葡萄糖在牛体外受精及胚胎发育中的影响

在牛精子获能液中添加不同浓度的葡萄糖,应用体外培养技术对牛精子体外获能及早期胚胎发育进行研究,通过观察顶体反应、超激活、活率和早期胚胎发育率,筛选出获能液中最适葡萄糖浓度及其有利于牛早期胚胎发育的最佳浓度。结果表明:葡萄糖是精子获能和维持超激活运动的主要能源物质,其代谢过程中产生的活性氧在牛精子体外获能、受精过程中起重要作用,高浓度(超过9.15mM)葡萄糖有利于获能的完成;但是对早期胚胎发育不利,对早期胚胎发育来说其最适添加量为6.10mM,此时的囊胚率最高。

不同共培养体细胞和胎牛血清浓度对牛体外受精后早期胚胎的影响

利用屠宰黄牛的卵母细胞经体外成熟(IVM)、体外受精(IVF)后的早期胚胎,与单层颗粒细胞(GC)、输卵管上皮细胞(BOEC)等体细胞共培养及在胎牛血清的胚胎培养液中的后续发育进行了研究,并探讨了其影响因素,以期筛选出最佳的体外培养条件。结果表明:使用GC和BOEC体外共培养牛体外受精后胚胎,均取得了较好的囊胚发育率;且牛体外受精后早期胚胎体外培养体系中,添加10%血清能有效地促进牛体外受精后胚胎的囊胚率。

β-巯基乙醇或牛磺酸对牛体外受精后早期胚胎的影响

对屠宰黄牛的卵母细胞经体外成熟（IVM）、体外受精（IVF）后的早期胚胎,在β-巯基乙醇（β-ME）或牛磺酸等添加物的胚胎培养液中的后续发育进行了研究,并探讨了其影响因素,以期筛选出最佳的体外培养条件。试验结果表明：4-8细胞期添加β-ME可显著提高胚胎桑椹胚、囊胚发育率和囊胚细胞数,但不能改善孵化囊胚的质量。在体外发育培养液中添加7mM牛磺酸可显著提高桑椹胚率和囊胚率（P〈0.05）,并且在4-8细胞期添加牛磺酸最为合适。

牛精子体外获能的研究进展

文章从精子体外获能的分子机制和体外获能的影响因素等两个方面对牛精子体外获能的发展现状作了比较全面的概括,同时指出了各种处理精子方法的优缺点,并指出了牛精子体外获能的研究价值和意义。

牛早期胚胎体外培养的研究进展

本文就目前牛早期胚胎体外培养的常用基础培养液、牛早期胚胎的体外培养方法以及影响牛早期胚胎发育的一些常规添加成分的发展现状作了比较全面的概括,并指出了体外培养体系的研究价值和意义。

猪卵母细胞冷冻技术研究进展

综述了猪卵母细胞的冷冻保存方法和解冻方法,同时对保存效果、影响保存的因素、保护剂的选择等进行探讨。最后,展望了猪卵母细胞冷冻技术的应用前景。

昆明小鼠胚胎移植技术的研究

目的研究不同时期胚胎对胚胎移植成功率的影响,以提高胚胎移植率。方法采用经超数排卵的KM雌鼠与正常615雄鼠交配,取受精卵,分别将1-细胞胚、2-细胞胚和桑椹胚、囊胚分别移入发情的假孕KM雌鼠的输卵管和子宫中,妊娠产仔。结果移入1-细胞胚、2-细胞胚、桑椹胚和囊胚的假孕母鼠妊娠率分别为36.36%、42.86%、10%、27.27%,产仔率分别为46.58%、38.46%、58.33%、60%。结论2-细胞胚的移植可提高小鼠的胚胎移植成功率,子宫移植可提高小鼠的产仔率。

巢式PCR法鉴定猪早期胚胎性别的研究

根据猪SRY基因序列设计合成2对巢式PCR引物作为性别鉴定引物,根据猪β-珠蛋白基因序列设计了一对引物作为内标引物建立了猪胚胎性别鉴定的PCR反应体系。公猪可以扩增出187bp的SRY基因片段和255bp的β-珠蛋白基因片段,母猪只能扩增出255bp的β-珠蛋白基因片段。由于巢式PCR只需3～8个细胞就可以在紫外灯下看到扩增结果,而常规PCR则需要较多的细胞,所以胚胎性别鉴定时使用巢式PCR效果更好。

牛体外成熟卵母细胞的孤雌激活及其胚胎体外培养方法的研究

本试验比较了在SOFaa培养体系下化学激活(5μmol/L离子霉素5min,2mmol/L 6-DMAP 4h)与电激活(1.3 kv/cm,60μs,1次脉冲)方法对囊胚率的影响,结果表明化学激活囊胚率显著高于电激活(12.30%vs 2.4%,p<0.01),而二者的卵裂率(90.61%vs 94.40%)和囊胚细胞数(48.24±13.12vs 38±3.56)均没有显著性差异(p>0.05);同时比较了在SOFaa培养体系下第4天更换添加10%FBS的SOFaa液与在SOFaa液中连续培养7天对囊胚率的影响,结果更换添加FBS的培养液使囊胚率显著降低(3.69%vs 11.64%,p<0.01)。

大豆黄酮在动物营养中的研究与应用

大豆黄酮属异黄酮类植物雌激素,具有弱雌激素样活性,在畜牧生产中作为饲料添加剂,可促进动物生长、增强免疫力和繁殖性能等。文章就大豆黄酮的生理功能及其应用加以综述。

不同蔗糖浓度、供体细胞保存温度和融合温度对小鼠体细胞克隆胚胎发育的影响

以昆明小鼠为实验动物,经过超数排卵后得到卵丘卵母细胞复合体(COCs),以卵丘细胞为核供体细胞,卵母细胞为核受体细胞进行核移植,分析比较了不同蔗糖浓度对小鼠卵母细胞去核时间、去核率及重构胚体外发育的影响,并探讨了供体细胞的保存温度和融合温度对重构胚体外发育的影响。结果表明,各蔗糖浓度组的去核率均达到100%,但3%、4%、5%蔗糖浓度组的平均显微操作时间明显短于0%、1%、2%蔗糖浓度组,而4%和5%蔗糖浓度组的重构胚发育率均显著低于1%、2%、3%蔗糖浓度组;卵丘细胞保存在室温组的细胞融合率和体外发育率均显著高于高温组、低温组及温度变化组;25℃组细胞融合率显著高于37℃组。由此可见,显微操作液中添加3%蔗糖不仅使卵子的核明显,而且大大缩短卵子在体外操作时间,有利于重构胚的体外发育。卵丘细胞的室温保存和室温融合温度更有利于重构胚的体外发育。

供体核和受体胞质在核移植重构胚重编程中的研究进展

供体核和受体胞质是影响核移植重构胚重编程的主要因素。文章讨论了供体细胞中的成熟促进因子、形态、核仁结构、组蛋白变化及其DNA甲基化和受体胞质在核移植重构胚重编程中的作用,并且综述了几种促进核移植重编程的方法。

猪体细胞核移植技术及研究现状

自2000年Polejaeva I A获得第1头克隆猪后,短短几年时间全世界已有10多例成功的报道,使得猪的体细胞核移植有了长足的发展,但目前猪的体细胞核移植效率依然低下,人们对核移植中重编程分子机理的认识知之甚少。简要综述了猪体细胞核移植近年来的研究进展,分析了猪核移植中的技术难点和影响因素。

动物乳腺生物反应器的研究进展

动物乳腺生物反应器(Mammary Bioreactor)是一种利用动物转基因技术在乳腺细胞中表达多肽药物、工业酶、疫苗和抗体等蛋白的技术。该技术具有低投入高产出的特点,其效率是利用以大肠杆菌和动物细胞培养技术的100倍,是一种非常有潜力的高新技术。本文综述了牛乳腺生物反应器的原理、研究进展及其应用。

动物乳腺生物反应器的研究进展

动物乳腺生物反应器(Mammary Bioreactor)是一种利用动物转基因技术在乳腺细胞中表达多肽药物、工业酶、疫苗和抗体等蛋白的技术。该技术具有低投入高产出的特点,其效率是利用以大肠杆菌和动物细胞培养技术的100倍,是一种非常有潜力的高新技术。本文综述了牛乳腺生物反应器的原理、研究进展及其应用。

昆明小鼠成熟卵母细胞冷冻保存的试验研究

试验选用5-6周龄雌性昆明小鼠的成熟卵母细胞，在不同前处理液（10％EG或10％EG＋10％DMSO）中平衡5min，然后在冷冻溶液（EFS30、EFS40、EDFS30或EDFS40）中平衡30s后进行OPS法和SSV法玻璃化冷冻保存。试验结果表明：（1）小鼠成熟卵母细胞的OPS法冷冻保存，用EFS冷冻的卵母细胞解冻后形态正常率为75．8％，激活后卵裂率为47．8％；在EDFS30中冷冻保存，解冻后形态正常率为87．2％，卵裂率为62．0％；在EDFS40中冷冻保存，解冻后形态正常率为86．6％，卵裂率为57．4％，与对照组（99．0％和80．5％）相比，差异极显著（P〈0．01）。（2）小鼠成熟卵母细胞的SSV法冷冻保存，用EFS冷冻的卵母细胞解冻后形态正常率为82．7％，卵裂率为47．1％；在EDFS30中冷冻保存，解冻后形态正常率为91．5％，卵裂率为57．5％；在EDFS40中冷冻保存，解冻后形态正常率最高为85．1％，卵裂率为55．9％，与对照组（99．0％和80．5％）相比，差异极显著（P〈0．01）。（3）OPS法和SSV法冷冻小鼠成熟卵母细胞解冻后形态正常率为86．5％和91．6％，卵裂率为53．8％和55．6％．与对照绢相比。差异极显著（P〈0．01）。

哺乳动物克隆技术的研究进展

本文针对近年来的哺乳动物克隆技术的研究热点,分别从体细胞克隆方法,克隆动物的细胞核重编程,异种克隆及治疗性克隆等方面进行了分析,最后就克隆技术在转基因中的应用进行了总结。

影响核移植后小鼠重构胚存活因素的研究

将不同类型的供体细胞(卵丘细胞、心肌细胞和上皮细胞)的遗传物质注射到去核的MⅡ卵母细胞中,获得各种重构胚胎,以分析对小鼠卵母细胞进行核移植操作获得重构胚过程中的各种影响因素。结果表明,用Gi emas染料将挤出的卵母细胞质染色证实,可以完整地去除MⅡ卵母细胞核。对370个MⅡ卵母细胞进行去核,去核成功率为92.4%,注核成功率为82.1%;给予90 v/mm,80μsec,1次电脉冲刺激,融合率为72.1%;将融合激活后的重组胚转入KSOM培养基中,平均囊胚率达到35.8%。在胚胎重构过程中,出现了核仁显著变大,出现不同数量核仁的现象。通过比较各种重构胚胎体外后续发育,结果卵丘细胞重构胚胎的体外发育率最好。

昆明小鼠未成熟卵母细胞OPS和SSV冷冻保存的比较

目的寻找昆明小鼠卵母细胞冷冻保存效率的新途径。方法选用5～6周龄雌性昆明小鼠的未成熟卵母细胞，在不同前处理液（10％EG或10％EG＋10％DMSO）中平衡5min，然后在冷冻液（EFS30、EFS40、EDFS30或EDFS40）中平衡30s后进行OPS（Open pulled straw）法和SSV（Solid—surface vitrification）法玻璃化冷冻保存。结果小鼠未成熟卵母细胞的OPS法冷冻保存中，用EFS液冷冻的卵母细胞解冻后形态正常率最高为84．4％，成熟率低于16.7％；而在SSV法冷冻保存中，用EFS液冷冻的卵母细胞解冻后形态正常率最高为86.0％，成熟率为46．5％。OPS法和SSV法冷冻小鼠未成熟卵母细胞形态正常率为91．6％和91．4％，与对照组间差异较显著（P〉0.01）；成熟率为42．9％和59.1％，与对照组差异极显著（P〈0．01）。结论多种抗冻保护剂组合使用效果好于单种抗冻保护剂；EDFS冷冻液冷冻保存效果好于EFS，尤其是EDFS30；OPS法可以有效地冷冻保存小鼠未成熟卵母细胞，且新型玻璃化冷冻法SSV法冷冻保存效果优于OPS法。

畜禽集约化生态养殖技术

1．1新建的饲养场，应选择在周围无污染，交通便利，且远离交通要道、居民区、工厂、市场等，地势高燥、背风向阳，水电供应可靠，水源充足．水质良好的地方。