁金提取物具有抑制HSC-LX2细胞增殖、诱导细胞发生凋亡的能力,从而可以干预肝纤维化病程;以上能力均具有剂量依赖性;且中、高剂量桂郁金提取物组以上能力明显比秋水仙碱组和复方鳖甲软肝片组强。

肝纤维化血瘀证研究及动物模型构建的思考

血瘀证是大部分肝纤维化疾病的基本病理改变、是其本质之一,可从血瘀证的角度出发研究肝纤维化的形成和逆转机制。要进行中西医结合的肝纤维化血瘀证研究,应在中医血瘀证的理论的指导下,改良造模方法构建新型的血瘀型肝纤维化动物模型。该模型应在复制人类肝纤维化疾病的同时,具有血瘀证的病变特点和病机特色。

洞悉大变局下多边贸易体制新机遇

多边贸易体系是全球贸易的基石,中国是多边贸易体制和经济全球化的坚定支持者。9月2日,国家主席习近平在北京向2023年中国国际服务贸易交易会全球服务贸易峰会发表视频致辞时强调,要共同维护来之不易的自由贸易和多边贸易体制。长期以来,WTO框架下多边经贸规则谈判一直面临合法性有余而成效性不足的困境。面对这一难题,2016年G20杭州峰会达成《全球投资指导原则》,中国在WTO内部推动投资便利化议题,将其纳入多边贸易体制。经过近3年的密集磋商,2023年7月6日,世贸组织投资便利化谈判召开大使级会议,宣布成功结束文本谈判并散发协定文本。《投资便利化协定》是中国在世贸组织框架中主动设置、积极引领的首个谈判议题,是中国积极参与全球治理体系改革和建设的重要国际成果之一。

细胞培养实验中一些细节问题的探讨

在细胞培养实验中,血清的处理和细胞的冻存这两方面的问题,是较为复杂也是比较容易出错的。而血清处理和细胞冻存过程中的技术细节若处理不当,会对细胞培养的效果产生较明显的影响。就理论学习及实验操作中获得的经验,对血清的保存、解冻、沉淀物和热灭活的问题,及细胞冻存的方法和注意事项等细节问题作一总结。

复合多因素法对血瘀型肝纤维化大鼠模型的建立和评价

目的:本研究在中医学辨证思维指导下,根据血瘀证理论探索和改良造模方法,采用多因素复合法建立血瘀型肝纤维化病证结合大鼠模型。方法:通过二甲基亚硝胺、小牛血清白蛋白和去甲肾上腺素注射液联合注射,外加乙醇灌胃及高脂低蛋白饲料喂养,多因素联合构建血瘀型肝纤维化大鼠模型。造模结束观察大鼠的死亡率,评价中医血瘀证证候,进行证候等级评分,观察肝脏病理学大体形态,检测肝功能改变,采用免疫组化法观察Ⅰ型和Ⅲ型胶原、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)3种胶原蛋白的表达情况、放射酶免法血清学检测大鼠肝纤维化4项——HA、P3NP、LN、CⅣ的含量。将以上结果与传统四氯化碳(CCl4)单因素造模法进行比较。结果:血瘀证组:①大鼠的死亡率为20%;②大鼠出现瘀斑、舌紫暗、便溏等典型的中医血瘀证证候,血瘀证证候等级评分高;③病理学大体形态观察发现肝脏出现表面暗白、密布灰白结节、质硬脆等纤维样变化;④血清学肝功能检测发现模型大鼠的ALT和AST,以及TBIL、DBIL及IBIL的含量均显著增加;⑤肝脏Ⅰ型和Ⅲ型胶原、α-SMA 3种胶原蛋白的表达水平显著增高;⑥大鼠的血清肝纤维化4项——HA、P3NP、LN、CⅣ的含量均显著增加。与CCl4模型组相比,多因素复合法所致血瘀证模型组以上各项结果(除了死亡率及肝功能外)更为明显,结果有统计学差异(P<0.05)。结论:多因素复合造模方法能有效地改善CCl4造模法的高死亡率缺点;模型动物同时具备了疾病与证候双重特征,既符合中医血瘀证证候的基本特点,又与西医肝纤维化病理特征相一致。

中医病证结合肝纤维化动物模型的研究概况

目前研究者制作的肝纤维化动物模型往往使用单一因素造模,模型虽然具备肝纤维化病理变化,却无气滞、气虚、肝郁、痰湿、血瘀等重要的中医证的特征.本文在总结了肝纤维化动物模型与病证结合动物模型研究概况后,评述了几种在中医病因学理论的指导下,运用复合多因素的造模方法建立的新型的病证结合疾病动物模型.这类肝纤维化模型动物同时具备疾病与证候双重特征,既复制出了符合中医证的基本特点,又与西医肝纤维化病理特征相一致.从而更准确地模拟了临床疾病与证候形成的病理机制及病变过程,为中西医结合研究肝纤维化疾病提供了新的研究平台及途径.

中美贸易战中的安全例外问题

中美贸易战涉及美国201调查、301调查和232调查在《马拉喀什建立世界贸易组织协定》(简称《WTO协定》)下的合法性问题。随着贸易战的深入,相关法律争议越来越集中在美国可否成功援引GATT第21条项下的安全例外条款。长期以来,专家组对安全事项是否享有管辖权以及应采取何种标准审查安全例外等问题一直困扰着理论界和实务界。与欧盟、加拿大等WTO成员不同,中国并未积极利用GATT第21条质疑美国贸易措施的合法性。这不仅是因为国家安全涉及主权核心利益,WTO争端解决机构本不适于解决此类纠纷,也是因为强行在WTO体制内解决国家安全事项反而可能最终削减WTO的权威。当前,通过谈判磋商机制解决WTO成员国家安全关切仍是最佳选择。

美国证券法域外管辖的最新发展及其启示

2010年,美国联邦最高法院在Morrison案中颠覆了由第二巡回法院创立的域外适用证券法的传统,转而采用"交易标准"。此后不久,国会在《华尔街改革和消费者保护法》中又重新引入了"效果标准"和"行为标准",期望以此强化对境内投资者和资本市场的保护。为建立国际金融中心,中国应汲取美国的经验和教训,有限度地推行本国证券法的域外管辖,特别是应模糊证券法的域外管辖问题,将自主权赋予法院。同时,法院应充分考虑和尊重证监会的相关决定。

国际投资中的间接征收及其认定

国际投资中的间接征收认定向来是理论难点,并直接影响到投资者和东道国的切身利益。传统的理论模式从分析经济利益着手来确定间接征收的构成要件,均存在难以弥补的缺陷。从补偿的功能出发来界定间接征收在理论上不失为一个良好的替代方案,而且也具有很强的可操作性。但是,以补偿为中心的分析思路将赋予裁判者以较大的自由裁量权,为此,有必要对间接征收进行类型化限制。

肝窦内皮细胞分离、培养与鉴定的研究概况

肝窦内皮细胞(liver sinusoidal endothelial cells,LSEC)在肝脏的生理功能和病理机制的发生中扮演重要的角色,成为近年来肝脏研究的热点.本文通过总结并综述近年来LSEC的分离、培养与鉴定的最新技术和方法,重点探讨在该细胞分离、培养与鉴定过程中遇到的研究热点,这对观察和研究LSEC在肝脏生理功能和病理机制中的作用,及基于该细胞的开发研究具有重要的意义,并为研究者提供借鉴.

中美贸易战的美国法根源与中国的应对

中美贸易战有其国际法框架效应,主要体现在中美双方会优先依据WTO协定证成本国贸易措施符合国际法,同时指责对方措施欠缺国际法依据。随着WTO体制被边缘化,中美贸易战的美国国内法根源问题开始凸显。长期以来,美国基于嵌入式自由主义理念分配贸易规制权,由行政主导贸易自由化进程,由立法主导国内调整援助政策。受国内法律和政治因素所限,美国总统行为与国会立法相互脱节,贸易自由化常与国内社会稳定政策脱钩。美国政府转而基于新嵌入式自由主义、新重商主义等理念,试图将国内矛盾转嫁给贸易伙伴。随着拜登政府重拾国际多边主义,我国当前应未雨绸缪,以考虑加入CPTPP协定为契机,从增强贸易多边体制包容性的角度,认真对待相关条款,判断其可接受程度,寻求与美国政府达成共识,减少未来中美贸易摩擦中美国法根源的负外部性。

白花丹醌对HSEC细胞的肝窦毛细血管化现象干预作用研究

目的:观察白花丹醌对HSEC细胞的微观结构及分泌功能的影响,探究其抗肝纤维化药理作用的机制。方法:大鼠HSEC细胞以高、中、低浓度白花丹醌干预后,扫描电镜、透射电镜观察HSEC细胞的窗孔及基底膜的情况;RT-PCR、ELISA检测HSEC细胞COLⅣ和LN的表达水平。结果:白花丹醌能使HSEC细胞的窗孔发生增多和扩大,使细胞外基底膜变薄及范围减小,降低肝窦内皮毛细血管化的程度;并能明显降低HSEC细胞的COL Ⅳ、LN含量及mRNA表达;且其作用呈剂量依赖性。结论:白花丹醌能明显降低肝窦内皮毛细血管化程度及HSEC细胞分泌的基底膜胶原成分COL Ⅳ、LN的表达。这可能是该药干预肝纤维化作用的靶位点。

外资并购国家安全审查中的权限配置问题:中美之间的差异及启示

从依附于产业政策和竞争政策,到发展成为一项独立的制度,中国国家安全审查制度的演化与审批权限配置的变更息息相关,具有明显的"路径依赖"特征。与美国的制度相比,现有的国家安全审查制度在政治性、专业性和合法性方面存有很大的改进空间。应将国家安全审查行为排除在法院的受案范围之外,改进部际联席会议机制,由决策者承担相应责任。此外,还应建立政治问责制,以避免内部人控制。

众筹监管论

众筹为网络时代金融创新之一种。借助众筹门户,资金接收者和资金提供者得以完成项目资金配对,既便利了小型企业的资本筹集,又有利于中小投资者实现投资多样化。在既有的法律框架下,众筹或被归类为证券或被归类为集资,并因此而受到严格管制。为鼓励社会资本流向小型企业,应就众筹设立豁免制度,从而在便利资本筹集与保护投资者之间寻求平衡。

白花丹醌对人肝星状细胞的增殖抑制、凋亡及细胞外基质分泌功能的影响

目的:研究白花丹醌对人肝星状细胞株(HSC-LX2)的作用,观察该药对细胞的增殖抑制率、细胞凋亡、分泌细胞外基质和金属蛋白酶功能的影响。方法:HSC-LX2与药物孵育48 h,以MTT法检测细胞增殖抑制率;以流式细胞术检测细胞凋亡情况;免疫组化法观察Ⅰ型、Ⅲ型胶原蛋白,MMP-1和MMP-13表达的部位和面积。结果:白花丹醌低、中、高浓度均可抑制HSC-LX2细胞增殖,诱导细胞发生凋亡,降低Ⅰ型和Ⅲ型胶原分泌水平,并增加其分泌MMP-1及MMP-13的能力。以上作用具有剂量依赖性,有统计学差异(P<0.05);中、高剂量组上述的作用比秋水仙碱强。结论:白花丹醌具有抑制HSC-LX2细胞增殖、诱导细胞发生凋亡、降低细胞外基质的分泌,并增加纤维蛋白降解酶分泌水平的能力,而对肝纤维化进程有干预作用;上述能力均有剂量依赖性;且中、高剂量组的干预能力强于秋水仙碱。

人胚胎肝细胞体外培养相关技术研究进展

肝脏是人体代谢、生物转化的重要器官。肝脏疾病临床、药物代谢以及药效药性评价等医药研究都需要一个肝脏的体外模型作为研究平台。目前国内外研究认为,人胚胎肝细胞是构建肝脏体外研究模型的较理想材料。随着肝脏临床及基础研究的日益深入,对胚胎肝细胞体外模型的数量和质量的要求将越来越高。主要对人胚胎肝细胞的分离、培养、鉴定及冻存技术的研究进展进行综述。

美国证券法域外管辖的最新发展及其启示

2010年,美国联邦最高法院在Morrison案中颠覆了由第二巡回法院创立的域外适用证券法的传统,转而采用"交易标准"。此后不久,国会在《华尔街改革和消费者保护法》中又重新引入了"效果标准"和"行为标准",期望以此强化对境内投资者和资本市场的保护。为建立国际金融中心,中国应汲取美国的经验和教训,有限度地推行本国证券法的域外管辖,特别是应模糊证券法的域外管辖问题,将自主权赋予法院。同时,法院应充分考虑和尊重证监会的相关决定。