抑癌PTEN基因联合p53基因转染对前列腺癌PC-3m细胞凋亡的影响

目的研究抑癌PTEN基因联合p53基因转染对前列腺癌PC-3m细胞凋亡的影响。方法构建表达载体:空质粒pEGFP-N1、pEGFP-N1-PTEN质粒、pEGFP-N1-p53质粒及pEGFP-N1-PTEN-p53质粒,体外分别转染到前列腺癌PC-3m细胞中,观察它们转染后的荧光表达情况;采用RT-PCR法检测目的基因表达;Western blotting法检测目的 PTEN蛋白和P53蛋白的表达;用MTT法观察细胞增殖抑制情况并绘制生长抑制曲线;Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术检测PTEN基因和p53基因对前列腺癌PC-3m细胞凋亡的影响。结果荧光显微镜下观察到PTEN、p53及两个基因同时在PC-3m细胞系中成功表达;RT-PCR检测结果显示,与PTEN基因单转染组、p53基因单转染组和空载体转染组相比联合转染组mRNA在PC-3m细胞系中表达明显增加(P<0.05);Western blotting法检测同样发现,联合转染组PTEN蛋白及P53蛋白表达明显高于PTEN基因单转染组、p53基因单转染组和空载体转染组(P<0.05);联合转染组细胞凋亡率明显高于空载体转染组、PTEN基因单转染组和p53基因单转染组(P<0.05)。结论 PTEN基因与p53基因联合转染能诱导前列腺癌PC-3m细胞凋亡,这种联合转染可能对前列腺癌的基因治疗具有潜在的应用价值。

蛇菰多糖减轻急性脊髓挫伤模型大鼠的神经元损伤

目的探讨蛇菰多糖(BPS)对神经自噬的调节及对急性脊髓挫伤(SCI)的治疗作用。方法将大鼠分为假手术组(sham,n=10)、模型组(SCI,n=15,用改良Allen's脊髓撞击法)和BPS干预组(BPS,n=45,灌胃给予低、中、高3个剂量14 d);用BBB评分评价运动功能;采用HE及Nissl染色法观察形态;蛋白质免疫印迹法检测自噬相关蛋白的表达变化。结果与sham组相比,SCI组大鼠的BBB评分⁃时间变化曲线明显降低,损伤程度达重度(P<0.05);SCI的脊髓背侧白质和中央灰质均损伤严重,空洞明显;神经元数量明显减少,胞体结构不完整;SCI组第1、7、14天的LC3Ⅱ/Ⅰ和p62相对表达水平上调,其中第7天表达最高(P<0.05);而Beclin 1表达整体下调,于第7天表达最低(P<0.05);与SCI组比较,BPS组大鼠BBB评分曲线呈剂量依赖性明显增高;BPS组背侧白质和中央灰质空洞缩小,神经元数量多,形态完整;BPS组Beclin 1、LC3Ⅱ表达明显回升,而p62蛋白较SCI组下调(P<0.05)。结论蛇菰多糖对大鼠具有明确的神经保护作用,其作用机制可能与保护损伤的神经细胞有关。