SRp38基因研究进展

SR蛋白在前体mRNA可变剪接调控中发挥重要作用。可变剪接调节因子SRp38作为一种新近发现的具有神经及生殖组织特异性的SR蛋白,有典型的SR蛋白结构特征并能够调控GluR-B、TRK-C以及NCAML1等基因的可变剪接,但与其他SR蛋白不一致的是,SRp38可以在一定条件下(有丝分裂M期,热休克)抑制前体mRNA剪接,从而防止错误剪接的出现。SRp38的RRM结构域可以识别特殊的RNA序列并跟U1snRNP结合,而其RS结构域则参与调控前体mRNA剪接。SRp38的磷酸化状态可以影响其调控功能的发挥,在有丝分裂M期及热休克时,该蛋白质均呈去磷酸化状态。SRp38在爪蟾胚胎神经发育过程中发挥作用并且可以同TLS(translocation liposarcoma)蛋白相互作用,提示其可能通过调节前体mRNA可变剪接在神经系统的发育分化以及在肿瘤的发生中扮演角色。

SRp38基因在小鼠视网膜细胞中的表达以及对GluR-B小基因可变剪接的调控

SR蛋白在前体mRNA可变剪接调控中发挥重要作用.SRp38作为一种新近发现的具有神经及生殖组织特异性的SR蛋白,能够调控一些在神经组织中起重要作用的基因(如GluR-B,Trk-C,NCAML1等)的前体mRNA可变剪接,同时还可以在有丝分裂M期及热休克时抑制前体mRNA剪接的发生.利用Western blot以及免疫组织化学方法研究了SRp38蛋白在小鼠视网膜中的表达以及分布情况,结果显示,SRp38蛋白在视网膜中的表达具有区域特异性,在外网层、内核层、内网层以及节细胞层中均有表达,而在外核层无表达.对分离培养的小鼠视网膜细胞进行免疫双标记分析的结果表明,SRp38蛋白在视杆-双极细胞的胞体、轴突、树突中表达.通过瞬时共转染以及RT-PCR分析,发现在R28细胞中,SRp38过表达可以促进GluR-B小基因Flip亚型的剪接.结果提示SRp38蛋白可能通过调控小鼠视网膜内前体mRNA可变剪接、进而在小鼠视网膜功能中发挥重要作用.

神经胶质瘤中前体mRNA可变剪接研究进展

胶质瘤是最常见的脑肿瘤,前体mRNA可变剪接可能在不同类型胶质瘤的发生、恶化以及侵入中发挥作用.参与调控胶质瘤中前体mRNA可变剪接的因素包括顺式元件如内含子剪接抑制序列(ISS)、外显子剪接抑制序列(ESS)等,反式因子包括SRp55、SC35、SF2/ASF、PTB等剪接调节因子.近期的研究进展发现,有多种与胶质瘤相关的基因受到可变剪接的调控,包括肿瘤抑制因子、肿瘤促进因子、酶、受体、离子通道等.因此,研究胶质瘤中的前体mRNA可变剪接将有利于深入了解胶质瘤发生的分子机制、有利于为胶质瘤的早期诊断和治疗提供新的潜在靶点.

推拿康复治疗脑性瘫痪的炎症细胞因子调节机制

目的探讨推拿康复治疗痉挛型小儿脑性瘫痪(cerebral palsy,CP)的机制。方法选择30例痉挛型小儿CP患者采用选择性脊柱推拿康复疗法进行治疗,同时设立10名性别和年龄匹配的健康志愿者作为对照组。使用统一的观察量表观察病人的肌痉挛程度、关节活动度和7项疗效评估情况,疗程结束后进行统计分析。分别采集治疗前、治疗3m后各CP患者和健康者的外周血3mL,用密度梯度离心法分离外周血单个核细胞,应用炎症细胞因子与受体PCR芯片进行基因表达检测,绘制基因表达谱,筛选有表达差异的基因。外周血离心取血清,运用酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清中炎性细胞因子TNF-α、IL-6和IL-10蛋白表达。结果治疗后患儿肢体的肌痉挛程度和关节活动度明显改善,与治疗前相比差异具有统计学意义(P<0.05),7项疗效评估有效率为90.00%,表明推拿康复疗法对CP取得较好的疗效。基因芯片检测结果表明,与健康对照组相比,治疗前CP患者组表达上调的促炎性反应细胞因子与受体基因有7个,表达下调的抗炎细胞因子与受体基因有6个。与治疗前比较,治疗3m后CP患者组中表达上调的抗炎细胞因子与受体基因有4个,下调的促炎细胞因子与受体基因有6个。ELISA检测结果发现,治疗前CP患者组外周血血清中TNF-α和IL-6蛋白水平都显著高于健康对照组(P<0.01),而IL-10蛋白水平都显著低于健康对照组(P<0.05);与治疗前比较,治疗3m后CP患者组血清中TNF-α和IL-6蛋白水平都明显降低,IL-10蛋白水平显著升高(P<0.05)。与健康对照组相比,治疗前CP患者组血清中TNF-α/IL-10和IL-6/IL-10比值均显著升高(P<0.01);与治疗前比较,治疗3m后CP患者组血清中TNF-α/IL-10和IL-6/IL-10比值均显著降低(P<0.05)。结论 CP患者存在促炎性细胞因子基因表达上调和抗炎症细胞因子基因表达下调,这可能是CP患者机体中出现高促炎性反应状态的原因和发病的新机制;推拿康复疗法可能通过下调促炎性细胞因子基因表达和上调抗炎性细胞因子基因表达,重塑促-抗炎性细胞因子网络和促-抗炎性反应体系新的平衡来治疗痉挛型小儿脑瘫。

锌对鲫鱼免疫功能的影响研究

以鲫鱼为实验对象,探讨了饲料中锌质量分数对鱼类免疫功能的影响.通过对鱼体免疫组织生物发光,抗体的凝集效价,腹腔巨噬细胞(Macrophage,M)吞噬活性等免疫指标进行研究,结果发现饲料中锌质量分数与鲫鱼的免疫机能密切相关,缺锌时鲫鱼生物发光值,抗体的凝集效价均为最低,M吞噬活性最弱,但高锌同样也会抑制其免疫功能.说明饲料中锌的质量分数能影响鲫鱼的免疫功能,一般需要量为38～80mg/kg饲料,不宜过高.

缺血缺氧性脑性瘫痪鼠脑白质和脑皮层炎症细胞因子基因表达谱的特征

目的探讨脑性瘫痪(cerebral palsy,CP)发生的炎症细胞因子网络调控机制。方法 30只出生7日龄清洁级健康雄性SD大鼠按随机数字表法分为2组:CP模型组和对照组,每组15只。应用一侧颈总动脉结扎结合缺氧的方法构建CP大鼠模型,即幼鼠结扎右颈总动脉结合体积分数为0.08的O2与体积分数为0.92的N2缺氧环境的方法制作幼鼠CP模型。对照组仅切开幼鼠颈部皮肤后缝合皮肤伤口,未置于缺氧环境。幼鼠CP模型构建术后3w,采用足印步态重复间距试验、平衡木试验检测鼠的运动功能,进行行为学评价;取鼠脑组织行苏木精-伊红染色观察脑组织病理变化,以行为学评价和病理检测结果鉴定CP模型是否构建成功。分别取成功构建的CP模型组和对照组大鼠脑白质和脑皮层组织,应用炎症细胞因子与受体基因芯片进行基因表达检测,绘制基因表达谱,筛选有表达差异的基因。结果应用一侧颈总动脉结扎结合缺氧的方法成功建立了大鼠CP模型;与对照组相比,CP模型组脑白质和脑皮层组织中表达上调的促炎性反应细胞因子与受体基因分别有10个和8个(P<0.05),表达下调的抗炎细胞因子与受体基因分别有3个和2个(P<0.05)。结论 CP大鼠脑白质和脑皮层存在促炎症细胞因子基因表达上调,抗炎症细胞因子基因表达下调,从而导致促-抗炎性细胞因子网络和促-抗炎性反应体系平衡失调,这可能是CP发生中出现高促炎性反应状态的原因和新机制。

Gax基因对低氧性肺动脉内皮细胞增殖与ET-1、VEGF和eNOS蛋白表达的影响

目的观察Gax基因对低氧性肺动脉内皮细胞(PAEC)增殖及内皮素(ET-1)、血管内皮生长因子(VEGF)和内皮型一氧化氮合酶(eNOS)蛋白表达的影响。方法取大鼠肺动脉,用酶消化法获取PAEC并进行原代培养;分4组:未转染常氧对照组(常氧组)、未转染低氧处理组(低氧组)、Ad-βGal转染再行低氧处理对照组(Ad-βGal+低氧组)、Ad-Gax转染再行低氧处理组(Ad-Gax+低氧组)。分别在常氧(21%O2)和低氧(2.5%O2)6 h后,采用3H-胸腺嘧啶核苷(3H-TdR)掺入法和酶联免疫吸附测定(ELISA)检测PAECs增殖和培养上清液中ET-1、VEGF和eNOS蛋白水平。结果与常氧组比较,低氧组和Ad-βGal+低氧组PAEC的3H-TdR掺入量均显著升高(P<0.01);与低氧组比较,Ad-Gax+低氧组PAEC的3H-TdR掺入量均明显降低(P<0.01)。与常氧组比较,低氧组和Ad-βGal+低氧组PAEC上清中的VEGF和ET-1水平均显著升高(P<0.01),而eNOS含量明显降低(P<0.01);与低氧组比较,Ad-Gax+低氧组PAEC上清中VEGF和ET-1水平均明显降低(P<0.01),而eNOS水平显著升高(P<0.01)。结论低氧诱导PAEC异常增殖加速,而此时增强Gax基因表达可抑制细胞异常增殖;低氧上调PAEC中VEGF和ET-1含量,下调eNOS含量,而增强Gax表达可以逆转这种现象。

缺血性脑损伤及修复过程中cpg15基因的表达调控的初步研究

cpg15（candidate plasticity-related gene 15）是一种在神经组织中特异表达的神经可塑性相关基因，它所编码的CPG15蛋白在神经功能的多个方面，包括：在神经发育和神经重塑过程中具有促进神经突起生长和突触成熟、防止神经细胞凋亡等重要作用。我们已有的研究表明，该基因的表达在缺血性脑损伤及修复中受到显著调控，提示基因表达水平的调控与其在缺血性脑损伤及修复中的功能有关。

神经系统显著表达的丝氨酸/精氨酸富集蛋白1在小鼠大脑发育过程中的表达与分布

目的：研究神经系统显著表达的丝氨酸/精氨酸富集蛋白1（NSSR1）在中枢神经系统中的表达情况,比较在小鼠发育过程中NSSR1在中枢神经系统中的表达差异.方法：收集不同胎龄的胎鼠中枢神经系统样本以及不同生长时期的小鼠大脑样品,通过蛋白质印迹法检测NSSR1蛋白在各样品中的表达量,通过免疫组织化学法检测NSSR1在小鼠大脑不同部位发育过程中的表达分布.结果：小鼠中枢神经系统中NSSR1的蛋白表达量在胚胎期9~14 d期间显著增加,其相对表达量从0.186增加至0.445,在出生后则一直维持着比较高水平的表达.免疫组织化学法分析结果显示,在胚胎期12 d的胎鼠中,NSSR1蛋白表达集中在室管膜外侧的套层和边缘层中,在室管膜层中未见表达.在新生小鼠和成年小鼠大脑中NSSR1的表达存在差异：在大脑海马中,成年小鼠NSSR1的表达显著增强,而新生小鼠NSSR1的表达较低;在小脑中,成年大鼠的NSSR1广泛分布在小脑皮质包括浦肯野氏细胞、颗粒细胞等神经元细胞中,而新生鼠的NSSR1主要在浦肯野氏细胞中表达.结论：NSSR1在小鼠大脑中的表达受到发育调控.

淫羊藿苷延长秀丽线虫寿命与机制

目的探讨淫羊藿苷（Icariin，Ica）对秀丽线虫寿命的干预效果与机制，为筛选延缓衰老、延长寿命的药物提供实验依据。方法将秀丽线虫分为空白对照组、Ica5mg／L、10mg／L、15mg／L、20mg／L各剂量干预实验组，观察在Ica不同梯度剂量作用下秀丽线虫寿命的变化，以明确Ica作用的最佳剂量。接着设立秀丽线虫空白对照组和Ica（15mg／L）干预组，评价Ica对秀丽线虫平均寿命、生殖能力的干预效果；同时进行急性热应激和急性氧化应激实验，观察应激时线虫的平均生存时间，探讨Ica延长线虫寿命的机制。结果15mg／L的Ica是延长秀丽线虫寿命的最佳剂量。Ica组线虫的平均寿命明显长于空白对照组[（31．87±4．46）d vs．（20．13±2．81）d]（P〈0．01）；Ica组线虫生殖高峰期子代数目比空白对照组显著增加（151±21．13VS．122±17．09，P〈O．01）；急性热应激实验和急性氧化应激实验发现Ica组线虫平均生存时间均明显长于空白对照组[（9．53±1．34）hVS．（5．97±0．84）h，（8．34±1．17）hvs.（5．77±O．81）h]（P〈0．01）。结论淫羊藿苷能延长秀丽线虫的寿命，其机制可能与淫羊藿苷提高线虫的应激能力有关。

NCAM L1小基因模型的建立及其剪接模式研究

目的:建立可用于前体mRNA可变剪接分析的NCAM L1小基因模型。方法:以人基因组DNA为模板,通过PCR扩增获得NCAM L1小基因片段,并将其克隆至真核表达载体中,构建小基因的质粒。在此基础上,用NCAM L1小基因模型转染HeLa、COS-1、PFSK及R28细胞,并用RT-PCR进行被剪接的小基因产物的半定量检测。结果:NCAM L1小基因在4种细胞中的剪接模式不同,在PFSK以及Hela细胞中,存在2种剪接亚型,而在COS-1以及R28细胞中只有一种剪接亚型存在。结论:所构建的NCAM L1小基因可用于细胞水平的基因剪接分析。

Gax基因双向调节低氧性肺动脉内皮细胞增殖及影响HIF-1α基因表达的研究

目的观察Gax基因对低氧性肺动脉内皮细胞(PAECs)增殖和低氧诱导因子-1α(HIF-1α)基因表达的影响,为进一步研究Gax基因调节低氧性肺动脉高压(HPH)的作用与机制奠定基础。方法取大鼠肺动脉,用酶消化法获取PAECs并进行原代培养;PAECs分4组:未转染常氧对照组(常氧组)、未转染低氧处理组(低氧组)、Ad-βGal转染再行低氧处理组(Ad-βGal+低氧组)、Ad-Gax转染再行低氧处理组(Ad-Gax+低氧组)。分别在常氧(21%O2)和低氧(2.5%O2)1 h、3 h、6 h和12 h各时相点,采用3H-胸腺嘧啶核苷(3H-TdR)掺入法检测PAECs增殖;使用RT-PCR和Western blot方法分别检测PAECs中HIF-1αmRNA和蛋白表达水平。结果①PAECs的3H-TdR掺入量:与常氧组同时相点比较,低氧组和Ad-βGal+低氧组均显著升高(P均<0.01),在低氧6 h达最大值;Ad-Gax+低氧组与常氧组同时相点比较均显著升高(P均<0.01),但与低氧组比较却均明显降低(P<0.01、P<0.05),到低氧6 h降幅最大;②在低氧处理6 h,与常氧组比较,低氧组和Ad-βGal+低氧组HIF-1αmRNA和蛋白表达均明显上调;与低氧组或Ad-βGal+低氧组比较,Ad-Gax+低氧组HIF-1αmRNA和蛋白表达皆显著下调,差异有统计学意义(P<0.05、P<0.01)。低氧早期内皮细胞异常增殖加速,而此时增强Gax基因的表达可抑制细胞的异常增殖;随着低氧时间的不断延长,细胞增殖受到抑制,而此时增强内皮细胞中Gax基因表达却又促进细胞增殖,以此来维持细胞的数量。结论 Gax基因对维持内皮细胞数量的稳态具有双向调节作用。增强Gax基因的表达能下调低氧诱导的HIF-1αmRNA和蛋白表达,这可能与Gax基因抑制低氧性内皮细胞异常增殖的机制相关。

慢病毒介导环状RNA mmu-circ-0001033过表达抑制低氧性小鼠肺动脉平滑肌细胞增殖的实验研究

目的探讨慢病毒介导环状RNA mmu-circ-0001033过表达对低氧性小鼠肺动脉平滑肌细胞增殖的影响,为环状RNA防治低氧性肺动脉高压(HPH)提供实验依据。方法体外原代培养小鼠肺动脉平滑肌细胞(PASMC),并随机分为4组:常氧组、低氧组、mmu-circ-0001033过表达慢病毒转染+低氧组、空白载体慢病毒转染+低氧组。体外构建环状RNA mmu-circ-0001033过表达慢病毒载体,转染PASMC。运用qRT-PCR技术检测各组PASMC中mmu-circ-0001033的表达水平,采用CCK-8法检测各组PASMC增殖,对各组的指标值进行统计学比较和分析。结果低氧处理导致PASMC中mmu-circ-0001033的表达明显下调,且呈时间依赖性;与对照组比较,慢病毒转染组中mmu-circ-0001033表达显著上调(P<0.05),提示mmu-circ-0001033过表达慢病毒成功转染入PASMC,且并高效表达;与常氧组比较,低氧组和空白载体慢病毒转染+低氧组PASMC增殖明显增多(P<0.05),而mmu-circ-0001033过表达抑制了低氧对PASMC的促增殖作用。结论过表达的mmu-circ-0001033显著抑制低氧所诱导的PASMC的增殖,为明确mmu-circ-0001033作为HPH防治靶标奠定了实验基础。