固态共培养木霉和芽孢杆菌抗烟草黑胫病及其活性成分研究

为提高棘孢木霉HG1和枯草芽孢杆菌tpb55共培养菌的生物量和抗烟草疫霉活性,构建了两株菌固态共培养体系,并探究了其活性成分。采用菌丝生长速率法评价发酵提取物的抑菌活性,结合发酵后菌量,确定固态共培养的条件;运用正/反硅胶柱层析对活性成分进行追踪分离,使用高效液相色谱(HPLC)和核磁共振(NMR)及ESI质谱,纯化和鉴定活性化合物;通过盆栽试验验证共培养发酵对烟草黑胫病的防治效果。结果表明,两株生防菌固态共培养发酵的初始条件为:枯草芽孢杆菌(10^(6)CFU/mL,接种量3%)接种12 h后再接种棘孢木霉(10^(6)CFU/mL,接种量1.5%);发酵14 d时,枯草芽孢杆菌菌量达到1.58×10^(10)CFU/g,棘孢木霉菌量达到6.75×10^(10)CFU/g,并且提取物的抗菌活性最强,抑制率达到73.25%;从活性组分中分离得到一个单体化合物,鉴定为harziandione。盆栽防病效果表明,采用固态培养基共培养发酵的产物对烟草黑胫病的防效优于单培养,并能够改善土壤理化性质。该研究为烟草黑胫病生防菌剂的研发提供了新的思路和方法。

牛蛙源米尔伊丽莎白菌的分离鉴定与药敏试验

从湖北荆州江陵县患歪头白内障病的牛蛙(Rana catesbeiana)组织中分离病原菌,经生理生化分析和16S rRNA、gyrB基因序列测定鉴定病原菌,并经人工感染试验,进行药敏试验分析,研究其致病性和耐药性。结果显示,从患病牛蛙脑组织中分离纯化到一株优势菌株Mir-N11,经鉴定为米尔伊丽莎白菌(Elizabethkingia miricola)。攻毒试验证实:该分离株对牛蛙有较强的致病能力;该菌株对新霉素、庆大霉素、氯霉素等多种药物耐药,对米诺环素、哌拉西林、多西环素等药物敏感。生长特性试验表明:该分离菌株能产生胞外蛋白酶,不产生淀粉酶;在pH3.0~9.0范围内、盐度0.5%~2.5%范围内均可生长。该研究为牛蛙歪头白内障病害的防控提供了参考。

遵义烟区杂草调查及海洋杂色曲霉提取物除草效果研究

为了开发新型、安全、高效的天然产物除草剂,采用倒置“W”九点取样法和三层三级目测法对贵州省遵义市道真县和余庆县烟田杂草危害情况进行调查,明确优势杂草种类和防治需求;对具有显著除双子叶杂草活性的海洋杂色曲霉Aspergillus versicolor D5进行发酵提取,明确活性成分及含量;进而采用茎叶喷雾法评价D5发酵提取物的田间除草效果。结果表明:(1)道真烟田中共有9科15种杂草发生,以双子叶菊科种类最多,以苋科相对多度值最高,占比高达84.2%,是优势杂草;余庆烟田中共有16科39种杂草发生,危害度为Ⅰ级、Ⅱ级、Ⅲ级的杂草分别有29种、9种、1种,危害度达到Ⅲ级的为双子叶杂草蓼;(2)海洋杂色曲霉D5发酵提取物在10%乙酸乙酯-石油醚洗脱后,采用100%乙酸乙酯洗脱,浓缩后活性物质基本无损失,包含柄曲霉素ST(14.6%)和二氢柄曲霉素DHST(0.4%);(3)田间小区试验发现,D5发酵提取物在低施药量(675 g/hm^(2))下具有显著的除草作用,特别是对双子叶杂草具有明显的抑制效果,以对玄参科杂草婆婆纳Veronica didyma最为显著,鲜质量防效达到61.4%;同时,对狗尾草Setaria viridis和打碗花Calystegia hederacea的鲜质量防效亦达到50%以上。由此可见,海洋杂色曲霉D5发酵提取物抗草谱广,对双子叶杂草除草作用明显,具有开发成为天然产物除草剂的潜力。