农杆菌子房注射法对棉花的活体转化

采用根癌农杆菌直接注射子房,对8个棉花栽培品种进行活体方式的遗传转化。为了确立注射细菌的适宜时期,先采用含考马斯亮蓝染料的菌液对授粉前3d(-3 DPA,days post-anthesis)至授粉后2d(2DPA)的棉花子房进行注射,观察到细菌(染料)可以在-2 DPA至授粉后24 h之间进入子房。为了避免注射对花柱的损伤并影响授粉,选取授粉后24h已完成受精的子房,利用微量注射器经花柱将10μL约含1000个细菌细胞的农杆菌菌液注入子房。对8个棉花品种转化结果表明,该方法可以有效转化棉花。种子成熟后田间播种,经卡那霉素抗性筛选及PCR(Polymerase chain reaction)分子检测,转基因效率平均为2.78%,转化效率与受体的基因型无明显的相关性,相对组织培养的农杆菌转化法和DNA子房注射法有一定的优势。

长链非编码RNAC6orf176两个转录本在非小细胞肺癌中的表达及意义

目的：探讨长链非编码RNA C6orf176两个转录本C6orf176-TV1和C6orf176-TV2在非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer,NSCLC）中的表达及临床意义。方法：采用实时荧光定量PCR技术检测57例NSCLC组织及配对癌旁组织中C6orf176-TV1与C6orf176-TV2的表达水平,并分析其与临床病理特征的关系。结果：NSCLC组织中C6orf176-TV1表达下调42例,表达上调15例,其表达与肿瘤分化程度有关（P〈0.05）,与性别、年龄、吸烟史、病理类型、TNM分期均无关。C6orf176-TV1表达诊断癌组织与癌旁组织的受试者工作特征（receiver operator characteristic,ROC）曲线下面积（area under curve,AUC）为0.708（95%CI：0.615~0.802）,灵敏度和特异度分别为51%和88%。NSCLC组织中C6orf176-TV2表达下调39例,表达上调的18例,其表达与肿瘤分化程度有关（P〈0.05）,与性别、年龄、吸烟史、病理类型、TNM分期均无关。C6orf176-TV2表达诊断癌组织与配对癌旁组织的ROC的AUC为0.64（95%CI：0.531~0.749）,灵敏度和特异度分别为49%和75%。57例标本中C6orf176-TV1与C6orf176-TV2同时上调或下调的标本有53对,其相关系数为0.99。结论：C6orf176-TV1与C6orf176-TV2在NSCLC组织中均表达下调,其与肺癌肿瘤细胞分化程度相关,可作为NSCLC的诊断指标。

烟草WS38生长素结合蛋白基因cDNA的克隆及序列分析

以烟草WS38为材料,根据GenBank中登录的烟草生长素结合蛋白(ABP1)氨基酸序列设计引物,通过RT-PCR克隆了烟草WS38ABP1基因cDNA分子编码区,序列全长为564bp,可编码1条188个氨基酸的多肽.利用ClustalX软件对该序列翻译获得的多肽序列与报道的烟草生长素结合蛋白氨基酸序列比较,两者同源性为98.4%,存在2个氨基酸的差异,但差异氨基酸对ABP1结构和功能影响微弱.认为克隆的cDNA序列即为烟草WS38ABP1cDNA,不同品种烟草ABP1基因存在的核苷酸单位点多态性(SNP)造成了两者氨基酸序列的差异.

抗虫基因在湘杂棉22号F_1与F_2代中的表达及遗传稳定性研究

以转基因抗虫棉湘杂棉22号为研究材料,利用PCR和ELISA检测方法,分析了Cry1Ac基因与NptⅡ基因在F1与F2代材料中的表达及遗传稳定性情况。结果显示,外来抗虫基因在F1代中稳定存在,且稳定表达。F2代检测样本中5%的个体出现基因沉默,表达个体中的表达量存在差异。Cry1Ac基因与NptⅡ基因呈现紧密连锁关系,检测样本中仍有2.4%的个体发生了分离。该结果结合其丰产性可为定株选择稳定转基因抗虫育种材料提供依据。

生长素结合蛋白ABP1基因在棉纤维伸长中的功能

以‘湘杂棉14’为材料,采用RT–PCR方法克隆了棉花ABP1基因全长cDNA序列。序列全长792 bp,与GenBank中陆地棉ABP1基因序列的同源性为99%。半定量分析表明,该基因在棉花叶、花及纤维中都有表达,其中叶中的表达量最高,花和纤维中的表达量稍低。ABP1基因在纤维快速伸长期表达水平较高,纤维发育的其他时期的表达水平较低。将ABP1基因cDNA构建成棉花ABP1过表达载体,并以NPT II作为选择标记,经农杆菌介导转化棉花,获得了6株Kan抗性植株,其中3株ABP1表达水平提高。ABP1过表达植株生长发育正常,但纤维长度变化不显著,说明ABP1棉纤维细胞中提高表达水平对其细胞伸长没有显著作用。

1株产α-半乳糖苷酶乳球菌的分离鉴定及酶学特性

从湘西富含豆粕下脚料土壤中筛选鉴定出1株产α-半乳糖苷酶细菌,对其进行显微形态观察、分子生物学鉴定及酶学特性分析。结果表明,该细菌为球形细菌,革兰氏染色阳性,16S rDNA序列与乳球菌有98%的同源性,可以确定为乳球菌属。细菌产分泌性α-半乳糖苷酶,其胞外α-半乳糖苷酶摇瓶发酵液初酶活为6.21 U/mL,在45℃、pH 5.5时该酶活性表现为最大值。酶的表达受D-棉籽糖的诱导和葡萄糖的抑制,当D-棉籽糖的浓度为30μmol/mL时诱导效果最佳,当葡萄糖浓度为30μmol/mL时对该酶的合成有较明显的抑制作用,表现为糖代谢操纵元的典型调控方式。