六个肥胖相关基因在食蟹猴2型糖尿病不同发病时期的差异表达

2型糖尿病(T2DM)是一种与基因密切相关的高发性代谢性疾病。采用高脂饮食(其中含15%猪油)喂养25只中老年雄性食蟹猴的方法,制备T2DM模型,通过检测血糖与血脂水平确定疾病发展进程,并利用实时PCR对外周血白细胞中的6个肥胖相关基因mRNA表达量进行测定。食蟹猴T2DM在临床前期和临床期口服糖耐量实验(OGTT)2-h血糖值分别为(11.06±6.05)mmol/L和(13.12±2.89)mmol/L,显著高于正常组;空腹血糖在临床期达到最大值,为(7.58±1.56)mmol/L(P<0.01),说明其T2DM模型被成功诱导。但所检测的6个糖尿病肥胖相关基因中只有CDKN2B、IGF2BP2和FTOmRNA表达量与糖尿病发病进程呈正相关,且临床期IGF2BP2和FTO的表达量分别是对照组的65.92倍和4.30倍,差异极显著(P<0.01)。因此,基因CDKN2B、IGF2BP2和FTO可作为食蟹猴糖尿病早期诊断及预后评价的参考指标。

食蟹猴的基础血糖值调查

目的调查圈养食蟹猴基础血糖值情况。方法采用快速血糖仪对153只6～19岁雄性食蟹猴和87只6～24岁雌性食蟹猴的血糖进行测定。结果不同性别的食蟹猴血糖值存在显著性差异(P<0.05),其中雌性食蟹猴血糖平均值为4.09mmol/L±1.03mmol/L,雄性食蟹猴血糖平均值为3.32mmol/L±0.59mmol/L;不同年龄段的食蟹猴血糖值差异显著(P<0.05),年龄大的食蟹猴血糖值比年龄小的食蟹猴血糖值整体较高;体重指数与基础血糖值之间无显著相关性。结论食蟹猴基础血糖值与人类基础血糖值相比,水平较低;性别和年龄是影响食蟹猴血糖值的主要因素。食蟹猴基础血糖值调查为糖尿病动物模型的建立及其相关研究提供了有关血糖值的基础数据参考。

2型糖尿病相关基因在人和食蟹猴外周血白细胞中的表达模式

2型糖尿病(T2DM)是一种多因素相关的复杂的代谢性疾病。采用实时PCR技术了解51个T2DM相关基因mRNA在健康和糖尿病人/食蟹猴外周血白细胞中的表达模式。结果表明,与健康组相比,糖尿病猴中有34个基因表达量差异显著(P<0.05),约为66.7%,其中24个基因表达上调(P<0.05);而糖尿病人中有26个基因表达量差异显著(P<0.05),约为50.1%,其中16个基因表达上调(P<0.05),这些基因表达受到糖代谢、脂肪代谢、炎症等方面的影响。糖尿病人与食蟹猴样本中有18个基因都存在差异性表达(P<0.05),表达模式基本一致。因此,食蟹猴可以作为研究糖尿病的较理想的模式动物,外周血白细胞基因的表达模式可以为糖尿病早期诊断和预后评价提供重要指标。

自发性与膳食诱发性食蟹猴2型糖尿病其相关基因的表达比较

采用荧光定量PCR技术对自发性和膳食诱发性T2DM食蟹猴外周血白细胞中36个糖尿病相关基因的表达水平进行分析。在36个基因中,糖尿病组的G6PC、CCR2B、CTLA4等19个基因的表达量与对照组相比存在显著差异(P<0.05),且这些基因在诱发组和自发组中的表达模式基本一致。36个基因中,诱发组基因的表达量普遍高于自发组,但大部分基因表达量在两组中差异不显著,表明诱发性和自发性食蟹猴T2DM模型均可作为糖尿病研究较理想的动物模型。因此,通过高能量膳食诱导的食蟹猴糖尿病模型可以替代自发的糖尿病猴,且基因表达量的变化可为疾病的诊断和治疗提供帮助。

动脉粥样硬化相关基因在高血脂食蟹猴中的差异表达

目的研究高血脂与动脉粥样硬化基因的相关性,从中筛选动脉粥样硬化早期诊断基因。方法采用温和的动脉粥样硬化膳食(0.22 mg胆固醇/卡路里,40%的能量来源于脂肪)单笼喂养中老年雄性食蟹猴,膳食诱导12个月后,从膳食诱导实验猴中筛选出10只高血脂猴。然后采用荧光定量PCR方法检测对照组和高血脂组食蟹猴外周血白细胞内113个动脉粥样硬化相关基因的表达差异。结果在食蟹猴外周血白细胞内共检测到66个动脉粥样硬化相关基因,其中18个基因随血脂升高表达显著上调(P<0.05),21个基因表达显著下调(P<0.05),另外还有27个基因无表达差异(P>0.05)。结论以上结果为后续大样本相关研究缩小了基因遴选范围,通过进一步研究可能从中筛选出基因表达水平上的动脉粥样硬化早期诊断指标。

食蟹猴心血管病风险因素与心血管病相关基因在外周血白细胞表达的相关性

研究心血管病风险因素和心血管病相关基因表达的相关性有助于心血管病风险预警和早期诊断研究。该文采用温和的动脉粥样硬化膳食(0.053mg胆固醇/千焦、40%的能量来源于脂肪)喂养中老年雄性食蟹猴(Macaca fascicularis)(12个月),根据传统心血管病风险因素筛选低、高风险食蟹猴,然后采用荧光定量PCR技术检测113个心血管病相关基因在正常组、低风险和高风险组食蟹猴外周血白细胞内的表达差异。结果在食蟹猴外周血白细胞中共检测到65个心血管病相关基因,其中低、高风险组有16个基因相对于正常组表达上调(P<0.05),19个基因表达下调(P<0.05),另外,还有15个基因表达模式特异(P<0.05)。此外,还检测到42个心血管病相关基因在人和食蟹猴外周血白细胞内均有效表达,其中22个基因在两者之间表达模式一致。上述结果为进一步研究心血管病风险预警和早期诊断指标,缩小了基因遴选范围。

中老年食蟹猴群中糖尿病相关基因的表达状态

该研究选择10岁以上健康中老年食蟹猴138只,按空腹血糖值(FPG)将其分为低血糖组、血糖正常组和高血糖组。采用全自动血液生化仪分别检测各组血清中总胆固醇(TCHO)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)的水平变化;采用荧光定量PCR分析食蟹猴外周血白细胞中37个糖尿病相关基因的mRNA表达情况。结果表明,血清血脂水平HDL-C、LDL-C、TCHO和TG都与FPG分组无显著相关性(P>0.05),而外周血白细胞中ACE、ACLY、PRKCB1、SLC2A4、SNAP23、VAPA、IGF2BP2、IFNG8个基因的mRNA表达水平随FPG的升高而显著上调(P<0.05)。

盐泽螺旋藻变种Fe—SOD的分离纯化及其分子特征

从盐泽螺旋藻变种(Spirulina subsalsa var. )中分离出Fe—SOD(含铁的超氧化物歧化酶),并研究了其分子特征。结果表明,这种藻类仅含Fe—SOD,无同功酶形式,分子量约35000道尔顿。酶分子为二聚体,两个亚基共用一个铁原子。

欧维婷软膏配伍米索片应用于绝经后妇女取环

目的 探讨欧维婷软膏配伍米索前列醇片在绝经后妇女取环中的效果.方法 对200例绝经后要求取环妇女随机分为欧维婷配伍米索组（实验组）和米索组（对照组）各100例.实验组术前7天予以欧维婷软膏0.5g/d,睡前阴道上药,第8天术前2小时经阴道上米索前列醇片600μg;对照组仅用米索前列醇片600μg,取环术前2小时经阴道上药.观察两组术中宫颈软化情况、疼痛程度、手术时间、取环成功率及药物副反应.结果 两组疼痛程度比较无显著性差异（P〉0.05）;两组在宫颈软化、手术时间及取环成功率方面比较均有显著性差异（χ2=14.788、t=-7.850、χ2=6.213,均P〈0.05）.结论 欧维婷软膏配伍米索前列醇片有协同增效作用,应用于绝经后妇女取环安全、有效,成功率高,是一种值得临床推广使用的方法.

2型糖尿病食蟹猴白细胞NF-κB和IκBα表达相关性分析

比较了食蟹猴2型糖尿病(T2DM)不同发病阶段与正常对照组的空腹血糖值(FPG)、甘油三酯(TG)、胆固醇(CHOL),低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C),高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)在血液中含量,及荧光定量PCR方法测定的NF-κB和IκBα在外周血白细胞中表达量。结果显示,FPG、CHOL和LDL-C随疾病进行呈上升趋势,而HDL-C先上升后下降,血糖血脂值变化表明,在T2DM临床前期就出现脂代谢异常;除IκBα表达量在模型初期显著降低,NF-κB表达量在临床期显著升高外,其他各阶段无差异,基因表达量变化表明,在疾病初期开始启动IκB/NF-κB信号通路,到临床期启动完全。根据以上结果推测,前期低水平炎症反应引起脂代谢异常,而后者又促进前者的发展,至临床期才出现明显炎症状态。

巢式PCR检测食蟹猴和猕猴中SRV和SFV

目的利用巢式PCR方法检测圈养的食蟹猴(Macaca fascicularis)和猕猴(Macaca mulatta)中猴D型逆转录病毒(Simian Type D Retrovirus SRV)和猴泡沫病毒(Simian foamy virus SFV)。方法针对SRV-env和SFV-pol基因的保守区序列设计特异性外引物,然后再设计特异性内引物。将外引物扩增出的片段克隆到PJET1.2blunt载体中作为阳性对照,运用NCBI中BLAST软件比对测序结果。用巢式PCR方法分别检测食蟹猴和猕猴中SRV和SFV。结果发现食蟹猴中SFV感染率为65.2%,SRV感染率为9.5%,猕猴中SFV感染率为60.5%,SRV感染率为12.8%。结论圈养的食蟹猴和猕猴SFV的感染率均较高,SRV感染率很低。

中国恒河猴MHC Ⅰ型部分等位基因的分析

目的对中国恒河猴主要组织相容性复合体(MHC)I型部分基因进行携带情况调查与分析。方法采用序列特异性引物(PCR-SSP)分型方法对华南灵长类动物研究中心繁殖的30只谱系清晰的中国恒河猴(Macacamulatta)的32个MHC I型分子位点进行检测。结果采用的32对引物中,中国恒河猴可检出携带23个MHC I等位基因,但基因携带频率存在很大的差异,由3.57%至82.14%不等。结合遗传谱系分析,判断A1*21和A2*05之间以及B*04和B*30之间可能就是连锁的。结论中国恒河猴携带能控制病毒复制的MHC I型基因位点的频率较高,其基因携带频率与已发表的印度恒河猴携带频率存在明显差异。本研究为促进中国恒河猴在AIDS研究中的应用,以及为建立携带特定MHC I基因实验猴小种群提供了依据。

性成熟前食蟹猴生精细胞的发育进程

目的阐明性成熟前食蟹猴生精细胞的发育进程。方法分别采集性成熟前不同年龄(0岁、0.5岁、1岁、1.5岁、2岁、2.5岁、3岁、3.5岁、4岁)食蟹猴睾丸,制作石蜡切片,进行HE染色和PAS/H染色。根据生精细胞的染色特性,分析性成熟前食蟹猴生精细胞的发育进程,并对食蟹猴精原干细胞进行初步鉴定。结果 HE染色结果显示,1岁及以下食蟹猴生精上皮上生精细胞仅有精原干细胞(包括Ad、At及Ap型精原细胞),1.5岁食蟹猴生精上皮上开始出现B型精原细胞,3岁食蟹猴生精上皮上出现精母细胞,4岁食蟹猴生精上皮上出现从精原干细胞到精子的所有生殖细胞。PAS/H染色结果显示,1～2.5岁食蟹猴Ad型精原细胞胞质呈PAS阳性,At型精原细胞胞质呈PAS弱阳性,Ap型精原细胞胞质呈PAS阴性;其他生精细胞及支持细胞胞质呈阴性;0.5岁及以下,3岁及以上食蟹猴生精细胞的胞质PAS/H染色特性与前者存在差异。结论本文详细阐述了性成熟前食蟹猴生精细胞随年龄增长的渐次性发育模式,并建立了性成熟前食蟹猴精原干细胞原位鉴定的一种新方法,这些研究结果为食蟹猴精原干细胞的其他相关研究奠定了基础。

人类连接蛋白基因Cx26的上游调控部位

人类连接蛋白２６（Ｃｏｎｎｅｘｉｎ ２６，Ｃｘ２６）已被看作乳腺癌上皮细胞中的抑瘤基因候选者．为了阐明此基因的调控机理，对其转译起始点上游的一个具有启动功能的１．６ ｋｂ 片段采用ｅｘｏ Ⅲ构建１０个单向删除重组体后进行了ＣＡＴ报告基因分析．结果表明，此１．６ ｋｂ 片段其启动子功能部位位于５′端２００ ｂｐ 范围内．其中含有－ＴＧＴ盒（位于１８２～１８７ ｂｐ），一个ＴＴＡＡＡＡ 盒位于１５８～１６３ ｂｐ，这是人类Ｃｘ２６基因的又一启动区，这些发现无疑地对了解和阐明Ｃｘ２６基因在乳腺发育过程中及其病理生理作用的复杂调控具有特别重要的意义．

真核基因的快速克隆及表达

以细胞间隙连接蛋白基因Cx2 6作为目的基因 ,通过T -A载体介导 ,构建真核表达重组载体pcDNA3 1(+) /Cx2 6 ,重组表达载体转染人鼻咽癌细胞株HNE1,表达Cx2 6间隙连接蛋白。

非人灵长类动物精原干细胞研究进展

精原干细胞(spermatogonial stem cells,SSCs)是维持精子发生的一类干细胞,由于与人亲缘关系的相近性,使得开展非人灵长类动物SSCs研究具有重要的理论意义和比较医学价值。本文综述了非人灵长类动物SSCs的生物学特性、鉴定方法、冷冻保存、移植及生精细胞缺失模型建立等方面的研究进展。

IκBα低表达转基因小鼠的建立及其表达调控

目的构建IκBα低表达转基因小鼠并分析IκBα的表达调控机制,为体内考察IκBα基因的整体效应提供基础。方法构建转基因构件RV-IκBα-Loxp-Mut-Neo载体,将线性化载体电转入胚胎干细胞,Southern blot筛选阳性克隆,再将阳性克隆进行显微囊胚注射,获得嵌合鼠,嵌合鼠与C57BL/6N交配获得F1代杂合型IκBα knockin小鼠。纯合型IκBα knockin小鼠与Ella Cre鼠杂交,其后代自交获得删除Loxp位点区间的IκBα knockout纯合型小鼠,PCR分别鉴定基因型。Western blot检测转基因小鼠各器官IκBα的表达情况,以正常野生C57/B6小鼠为对照。结果经PCR方法鉴定得到IκBα knockin和IκBα knockout转基因小鼠;Western blot结果显示与野生型小鼠相比,F2代IκBα knockin纯合型小鼠的脾、胸腺、肺等器官中IκBα的表达量降低,在IκBα knockin杂合型小鼠中,除上述器官外,皮肤、鼻咽、胃等器官中突变型染色单体IκBα的表达量也比野生型低;F2代IκBα knockout小鼠多数器官中IκBα的表达量低于正常野生C57/B6小鼠。结论成功建立了在多数器官低表达IκBa的转基因鼠;其中κB位点可能参与调控胸腺、脾、肺、鼻咽、皮肤、胃等器官中IκBa的表达,而其上游3 kb调控序列可能参与调控肝、鼻咽、胃、胰腺、小肠等器官中IκBa的表达。

中老年食蟹猴群体自发型糖尿病的筛选

筛选440只中老年偏胖食蟹猴群体中自发糖尿病个体,并探讨食蟹猴群体中糖尿病粗筛的方法。以调查基础血糖值为基础,推断疑似糖尿病血糖值,后经OGTT(口服糖耐量)和尿检结果验证该血糖值是否准确。结果显示中老年偏胖食蟹猴群体血糖值为(3.88±0.98)mmol/L,其中56只食蟹猴血糖值大于5.0mmol/L,被初步定为糖尿病个体。这些个体全部糖耐量异常,且36只(69.23%)出现尿糖阳性,证明血糖值大于5.0mmol/L可作为本群体食蟹猴糖尿病的粗筛标准。由于针对中老年偏胖食蟹猴群体,患病率为12.72%(56/440),高于我国糖尿病患病率(9.7%)。虽然该实验的糖尿病血糖指标并不适用于所有食蟹猴群体,但是该筛选的流程简单快捷,对动物损伤小,可适用于大群体糖尿病的筛选。

高能量膳食诱导食蟹猴2型糖尿病模型的研究

为构建食蟹猴T2DM进程序列模型,将36只食蟹猴分为4组,分别采用标准基础膳食和高能量膳食(高糖膳食、高脂膳食和高糖高脂膳食)进行诱导,每6个月测量体重、血液生化指标、口服糖耐量和尿检试验。结果显示,高能量膳食组的血糖、血脂水平与初期相比,都有显著升高。其中高糖组的T2DM发病进程较快,高糖高脂组的发病进程相对较慢,但发病进程大致相同。在T2DM临床期之前,不同膳食组在相同发病阶段血脂水平存在差异,至临床期差异消失。根据结果可得,不同膳食成分的高能量膳食均能诱发食蟹猴T2DM进程序列模型,该序列模型是模拟自发型糖尿病发病机理构建的较理想T2DM动物模型。

人鼻咽癌相关的转化基因Tx表达调控区的功能分析

采用ＣＡＴ报告基因分析法检测Ｔｘ２．８ｋｂ中基因表达潜在启动序列的启动功能。结果表明，该潜在启动序列没有启动功能。提示与ＩＧＫＣ同源的Ｔｘ２．