中药渣降解菌株的筛选与鉴定

[目的]分离筛选中药渣高效纤维素降解菌,并进行纤维素酶酶活的测定,以提高药渣附加值。[方法]将中药渣腐解物及长期堆放药渣的土壤样本放置于赫奇逊培养基中富集培养,分离纯化出以药渣为唯一碳源的菌株,将得到的菌株采用刚果红平板法进行初筛,测定菌株滤纸酶(FPA)、外切β-葡聚糖酶(CBH)、内切β-葡聚糖酶(CMC)、β-葡萄糖苷酶(CB)等酶活进行复筛,通过形态学、生理生化、16S rDNA序列分析进行菌株鉴定。[结果]筛选到1株纤维素酶产生较好的纤维素降解菌株YZ25,其FPA酶活25.073 U/mL、CMC酶活24.978 U/mL、CBH酶活58.452 U/mL、CB酶活37.202 U/mL,经鉴定菌株YZ25为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)。[结论]该研究丰富了药渣类纤维素降解菌株资源库,应用前景良好,对研究开发中药渣功能性生物有机肥料具有实际意义。

银杏IspF基因的克隆与功能分析

采用RACE技术,从银杏中获得MEP途径中的第5个酶2-C-甲基-D-赤藓醇-2,4-环焦磷酸合成酶(IspF)基因的全长cDNA,命名为GbIspF(GenBank登录号:EF062579)。该基因cDNA全长为897bp,包含720bp的开放阅读框,编码239个氨基酸残基的蛋白,在GbIspF的N-端有一个长为59个氨基酸残基的质体转运肽;序列多重比对表明GbIspF与其他植物IspF同源。利用半定量RT-PCR对GbIspF进行组织表达谱分析,结果表明GbIspF在银杏根、茎、叶、果中均有表达,但表达量差异较大,在叶中表达量最高,在根中表达量最低。功能互补分析表明GbIspF能推动工程菌XL1-Blue+pTrcGbIspF+pAC-BETA超量表达β-胡萝卜素,在颜色互补平板上呈现β-胡萝卜素特有的橘黄色,证实GbIspF具有典型的IspF基因功能。

利用CRISPR/Cas9技术敲除转基因水稻中的潮霉素标记基因

【目的】在植物转基因研究中,使用选择标记基因(Selectable Marker Gene,SMG)使得转化子的筛选更准确便利,但存在SMG的转基因植株可能对人类健康及生态环境造成潜在危害,这也限制了转基因植物商业化的应用前景。因此去除转基因植物中的SMG十分必要。【方法】本研究利用CRISPR/Cas9基因编辑技术,针对水稻转基因中常用的SMG潮霉素抗性基因(hygromycin phosphotransferase II,hptII)设计构建了编辑载体,利用农杆菌(LBA4404)介导的遗传转化方法转化水稻日本晴,得到转化植株,再将转化植株与带有hptII基因的植株进行杂交。【结果】通过遗传转化及分子鉴定,本研究得到了18株可用于编辑hptII基因的转化植株,进一步对转化植株与带有hptII基因的植株杂交的F1代进行检测,经PCR检测及测序验证表明,在杂交F1代植株中,hptII基因的DNA确有编辑发生,包括碱基缺失、替换以及插入等,使得hptII基因不能成功转录。【结论】利用CRISPR/Cas9技术,成功获得了删除hptII基因的转基因水稻。这为植物转基因研究实现无选择标记基因(marker-free)奠定了基础。

初盛唐文艺审美趋向——以刘希夷诗歌的接受为例

初唐诗人刘希夷的诗歌在初、盛唐经历了由受冷落到被推崇的接受过程。初唐诗坛以及盛唐社会对刘诗的评价相差较大,这一现象恰体现了初盛唐文艺审美趣味演变的规律,即由典雅靡丽、贵族化向雅俗共赏、大众化演进。而刘希夷的诗歌也正是因为顺应了此发展趋势而得以在盛唐诗坛获得相应的地位。

刘希夷漫游探略

结合诗人现存诗歌以及唐代的交通路线考察,刘希夷大规模的游历始于唐高宗上元二年举进士之后,游历各地的顺序大致是取道襄阳至隋州,后远游江南,又从江南溯长江而上,行经巫山至蜀地成都。漫游其间诗人或曾返回京、洛。

《襄阳乐》源流新探

本文通过辨析南朝清商乐曲《襄阳乐》与南朝民谣《襄阳乐歌》的关系,揭示《襄阳乐》产生的真正缘由和民俗背景;同时,尝试以《襄阳乐》为例,通过考察其制作原委、原歌辞的内容倾向以及原歌辞的流传情况去探讨南朝清商西曲歌的产生、命名以及流播的一些规律。

汉代“休沐”制度文化根源探析

汉代公职人员"五日一休"的日常例行休假始被称为"休沐",自此以后,"休沐"作为公职人员例行休假的代称一直沿用至清末。这一名称在汉代的确立以及汉代"五日一休"规定的背后有着深刻的文化根源。这一制度的确立不但跟汉代人"天人合一"的自然信仰有关,还和汉代的政治以及儒家"浴德"的信念相联系。

电针足三里穴对不完全性肠梗阻大鼠小肠肌电活动的影响

目的:探讨电针足三里穴对肠梗阻大鼠小肠肌电活动的影响.方法:采用非贯穿肠管的方式,末端回肠套环建立不完全性肠梗阻大鼠模型,将大鼠随机分为:空白对照组(n=10)、假手术组(n=10)、肠梗阻组(IO组,n=10)、肠梗阻+电针组(14dIO+EA组,n=10,21dIO+EA组,n=10).造模成功后空白对照组、假手术组、IO组均未给予电针治疗措施,IO+EA组连续给予电针14d、21d电针治疗措施.最后1次电针后2h,分别测体质量后打开腹腔,肉眼观察回肠组织形态学的改变,BL-420F生物机能实验系统测定回肠肌电.结果:IO组大鼠体质量较空白对照组和假手术组显著降低(P<0.01),IO+EA组大鼠体质量较IO组显著升高(P<0.01).回肠肌电慢波活动改变情况:14dIO组振幅(mV)低于空白对照组(0.11±0.03vs0.35±0.06,P<0.01),且频率(%)、振幅(%)变异系数均明显高于空白对照组和假手术组(27.71±10.54vs14.08±4.22,22.00±6.24;75.54±8.59vs15.84±1.49,20.67±7.57,均P<0.01);电针实验治疗IO+EA组大鼠14d后,梗阻段平均频率(次/min)均较IO组增加(33.18±2.56vs24.01±0.92,P<0.01);平均振幅(mV)增大(0.25±0.09vs0.11±0.03,P<0.05);频率变异系数(%)减少(17.02±3.62vs27.71±10.54,P<0.05);振幅变异系数(%)减少(58.39±9.56vs75.54±8.59,P<0.01);电针实验治疗21d后,梗阻段平均频率(次/min)均较IO组增加(40.55±5.29vs33.18±2.56,P<0.01),振幅变异系数(%)减少(44.00±11.61vs58.39±9.56,P<0.05).结论:采用非贯穿肠管的方式能有效建立不完全性小肠梗阻模型;电针足三里穴通过调节肠肌电,对大鼠不完全性肠梗阻实验性治疗有一定的效果,在一定程度上对肠梗阻大鼠的胃肠动力有较好的调节作用.

湖南湘潭地区空心莲子草叶甲自然种群的越冬虫态与越冬生境

为探索保护空心莲子草叶甲Agasicles hygrophila安全越冬的有效措施,2007年冬至2008年春通过样方法调查了湖南湘潭空心莲子草叶甲自然种群的越冬虫态与越冬生境。结果表明:空心莲子草叶甲的自然种群在0℃以上的气温条件下,在湖南湘潭的田间成虫可在空心莲子草层下的表层土中、直立茎秆内或匍匐茎秆层越冬,随着气温降低至5℃以下,空心莲子草叶甲由直立茎秆层向匍匐茎秆层或表层土中转移。除空心莲子草生境外,其周围其他生境与其他植物上未发现空心莲子草叶甲扩散分布。建议在霜冻或入冬前适当保护有空心莲子草及叶甲分布的生境,可望提高越冬叶甲种群数量,从而提高来年开春后叶甲对空心莲子草的控制效果。

空心莲子草叶甲对空心莲子草控制效果的定量评价

为了解空心莲子草叶甲Agasicles hygrophila被引入中国20多年后其取食行为与取食能力是否发生改变,我们通过采集叶甲自然种群的成虫,在室内用空心莲子草Alternanthera philoxeroides饲养获得检测用叶甲各虫态与虫量进行室内定量检测,研究了空心莲子草叶甲自然种群各龄幼虫与成虫在不同密度下对空心莲子草的控害效果。结果显示:1龄幼虫喜食顶芽嫩叶,在每株接0.2和1头1龄幼虫密度下,空心莲子草仍有新叶和侧芽生成,生物量、株高与茎节数仍在增加;在5头/株的密度下,空心莲子草的生物量、叶片数和侧芽数均出现负增长;在10头/株的密度下,草的生物量、株高、叶片数、侧芽数和茎节数均表现为负增长。2龄幼虫优先取食顶芽嫩叶,也取食老叶与茎杆,在每株10头2龄幼虫的密度下,接虫7d后,40%的植株死亡。3龄幼虫取食叶片与茎秆,后期钻入茎秆中化蛹,在10头/株密度下,7d后,已引起52%的植株死亡,存活株的茎节数显著减少。成虫可24h连续取食植株的任何组织,0.2头/株的密度下,空心莲子草叶片与侧芽数量已呈现负增长;5头/株的密度下,空心莲子草的生物量、株高、叶片数、侧芽数与茎节数均呈现较大的负增长;10头/株的控草效果更加显著。

颠茄发根培养系统的建立(英文)

用种子萌发获得颠茄无菌苗,用发根农杆菌A4侵染颠茄无菌苗真叶,所有感染了的叶片都从伤口处产生发根．在无激素培养基中,发根表现出高频侧向分支、生长迅速、失去向地性的典型形态特征．PCR检测表明rolB、rolC确实整合到颠茄发根基因组中,用MS液体培养基发酵培养35 d,3个发根单克隆中发根生物量最大增长率达7．5倍,T6单克隆莨菪碱含量最高(5．61 mg／g),与种植在田间的颠茄植株的根相比,提高7倍;T2单克隆东莨菪碱含量最高,提高9倍多(2．35 mg／ g)．本研究揭示了rol基因足以诱导获得生长迅速和次生代谢产物积累的发根．表明颠茄转基因发根的发酵培养不失为生产托品烷类生物碱的一条好途径．

除草剂胁迫对空心莲子草叶甲种群的影响及应对策略

为探讨除草剂胁迫对空心莲子草叶甲种群的影响,寻求合理施用除草剂,有效保护叶甲,提高其控草效果的应对策略,利用叶片残留法测试了在草甘膦、农达、水花生净与35%苄.丁可湿粉等除草剂胁迫下空心莲子草叶甲卵孵化率,幼虫、成虫存活率以及蛹羽化率。结果表明被测试的4种除草剂均不同程度地降低空心莲子草叶甲卵孵化率,幼虫与成虫存活率及蛹羽化率,特别是水花生净28.0、35.0 g/L两种浓度处理,35%苄.丁可湿粉4.0 g/L浓度处理显著降低卵孵化率;农达13.4 g/L浓度处理显著降低1龄前期幼虫存活率,农达40.1 g/L与53.4 g/L两种浓度处理显著降低2龄前期幼虫存活率;水花生净28.0 g/L浓度处理显著降低3龄前期幼虫存活率;草甘膦97.6 g/L与122.0 g/L浓度处理、农达26.7 g/L与66.8 g/L浓度处理、35%苄.丁可湿粉2.0 g/L浓度处理显著降低后期蛹的羽化率;35%苄.丁可湿粉1.0 g/L浓度处理显著降低羽化后3 d雌虫的存活率。除草剂除直接杀死空心莲子草叶甲,降低其种群数量外,使叶甲失去食物与避护所,快速地引起叶甲种群崩溃。建议合理施药,并在施药时,随机留若干小斑块不施药,保护叶甲,可望提高其田间控草效果。

空心莲子草在稻田生态系统中的生长特性及对水稻生长发育的影响

为了解空心莲子草在正常耕作稻田中的入侵能力与水稻对该草的抵抗能力,本文通过在秧苗移栽后的稻田中移植少量空心莲子草繁殖体,人工模拟空心莲子草入侵稻田的方法,研究了该草在稻田中的入侵生长繁殖特性及其对水稻生长发育的影响。结果显示:在人工移入空心莲子草后的第一个水稻生长季内,空心莲子草长势较弱,其植株克隆数与直立茎秆数从水稻分蘖前期至成熟期均无显著变化,仅株高增长极显著,但茎秆纤细柔软,部分茎秆顶端弱化,叶片弱小卷曲,出芽量很低或几乎没有新芽生长。空心莲子草对水稻分蘖、有效分蘖与株高等参数均无显著影响。空心莲子草在田埂上与稻田边缘的生长主要表现为该草的覆盖度、直立茎秆数与株高的显著增加,难以向稻田中扩散生长。研究结果表明,空心莲子草在耕作稻田中不能形成严重入侵态势。建议保持稻田于耕作状态,可有效防止空心莲子草的入侵。

鲨烯合酶RNAi载体构建及对水稻的遗传转化研究

鲨烯合酶(Squalene synthase,SQS)是ABA生物合成途径上游支路的一个关键酶。本研究克隆了406 bp的SQS基因片段,将其分别正向和反向插入干扰载体p YLRNAi.5中,经过酶切鉴定证实成功构建了干扰载体p YLRNAi-SQS,通过农杆菌介导法转入水稻品种Kasalath中,PCR初步鉴定获得了20株转基因阳性植株,进一步通过半定量RT-PCR分析,阳性转基因材料与野生型Kasalath相比,Os SQS3都有不同程度的下调,而Os SQS7变化不明显。证明转入的SQS基因只对Os SQS3起干涉效果,而对Os SQS7无作用,推测水稻中两个SQS基因可能存在不同的作用机制。本研究为进一步研究水稻中Os SQS3和Os SQS7各自的生物学功能奠定了基础,同时也为研究SQS调控ABA的生物合成提供了研究材料。

9种植物水浸提液对空心莲子草的化感作用

【背景】空心莲子草是难以防除的恶性入侵杂草,因此,探索高效无毒的化感防治方法具有重要意义。【方法】利用水浸提法研究了博落回、苦瓜、樟树、柳杉、凤尾蕨、柑橘、夹竹桃、洋葱及大蒜9种植物不同器官对空心莲子草的化感作用。【结果】与对照相比,博落回叶、苦瓜果肉与种子、凤尾蕨、樟树叶和柳杉叶的水浸提液对空心莲子草具有较强的化感作用,主要表现为空心莲子草叶片数和茎节数减少,株高与生物量的增长受到抑制。【结论与意义】不同植物水浸提液对空心莲子草的化感作用有所差异。本研究为利用植物的化感作用控制空心莲子草提供了依据。

PMT和H6H双基因共转化颠茄发根的植株再生

目的获得1,4-丁二胺-氮-甲基转移酶(putrescine N-methyltransferase,PMT)和莨菪碱-6β-羟化酶(hyoscyamine6β-hydroxylase,H6H)双基因共转化的颠茄发根的再生植株。方法选用PMT和H6H双基因共转化的东莨菪碱高产发根单克隆T4,用1/2MS+1.0mg/LNAA固体培养基培养1、5、10d后,转入1/2MS固体培养基中诱导不定芽和不定根,培养条件均为(25±1)℃,55μmol/(m2.s),12h/d。采用PCR扩增检测再生植株的PMT、H6H和NPT-。结果发根在1/2MS+1.0mg/LNAA固体培养基上培养5d后,转入1/2MS固体培养基上培养,60%的外植体能自发长出不定芽,1/2MS+0.1mg/LIBA固体培养基中诱导生根较1/2MS固体培养基强,15d产生的条数平均为9条,形成了完整的再生植株。PCR检测表明所有再生植株均为颠茄的转基因再生植株。结论建立了颠茄转化发根再生体系,为实现颠茄托品烷类生物碱的代谢工程及开展分子育种奠定了基础。

略论唐人拟作之《襄阳乐》

《襄阳乐》是很受唐代诗人重视的南朝清商西曲歌之一。终唐之世,拟作乐府诗的主题多以表现"游女"这一襄阳的特殊民间风情为主,总体风格也多表现为绮丽的宫体诗风。此外,在古乐府诗创作兴盛的盛唐,拟作《襄阳乐》的数量却不及中唐以降拟作该乐府诗的数量,这一文学现象的出现恰恰表现出中晚唐文人在经历社会动乱之后的消极情绪。

低剂量^(60)Coγ急性照射紫色甘薯苗的生长效应

采用5 Gy60Coγ射线在低剂量模式下对9个不同基因型紫色甘薯的茎尖苗进行了急性照射,调查其栽插后45、65、85、105、125 d的块根产量、藤蔓产量等主要生长性状,分析了辐照后对紫色甘薯块根和藤蔓生长的影响。结果表明:①5 Gyγ射线急性照射后与未辐照的对照在块根产量形成上均可分为2种类型:持续增加型,平缓增加型—块根生长曲线中的一个或两个生长期增速平缓;但辐照后,相同基因型在同一生长时期的生长速率发生了变化。②不同基因型紫色甘薯对低剂量急性γ辐射的耐受性和对块根产量的促进和抑制作用因基因型差异而不同。"L7"和"徐紫201"在栽插后85 d增产,熟期提前,其中"徐紫201"显著增产;"南紫-8"和"福薯13"在收获期增产,其中"南紫-8"从栽插65 d持续增产。③低剂量急性γ辐射对不同基因型紫薯藤蔓的促进作用不一致。

铀尾矿库植物修复生境中的节肢动物群落特征研究

为了解铀尾矿库植物修复生境中的节肢动物群落重建格局与趋势,评价其生态学意义与安全性,研究了我国南方某铀尾矿库区内生长不同植物的修复生境中的节肢动物群落.结果显示,在尾矿沙裸地生境、种植蜈蚣草、苍耳商陆的人工修复生境、自然修复生境与自然对照生境分别采集到0、41、54、59与68种,0、199、760、685与1 699头节肢动物.在自然对照生境中,采集到土壤指示生物蚯蚓,弹尾虫形成明显的优势种,而在3种修复生境中,弹尾虫的数量很低,没有采到蚯蚓.在尾矿沙裸地生境中没有采到节肢动物,与植被修复生境、自然对照生境呈现高度的环境异质性.修复生境的植被覆盖度与植物种类多样性提高,节肢动物群落及各亚群落的物种丰富度与个体数量明显增加,且植物多样性与植被覆盖程度越接近的生境,其中的节肢动物群落及蜘蛛与昆虫亚群落的物种组成与群落外貌越相似.研究表明铀尾矿库植被修复,能有效促进节肢动物群落及各亚群落的重建.

血清唾液酸对老年病患者肿瘤诊断的价值

目的观察老年心脑血管疾病及肺癌患者血清唾液酸的变化,探讨对老年病患者肿瘤诊断的价值。方法采用血清唾液酸快速检测法,对48例心脑血管疾病患者及42例肺癌患者的血清唾液酸进行测定。结果心脑血管疾病患者血清唾液酸与正常健康人差异无统计学意义,肺癌患者血清唾液酸显著升高。脑血管疾病患者血清唾液酸高于心血管患者。结论血清唾液酸检测对心脑血管疾病的诊断、治疗监测等方面的价值不太大,而对肺癌的诊断筛选、疗效观察、预后判断等具有重要的临床意义。