组蛋白H3K9ac乙酰化与H3K9me3甲基化修饰对小鼠心脏发育的交互调控作用

目的探讨组蛋白乙酰化和甲基化修饰对心脏发育的交互调控作用,为先天性心脏病的防治提供新的理论基础。方法将24只昆明孕小鼠随机分为胚胎14.5 d(ED 14.5)组、胚胎16.5 d(ED 16.5)组、新生0.5 d(PND 0.5)组及新生7 d(PND 7)组,采集各组胎鼠及新生小鼠心脏,每组检测标本数为6。运用比色法检测心肌组织组蛋白乙酰化酶(HATs)及组蛋白甲基转移酶(HMTs)活性;Western blot法检测心肌组织组蛋白H3第9位赖氨酸乙酰化(H3K9ac)及组蛋白H3第9位赖氨酸三甲基化(H3K9me3)表达水平。结果比色法结果表明:HATs和HMTs活性在出生前均呈现高表达,出生后均呈现低表达;且PND 0.5和PND7时小鼠心肌组织HATs活性与ED 14.5时相比,以及PND 7时小鼠心肌组织HATs活性与ED 16.5时相比差异均有统计学意义(P<0.05);小鼠心肌组织HMTs活性在PND 7时与ED 14.5和ED 16.5时相比差异有统计学意义(P<0.05)。Western blot结果显示:组蛋白H3K9ac和H3K9me3在出生前呈现高表达,出生后呈现低表达,且PND 0.5和PND 7时小鼠心肌组织组蛋白H3K9ac和H3K9me3分别与ED 14.5和ED 16.5时相比差异均有统计学意义(P<0.05)。结论在心脏发育过程中HATs、HMTs及组蛋白H3K9ac、H3K9me3呈现动态表达,提示HATs和HMTs介导的组蛋白H3K9ac乙酰化及H3K9me3甲基化修饰在心脏发育过程中可能发挥了交互调控作用。

床旁超声在PICU重症肺炎患儿诊断中的应用价值

目的探讨床旁超声在儿童重症监护室(PICU)重症肺炎患儿诊断中的应用价值。方法选取2020年1月至2020年12月常德市第一人民医院PICU收治的重症肺炎患儿60例,根据重症肺炎诊断标准,60例均确诊为重症肺炎,均进行了床旁超声检查,观察超声图像结果并记录。结果60例患儿通过床旁超声检查,检出58例重症肺炎,检出率为96.7%,其超声图像表现为:可见B线58例占比100%,胸膜线异常45例占比77.6%,肺实变伴支气管充气征19例占比32.8%,胸腔积液5例占比8.6%,肺滑动征消失3例占比5.2%。结论床旁超声在PICU重症肺炎患儿诊断中准确率高,可作为PICU重症肺炎患儿的诊断工具,应加大力度推动其在重症肺炎诊断中的应用。

P38 MAPK信号通路在漆树酸改善苯肾上腺素诱导的小鼠心肌细胞肥大中的作用

目的:探讨P38丝裂原活化蛋白激酶(P38 mitogen-activated protein kinase,P38 MAPK)信号通路在漆树酸改善苯肾上腺素(phenylephrine,PE)诱导的小鼠心肌细胞肥大中的作用。方法:原代培养新生小鼠心肌细胞,PE诱导心肌细胞肥大。按随机数字表法将细胞分为空白对照组、溶剂对照组、PE组、PE+漆树酸组、PE+漆树酸+P38抑制剂组和PE+P38抑制剂组。收集干预48 h后的乳鼠心肌细胞进行以下检测:Western blot检测p-P38、第9位赖氨酸乙酰化的组蛋白H3(acetylated histone H3 at lysine 9,H3K9ac)和心房钠尿肽(atrial natriuretic peptide,ANP)的蛋白表达水平,免疫共沉淀(co-immunoprecipitation,Co-IP)法验证p-P38与H3K9ac蛋白之间的相互作用,RT-qPCR检测肌细胞增强因子2C(myocyte enhancer factor 2C,MEF2C)mRNA表达水平,免疫荧光染色观察小鼠心肌细胞表面积。结果:Western blot及RT-qPCR结果表明小鼠心肌细胞中p-P38和H3K9ac水平在PE组显著高于空白对照组(P<0.05),心脏核心转录因子MEF2C及心肌肥厚标志物ANP表达水平在PE组显著高于空白对照组(P<0.05);而在PE处理的心肌细胞中,P38抑制剂和漆树酸能够显著降低p-P38和H3K9ac水平,且MEF2C转录水平及ANP蛋白表达水平在PE+P38抑制剂组和PE+漆树酸组也较PE组显著降低(P<0.05);Co-IP结果表明p-P38与H3K9ac存在相互调控关系;免疫荧光结果表明,与空白对照组相比,PE组心肌细胞表面积显著增大(P<0.05),而P38抑制剂和漆树酸干预后能显著降低PE诱导的心肌细胞肥大(P<0.05)。结论:漆树酸能改善PE诱导的心肌细胞肥大,其作用机制可能与调节P38 MAPK信号通路介导的组蛋白乙酰化修饰失衡有关。

雌激素对H_2O_2所致N2a细胞损伤的保护作用

目的探讨雌激素对氧自由基（H2O2）所致野生型鼠成神经瘤细胞株（N2a）损伤的保护作用及机制。方法应用H2O2制作N2a细胞凋亡的细胞模型,采用细胞计数、酶组织化学、免疫细胞化学方法,检测在雌激素作用下,神经细胞的形态结构、细胞活性和细胞早期凋亡的相关性变化。结果细胞计数结果显示,雌激素组的细胞数量[（0.60±0.12）个/mL（×104）]高于其它组,雌激素加H2O2组的细胞数量[（0.51±0.11]×104个/mL）明显高于H2O2组[（0.30±0.09）×104个/mL],组间差异有统计学意义（P<0.05）。免疫细胞化学染色显示,Akt1阳性反应在雌激素组最强,在H2O2组最弱,但雌激素加H2O2组与正常对照组Akt1的表达没有明显差别,介于两者之间。Fasl呈相反变化。Caspase3酶活性检测结果显示,H2O2组Caspase3酶活性最高,雌激素加H2O2组Caspase3酶活性明显降低,其差别有统计学意义（P<0.01）。结论雌激素有促进N2a细胞生长的作用,并可保护H2O2对N2a细胞的损伤且可以对抗凋亡。

孕期饮酒介导的组蛋白低甲基化对子代心脏发育基因过表达的影响

目的:探讨组蛋白甲基化修饰失衡在孕期酒精暴露致子代心脏发育相关基因表达异常中的作用及其机制。方法:选取健康昆明小鼠,于孕期0.5 d开始给予56%乙醇(5 mL/kg)灌胃,同时给予G9a-组蛋白甲基转移酶(histone methyltransferase, HMT)抑制剂BRD4770(1 mg/kg)灌胃,于胚胎14.5 d、胚胎16.5 d和新生0.5 d收集子代小鼠心脏。RT-qPCR检测心脏发育相关基因Gata4、Cx43和β-MHC的mRNA表达水平,比色法检测HMT活性,Western blot检测小鼠心肌组织组蛋白H3K9me3、G9a-HMT、Cx43及β-MHC的表达水平。结果:比色法结果表明,孕期酒精暴露的子代小鼠心肌组织中HMT活性与生理盐水对照组相比显著降低(P<0.05);Western blot结果表明酒精组小鼠心肌组织中G9a-HMT及组蛋白H3K9me3表达水平与生理盐水对照组相比显著降低(P<0.05);RT-qPCR结果显示Gata4、Cx43和β-MHC的mRNA表达水平在酒精组显著升高(P<0.05),且Western blot结果也表明酒精组Cx43和β-MHC蛋白水平显著高于生理盐水对照组(P<0.05)。同时,G9a-HMT特异性抑制剂BRD4770能够进一步降低小鼠心肌组织中组蛋白H3K9me3甲基化水平(P<0.05),且Gata4 mRNA表达水平及Cx43和β-MHC的转录和翻译水平在抑制剂干预组较酒精组显著升高(P<0.05)。结论:G9a-HMT介导的组蛋白甲基化修饰失衡可能参与了孕期酒精暴露所致的子代心脏发育相关基因表达异常。

ERK信号通路介导的EP300过表达在苯肾上腺素诱导小鼠心肌细胞肥大中的作用

目的:探讨细胞外信号调节激酶(ERK)信号通路介导的E1A结合蛋白p300(EP300)过表达在苯肾上腺素(PE)诱导的小鼠心肌细胞肥大中的作用。方法:原代培养新生小鼠心肌细胞,按照随机数字表法分为:正常组、生理盐水(NS)组、PE组、溶剂对照组、漆树酸(AA)组、ERK抑制剂组和AA+ERK抑制剂组。收集干预48 h的小鼠心肌细胞,采用Western blot检测ERK、第9位赖氨酸乙酰化的组蛋白H3(H3K9ac)和β-肌球蛋白重链(β-MHC)的蛋白表达水平;RT-qPCR检测心肌细胞肥大标志物β-MHC的mRNA表达水平;免疫共沉淀验证EP300与H3K9ac之间的调控关系;免疫荧光染色及Western blot检测心肌细胞中EP300的表达水平。结果:Western blot结果表明小鼠心肌细胞中H3K9ac水平在PE组显著高于生理盐水对照组(P<0.05);Western blot及免疫荧光结果表明PE组EP300表达水平显著高于生理盐水对照组(P<0.05);免疫共沉淀结果表明EP300与H3K9ac之间能够相互结合;PE组p-ERK蛋白水平及β-MHC的mRNA和蛋白水平均显著高于NS组(P<0.05);而ERK抑制剂组及AA组EP300、H3K9ac、β-MHC及p-ERK水平均显著低于PE组(P<0.05)。结论:EP300介导的H3K9ac高乙酰化参与了PE诱导的小鼠心肌细胞肥大,而ERK信号通路可能是AA减轻PE诱导的心肌肥厚的信号通路之一。

表没食子儿茶素没食子酸酯改善苯肾上腺素诱导的小鼠心肌细胞肥大

目的探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(Epigallocatechin gallate,EGCG)通过抑制组蛋白去乙酰化酶(Histone deacetylases,HDACs)减轻苯肾上腺素(Phenylephrine,PE)诱导的小鼠心肌细胞肥大,为临床防治肥厚性心肌病提供新的理论依据。方法酶消化法分离获得小鼠心肌细胞,并将细胞随机分为正常组、PE组、溶媒组和EGCG组。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)及Western blot检测心脏核心转录因子GATA结合蛋白4(GATA binding protein 4,GATA4)mRNA及蛋白表达量,Western blot检测心肌肥厚标记物心房钠尿肽(Atrial natriuretic peptide,ANP)、β-心肌肌球蛋白重链(Beta myosin heavy chain,β-MHC)及HDAC2蛋白表达量,比色法检测HDAC2活性,免疫荧光检测心肌细胞表面积。结果与正常组比较,PE组HDAC2蛋白表达量及活性均显著升高(P<0.01),心脏核心转录因子GATA4蛋白及mRNA表达量均显著上调(P<0.01),心肌肥厚标记物ANP、β-MHC蛋白表达量显著上调(P<0.01),心肌细胞表面积明显增大(P<0.01);与PE组比较,EGCG组中HDAC2蛋白表达量及活性均显著降低(P<0.01),心脏核心转录因子GATA4蛋白及mRNA表达量均显著下调(P<0.01),心肌肥厚标记物ANP、β-MHC蛋白表达量明显下调(P<0.01),心肌细胞表面积显著减少(P<0.01)。结论EGCG可能通过调控HDAC2的表达进而改善苯肾上腺素诱导的小鼠心肌细胞肥大。