自噬的抑制影响长春新碱诱导的肝癌细胞自噬性凋亡

目的 研究自噬特异性抑制剂 3 甲基腺嘌呤 (3 methyladenine ,3MA)对长春新碱 (vincristine,VCR)诱导的肝癌细胞系HepG2细胞自噬性凋亡的影响。 方法 利用已建立的VCR诱导HepG2细胞自噬性凋亡之模型 ,采用monodansylcadaverin(MDC)染色及流式细胞术荧光强度测定方法对自噬进行定量研究 ,采用流式细胞术及DNA电泳检测细胞凋亡。结果 3MA可以特异性地阻止自噬泡形成 ,还可以部分地抑制HepG2细胞自噬性凋亡。 结论 自噬是VCR诱导的HepG2细胞自噬性凋亡所必需的。

长春新碱诱导的自噬性细胞凋亡对线粒体膜电位的影响

目的:了解长春新碱（VCR）诱导的自噬性细胞凋亡是否与线粒体跨膜电位（△Ψm）改变有关及其可能的机制。材料与方法:以正常人的肝细胞系为体外模型,应用碘化丙啶（PI）/Rhodamine123（Rh123）双重染色检测△Ψm,通过亚G1期细胞和透射电镜鉴定细胞凋亡。结果与结论:VCR可明显诱导线粒体△Ψm下降,也可以诱导L-02细胞自噬性凋亡。线粒体△Ψm下降可能是VCR诱导自噬性细胞凋亡的关键环节。

平阳霉素诱导人食管癌细胞EC8712凋亡的研究

】目的 :以平阳霉素诱导食管癌细胞凋亡 ,并探索药物浓度与诱导凋亡之间的关系。材料与方法 :应用电镜、DNA电泳、TUNEL、荧光显微镜、激光共聚焦扫描显微镜等手段 ,观察食管癌细胞在不同浓度平阳霉素作用不同时间后的变化特征及诱导凋亡之作用。结果 :细胞形态学及DNA水平的变化均证实靶细胞发生了凋亡 ,但较大浓度较长时间的平阳霉素作用可致其坏死 ;平阳霉素对EC8712凋亡的诱导效率呈浓度、时间依赖性增强。结论 :一定浓度平阳霉素作用一定的时间可以诱导食管癌细胞株EC8712发生凋亡。诱导癌细胞凋亡可能是平阳霉素化疗作用的重要机制。临床化疗时可根据量效关系合理用药以诱导肿瘤细胞达到最大的凋亡率 ,而又不致其坏死。

食管癌癌变过程中的细胞凋亡及其与细胞增殖的关系

目的定量检测食管癌癌变过程中细胞凋亡及细胞增殖状况、井分析两者在食管癌癌变过程中的相关性及生物学意义。材料与方法食管癌标本７１例，分别作病理组织学诊断、ＴＵＮＥＬ检测凋亡、免疫组化检测Ｋｉ－６７的表达以观察细胞增殖状况。结果食管癌癌变过程中细胞增殖指数及细胞凋亡指数均逐渐升高．两者呈正相关；在食管浸润癌中，随着癌分化程度的降低，细胞增殖指数继续增高，而细胞凋亡指数逐渐降低，两者呈负相关。结论细胞凋亡贯穿了食管癌发生发展全过程，在食管癌癌变过程中，细胞凋亡与细胞增殖密切相关。

长春新碱诱导的自噬性凋亡与细胞内游离Ca^(2+)浓度的相关性研究

目的 研究长春新碱 (VCR)诱导的L 0 2细胞自噬性凋亡时细胞内游离钙离子浓度 ([Ca2 +]i)的变化 ,以及自噬特异性抑制剂 3 methyladenine(3MA)对此自噬性凋亡和 [Ca2 +]i的影响。方法 应用已建立的VCR诱导L 0 2细胞自噬性凋亡模型 ,使用电镜、流式细胞术检测细胞凋亡 ;用Fluo 3/AM荧光探针经流式细胞仪测定L 0 2细胞平均 [Ca2 +]i。结果 电镜及流式细胞术检测证实VCR诱导L 0 2细胞发生了自噬性凋亡 ,此凋亡过程中 [Ca2 +]i明显升高 ,以凋亡早期更为明显 :3MA可显著抑制VCR所致的 [Ca2 +]i升高并能降低凋亡细胞比例。结论 在体外条件下VCR可以诱导L 0 2细胞自噬性凋亡 ,其发生可能与VCR导致 [Ca2 +]i升高有关 ;3MA可能通过抑制 [Ca2 +]i升高而抑制自噬及VCR所致的自噬性凋亡。

线粒体通透性转变与细胞自噬、凋亡的关系

较早的关于细胞凋亡方面的研究曾认为凋亡的许多特征主要与细胞核变化有关,而线粒体等胞浆结构在凋亡早期并不受影响.但是,现在越来越多的资料证实线粒体的一些变化除了与细胞自噬有关以外,还在细胞凋亡过程中起着重要的作用.

泛肽通路与细胞凋亡

泛肽通路的成分包括泛肽、泛肽激活酶、泛肽交联酶、泛肽连接酶和 proteasome复合体等。泛肽通路是真核生物选择性降解胞内非正常蛋白质的一种主要途径。一些细胞凋亡过程中有泛肽、泛肽 -蛋白质结合物的聚集。 proteaosome复合体的结构、功能变化常常发生在程序性细胞死亡的细胞中。p5 3、bcl- 2和 ICE等基因对细胞凋亡的调控也与泛肽 - proteaosom

可溶性细胞间黏附分子-1在原发性肝癌患者血清中的表达及其与肝纤维化的关系

目的:探讨可溶性细胞间黏附分子-1(sICAM-1)在原发性肝癌(PHC)患者血清中的水平及其与肝纤维化的关系。方法:采用ELISA方法测定45例PHC患者、30例良性肿瘤患者和35例健康查体者血清sICAM-1和肝纤维化四项(PCⅢ、Ⅳ-C、LN、HA)水平,并分析sICAM-1与肝纤维化之间的关系。结果:PHC组血清sICAM-1和肝纤维化四项(PCⅢ、Ⅳ-C、LN、HA)水平均显著高于良性肿瘤组和正常对照组,相比较有显著性差异(P<0.05);而良性肿瘤组和正常对照组各指标比较差异无统计学意义(P>0.05);血清sICAM-1含量与PCⅢ、Ⅳ-C、LN、HA含量呈显著正相关性(r=0.683、0.575、0.573、0.539,P<0.05)。结论:检测血清sICAM-1的水平对判定PHC患者的病情、为肝癌的早期诊断和治疗有着重要的临床意义。

氩氦刀结合放射粒子植入治疗复发难治性非小细胞肺癌的近期效果

目的探讨氩氦刀冷冻消融结合放射性125I粒子植入姑息治疗复发难治性非小细胞肺癌的近期效果、可行性及安全性。方法对42例复发难治性非小细胞肺癌患者施行氩氦刀冷冻消融治疗后,对瘤周及未冷冻区再定位植入放射性125I粒子;分别于治疗后的1、3、6个月全部行胸部CT增强扫描复查。结果术后1、3、6个月随访,总有效率分别为33.3%、92.9%和85.0%。术后冷冻区的CT值较术前下降,患者的KPS评分高于治疗前,差异有统计学意义(P>0.05)。结论氩氦刀冷冻消融术结合植入125I放射性粒子治疗复发难治性非小细胞肺癌安全、损伤小、并发症轻,近期效果确切。

人发角蛋白神经导管诱导兔胫神经缺损部分再生时泛素的表达及分布

目的:应用人发角蛋白神经导管植人兔胫神经缺损部分,诱导神经再生过程中不同时期泛素(ｕｂｉｑｕｉｔｉｎ)的表达和分布。方法:免疫组织化学法。结果:术后４８ｄ,缝合线之间变性组织及其周围神经组织的雪旺细胞胞质和胞核中泛素免疫组化染色呈棕黄色阳性反应。术后９９ｄ,泛素在人发角蛋白周围的组织中免疫组化染色呈深棕色强阳性反应,在其它新生神经组织分布稀疏,免疫组化染色呈浅黄色弱阳性。术后９９ｄ较成熟的神经组织中无泛素阳性着色,而新生的神经组织呈棕黄色阳性反应。结论:人发角蛋白及缝合线之间变性组织的异常蛋白的降解主要由泛素承担。在新生神经组织中大量泛素参与蛋白质和变性神经组织的降解,而在趋于成熟的神经组织中因降解的蛋白质量的减少,参与降解的泛素量也减少。

自噬基因APG5基因结构的生物信息学分析

利用生物信息学手段对一种与人类细胞凋亡有关的基因———自噬基因 (Autophagy 5 ,简称APG5 )的基因组全序列进行拼接和基因结构分析 ,同时该基因的一个新的可变性剪切变异体 (APG5 β)被首次证实及报道。利用PCR技术从人胚脑cDNA文库和B细胞cDNA文库中调取APG5基因 ,装入绿色荧光蛋白pEGFP C1表达载体 ,测序确定其核苷酸序列 ,进行数据库搜索。该基因组全序列分散在核酸序列数据库GenBank的几个不同序列条目中。将相关克隆的基因组序列做相似性比对 ,用DOTPLOT方法确定其相互位置关系 ,并进行序列拼接 ,得到全长基因。利用GenScan、Genefinder等基因识别软件确定其内含子、外显子、转录起始位点、加尾信号等 ,分析其基因结构 ,在此基础上进一步分析其cDNA中外显子数目和排列顺序 ,证实了从B细胞cDNA文库中克隆所得的APG5为一种可变性剪切变异体。利用生物信息学工具 ,成功地拼接出全长为 1 5 0kb人类APG5基因基因组全序列 ,确定其有 8个外显子。根据剪切位点的特性找出其在序列中的位置 ,分别计算出内含子、外显子的长度 ,首次证实并报道APG5 β是第 3外显子缺失的可变性剪切变异体。将验证确实的APG5 β转染至人肝细胞株和HeLa细胞株 ,在共聚焦激光显微镜下可观察到其在细胞凋亡时的特异表达。

自噬分子机制的研究动向

自噬是细胞对自身结构进行蛋白降解的一种方式。为从分子水平揭示细胞内部自噬调控机理 ,需研究该过程的各个环节。新近的研究 ,特别是近几年自噬基因的发现证实 ,蛋白磷酸化参与的自噬调控 ;自噬体膜的形成 ;微管系统传输自噬体以及自噬与凋亡的内在联系 ,都有分子水平的依据 ,这给更深入地研究自噬分子机理提供了重要的信息。

不同组分HHK扫描电镜观察

目的：观察Ｆ、Ｂ、Ｚ三种不同的ＨＨＫ表面及断面结构，确立不同降解速度ＨＨＫ的形态学指标，阐明其在自体腱形成过程中的形态机理，以更好地为临床服务。材料与方法：人发经过不同生化方法处理，制备混合编制快速（Ｆ）、中速（Ｂ）、慢速（Ｚ）三种不同降解速度的ＨＨＫ人工腱在扫描电镜下观察。结果：发现Ｆ组毛小皮大部分脱落，皮质中微丝束融合或消失；Ｚ组毛小皮少部分脱落，皮质中微丝束排列略紊乱，而 Ｂ组的改变介于前两者之间。结论：不同组分的 ＨＨＫ形态改变具有各自特点，为其成功应用于临床奠定基础，临床实验证明，ＨＨＫ最终被降解而被胶原纤维代替并形成自体腱。

M21170应用粒细胞集落刺激因子体外扩增脂肪基质干细胞

目的探讨粒细胞集落刺激因子(granulocyte colony stimulating factor,G-CSF)对大鼠脂肪基质干细胞(adipose stromal cells,ASCs)体外扩增能力的影响。方法取10只SD大鼠腹膜后脂肪组织,差异贴壁法分离培养ASCs。检测第3代ASCs常规培养与加入G-CSF条件下体外扩增能力与细胞周期分布情况。结果①实验组ASCs形态与对照组比较无明显变化。②实验组大鼠ASCs培养18d后,细胞集落数目(14.9±4.6),细胞总数(3.9±0.8)×104;对照组细胞集落数目(7.7±3.8),细胞总数(2.4±0.6)×104。实验组与对照组比较,ASCs细胞集落数目与细胞总数差异均有统计学意义(P<0.05)。③实验组ASCs细胞G0-1细胞比例相对常规培养组低(P<0.05)。结论G-CSF可促进ASCs进入细胞增殖周期,增加其体外扩增能力。

人自噬基因APG5及一个新亚型APG5β的克隆

目的克隆APG5基因并在真核细胞中进行表达,从分子水平研究自噬与凋亡之间的关系。方法应用PCR技术,从人胚脑cDNA文库和B细胞cDNA文库中钓取APG5基因,连接到pEGFP-C1载体,测序确定核苷酸序列并进行生物信息学分析。利用脂质体lipofectin将带有目的基因的载体转入人肝细胞株和Hela细胞株。在共聚焦激光显微镜下观察融合蛋白表达。结果成功地钓取APG5及一个新亚型APG5β基因片段,两者连入pEGFP-C1载体并在Hela细胞株中获得表达。在共聚焦激光显微镜下观察到两者在凋亡细胞中表达。在凋亡诱导刺激下,随着凋亡的提前出现,融合蛋白表达的时间也提前。结论成功克隆APG5/APG5β基因,首次证实并报道一个新亚型APG5β,并在GenBank核酸序列数据库中登录(AF293841)。对两者功能进行了初步研究,为进一步研究自噬与凋亡之间的关系和可变性剪切的调节机制提供了有益的线索。

泛素通路与脑缺血

脑缺血再灌注 72h时 ,CA1区发生迟发性神经元死亡 (DND)。泛素通路可降解脑缺血时产生的变性蛋白质 ,再灌注时 ,UbC基因的表达变化最明显。CA1区游离泛素持续减少 ,泛素免疫反应性 (UIR)消失且始终不恢复 ,且发生DND。在低温或缺血预处理时 ,CA1区游离泛素暂时减少 ,泛素免疫反应性消失后恢复 。

MiR-143通过负调控GLI3基因来抑制鼻咽癌细胞的迁移

目的探讨miR-143在鼻咽癌细胞迁移中的生物学功能及可能的分子机制。方法应用生物信息软件预测miR-143靶基因,分别将预测靶基因GLI3的3'UTR及其突变体构建到荧光素酶载体psiCHECK-2骨架中。通过荧光素酶报告基因检测分析miR-143对靶基因GLI3的调控作用,并检测转染miR-143 mimics、inhibitor和siGLI3后鼻咽癌5-8F细胞miR-143和GLI3的表达水平及迁移能力的变化。结果生物信息学预测Hh信号通路转录基因GLI3可能是miR-143的靶基因;双荧光素酶报告基因分析表明miR-143能够作用于GLI3的3'UTR;Western Blot和qRT-PCR结果进一步证明5-8F细胞中miR-143与GLI3的表达呈负相关,并影响5-8F细胞的迁移能力。结论 MiR-143可通过负调控靶基因GLI3抑制鼻咽癌细胞的迁移,为进一步研究miR-143及Hh信号通路在鼻咽癌中的作用机制提供参考价值。

肝细胞凋亡与肝癌癌前病变

目的观察肝细胞癌（HCC）癌分组织与单纯肝硬变二者在肝细胞凋亡的区别，以探讨癌前病变的特性．方法HCC癌旁标本及单纯肝硬变标本分别为24及对例（A及B组），全部作原位末端标记（ISEL），HBsAg免疫组化及HE观察分析ISEL阳性强度分4级，作A、B组比较，卡方统计．结果A组的肝细胞ISEL阳性率及阳性强度均显著高于B组（P＜0．01）．阳性细胞核深棕色，散在分布，以汇管区及纤维隔周边部为多．A组绝大多数属静息性门脉性肝硬变；而B组尚有慢活肝及侵重肝肝硬变炎症B组较A组明显（P＜0．05）．HBsAg阳性率A组89．4％，B组93．7％ISEL阳性与HBsAg、肝细胞活跃增生和肝细胞非典型增生无相关性此外，发现A组中有1例“凋亡性肝硬变”，其ISEL及HE均证明50％的肝细胞有凋亡结论HCC癌旁肝硬变的凋亡发生率明显高于单纯肝硬变者，认为肝细胞凋亡是HCC癌前病变的一种特性，与癌的发生有关．

霍奇金病RS/H细胞凋亡及其与PCNA表达的关系

目的：研究霍奇金病（ＨＤ）ＲＳ／Ｈ细胞的自发凋亡与组织学分型及ＰＣＮＡ表达的关系。方法：对４６例ＨＤ行ＴＵＮＥＬ原位凋亡检测，并做ＰＣＮＡ免疫组化；以８例淋巴结滤泡型反应性增生病为对照。结果：淋巴细胞为主型和结节硬化型ＨＤ的ＲＳ／Ｈ细胞凋亡发生率明显高于混合细胞型和淋巴细胞消减型者（Ｐ＜０００５），ＰＣＮＡ阳性率前者仅略高于后者；全部ＨＤ病例ＲＳ／Ｈ细胞凋亡发生率与ＰＣＮＡ阳性率呈正相关（Ｐ＜００５）。结论：分化好的ＨＤ其ＲＳ／Ｈ细胞较分化差者易于凋亡，这可解释前者ＲＳ／Ｈ细胞通常数目较少且病人预后较好；各型ＲＳ／Ｈ细胞的ＰＣＮＡ高表达而核分裂象不多可能是ＲＳ／Ｈ细胞发生巨细胞化的原因。

肝癌细胞自噬性凋亡过程中caspase-3基因的克隆与鉴定

目的从长春新碱诱导发生自噬性凋亡的肝癌细胞系HepG2中克隆caspase-3基因。方法提取细胞总RNA,采用RT-PCR技术扩增目的片段,构建重组克隆载体,测序鉴定及分析。结果经RT-PCR获得了预期的扩增产物即caspase-3基因625bp的核苷酸片段,其测序结果与文献报道一致。结论初步证明该caspase-3基因片段参与了长春新碱诱导的HepG2细胞自噬性凋亡过程。