20味中药提取物对无乳链球菌的体外抑菌活性研究

【目的】筛选对无乳链球菌Streptococcus agalactiae具有良好体外抑菌效果的中药．【方法】通过乙醇回流、超声波方法提取20味中药的抗菌活性部位，采用试管二倍稀释法测定黄连Coptis chinensis等20味中药提取物对无乳链球菌的最低抑菌浓度（ Minimal inhibitory concentration ，MIC）和最低杀菌浓度（ Minimal bactericidal concentration ， MBC），并评价抗菌活性较强的几味中药的体外联合抑菌效果．【结果和结论】乌梅Prunus mume、黄连、黄芩Scutel-laria baicalensis、虎杖Polygonum cuspidatum和地榆Sanguisorba officinalis 5味中药提取物对无乳链球菌的MIC范围为7.80～31.25 mg/mL．蒲公英Taraxacum mongolicum、茵陈Artemisia scoparia、秦皮Fraxinus rhynchophylla、艾叶Arte-misia argyi、黄柏 Phellodendron chinense、鱼腥草 Houttuynia cordata、紫花地丁 Violae yedoensis 和白头翁 Pulsatilla chinensis 8味中药提取物的MIC范围为62.50～125.00 mg/mL．何首乌Po．multiflorum、苦参Sophora flavescens、穿心莲Andrographis paniculata、杜仲Eucommia ulmoides、连翘Forsythia suspensa、金银花Lonicera japonica和夏枯草Prunel-la vulgaris 7味中药提取物的MIC范围为250.00～500.00 mg/mL．联合抑菌试验结果表明，黄芩、虎杖、地榆和黄连的联合抑菌指数（FICI）≤1，虎杖、黄芩和地榆的FICI＞2．黄连、黄芩、虎杖和地榆对无乳链球菌均具有很强的体外抗菌活性，地榆、黄连为相加作用，黄连、黄芩和虎杖为协同作用，地榆与黄芩、虎杖为拮抗作用．

黄芩等三味具有抑菌活性中药的最佳提取工艺研究

以浸膏得率、最低抑菌浓度(MIC)值和最低杀菌浓度(MBC)为指标,采用正交设计试验,对黄芩等三味中药有效物质提取工艺进行研究。优选出黄芩等三味中药的最佳提取工艺为:黄连粗粉80%乙醇浓度(8倍量),加热回流提取2次,每次1.5 h;黄芩粗粉55%乙醇浓度(10倍量),95℃加热回流提取3次,每次2 h;虎杖粗粉60%乙醇浓度(5倍量),95℃加热回流提取3次,每次2 h。在最佳提取工艺研究下,黄连、黄芩和虎杖三种提取物浸膏对无乳链球菌的MIC值分别为26.04、5.20、15.60 mg/m L,MBC值分别为26.04、6.50、31.25 mg/m L。此提取工艺操作简便,稳定可行,值得借鉴。

乌梅等20种中药对胸膜肺炎放线杆菌的体外抗菌活性研究

【目的】观察乌梅Fructus mume等20种中药的体外抗胸膜肺炎放线杆菌Actinobacillus pleuropneumoniae活性．【方法】通过乙醇回流、水煎煮和超声波等方法对20种中药进行提取，采用二倍稀释法测定其对胸膜肺炎放线杆菌的体外抗菌活性；并研究抗菌活性较强的几味中药的体外联合抑菌活性．【结果和结论】乌梅、黄连Rhizoma cop-tidis、诃子Terminalia chebula、秦皮Cortex fraxini、地榆Sanguisorbae officinalis、虎杖Polygonum cuspidatum 6种中药提取物对胸膜肺炎放线杆菌的最小抑菌浓度（ Minimal inhibitory concentration ，MIC）范围是6.25～50.00 mg/mL；大青叶Isatis indigotica、茵陈Artemisia capillaris、甘草Glycyrrhiza uralensis和白鲜皮Dictamnus dasycarpus 4种中药提取物的MIC范围是50.00～100.00 mg/mL；黄柏Phellodendron amurense、杜仲Eucommia ulmoides、金银花Lonicera japoni-ca、柴胡Bupleurum chinense、蒲公英Taraxacum mongolicum、板蓝根Baphicacanthus cusia、栀子Gardenia jasminoides和黄芪Astragalus membranaceus等10种中药提取物的MIC＞100.00 mg/mL．联合抑菌试验结果表明，乌梅、黄连、诃子和虎杖两两联合抑菌指数（FICI）≤1，乌梅、虎杖分别与秦皮的FICI＞2．乌梅、黄连、诃子、虎杖、秦皮、地榆对胸膜肺炎放线杆菌均具有较好的体外抗菌活性；乌梅、黄连、诃子和虎杖两两联合为相加、协同作用；秦皮分别与乌梅、虎杖为拮抗作用．

5味中药对鸡白痢沙门氏菌的体外联合抑菌研究

【目的】探讨诃子、虎杖、紫花地丁、夏枯草和何首乌提取物对鸡白痢沙门氏菌的抑制效果。【方法】采用超声波处理、乙醇回流、水浴加热的方法,提取诃子、虎杖、紫花地丁、夏枯草、何首乌5味中药的有效成分,采用二倍试管稀释法分别测定各中药提取物对鸡白痢沙门氏菌的最小抑菌质量浓度(Minimal inhibitory concentration,MIC)和最小杀菌质量浓度(Minimal bactericidal concentration,MBC),并采用肉汤稀释棋盘法,测定中药提取物对鸡白痢沙门氏菌的联合抑菌效果。【结果】诃子、虎杖、紫花地丁、夏枯草、何首乌提取物对鸡白痢沙门氏菌的MIC、MBC值分别为15.60~62.50,15.60~125.00mg/mL(以生药计算)。虎杖、夏枯草、紫花地丁、何首乌与诃子联合用药时,对鸡白痢沙门氏菌的联合抑菌指数(FICI)均为0.25;虎杖与紫花地丁、夏枯草,紫花地丁与夏枯草联合用药时的FICI为1.25~2;何首乌与虎杖、紫花地丁、夏枯草联合用药时的FICI均大于2。【结论】虎杖、夏枯草和诃子提取物对鸡白痢沙门氏菌具有较强的体外抑菌活性。诃子与虎杖、紫花地丁、何首乌、夏枯草联合应用,其抑菌呈协同作用;虎杖与紫花地丁、夏枯草,紫花地丁与夏枯草联合应用,其抑菌呈无关作用;何首乌与虎杖、紫花地丁、夏枯草联合应用,其抑菌呈拮抗作用。

川明参多糖及其硫酸化物对免疫低下小鼠的影响

目的:研究川明参多糖(Chuanmingshen violaceum polysaccharides,CVP)及硫酸化川明参多糖(Solfated chuanmingshen violaceum polysaccharides,SCVP)对免疫低下小鼠部分免疫指标的影响。方法:采用环磷酰胺来诱导小鼠免疫低下;胸腺指数和脾脏指数来衡量免疫器官变化;MTT法检测CVP及SCVP不同剂量对静息期脾脏淋巴细胞、伴刀豆球蛋白A(Con A)处理的脾脏淋巴细胞、脂多糖(LPS)处理的脾脏淋巴细胞增殖活性的影响;血清IFN-γ和IL-2采用ELISA试剂盒检测。结果:CVP和SCVP可以通过提高免疫低下小鼠免疫器官指数、各处理脾脏淋巴细胞增殖活性和血清IFN-γ和IL-2含量,从而提高机体的免疫力。结论:CVP和SCVP可作为免疫增强剂开发应用于临床。

艾叶等20种中药对禽多杀性巴氏杆菌的体外抗菌活性

通过乙醇回流、水煎煮和超声波等方法提取艾叶等20种中药的有效成分,采用二倍稀释法测定其对禽多杀性巴氏杆菌（C48-1,血清型A∶1）的体外抗菌活性;并研究抗菌活性较强的几味中药的体外联合抑菌效果.结果显示,艾叶、黄连、黄柏、秦皮、地榆、虎杖6种中药提取物对巴氏杆菌的最低抑菌浓度值（MIC）范围在6.25-50mg/mL;赤芍、何首乌、茵陈、射干、甘草、蒲公英、白鲜皮7种中药提取物的MIC 值范围在50-100mg/mL;金银花、柴胡、板蓝根、夏枯草、穿心莲、知母、苦参7种中药提取物的MIC值大于100mg/mL.联合抑菌试验结果表明,黄连、黄柏、秦皮、虎杖和艾叶的联合抑菌指数（FICI）≤0.5,黄柏、秦皮、黄连和虎杖的联合抑菌指数（FICI）≥2;秦皮、地榆和黄柏的联合抑菌指数（FICI）≥2.通过以上数据可以看出,黄连、黄柏、地榆、艾叶对巴氏杆菌均具有较好的体外抗菌活性;黄连、黄柏、地榆和艾叶为相加、协同作用;地榆和黄柏为拮抗作用.

中药组方“虎诃紫”的急性毒性试验及对鸡白痢的临床疗效

【目的】探讨中药组方"虎诃紫"的毒性及对鸡白痢沙门菌Salmonella pullorum的疗效.【方法】根据兽药研究技术指导原则,对中药组方提取物进行小鼠灌胃急性毒性试验,同时以人工诱发鸡白痢沙门菌的雏鸡感染模型,按高、中、低(4.20、1.62、0.48 g/d)剂量饮水给药,连续7 d,评价中药组方"虎诃紫"颗粒剂的疗效.【结果和结论】急性毒性试验给药剂量大于5 000 mg/kg,小鼠无死亡,即LD50>5 000 mg/kg,对其进行中药组方提取物最大耐受量的测定,其最大耐受量为40 g/kg;高剂量颗粒剂组治愈率和有效率分别是75.0%和83.3%,中剂量颗粒剂组的治愈率和有效率分别是72.7%和81.8%,低剂量颗粒剂组的治愈率和有效率分别为62.5%和75.0%,而感染对照组的死亡率为40%;χ2检验表明"虎诃紫"颗粒剂高、中剂量组与感染对照组的死亡率差异显著(P<0.05).结果表明:中药组方无毒;高剂量组的治愈率、有效率都高于中、低剂量组,高、中剂量组的死亡率都低于感染对照组,说明高、中剂量组对鸡白痢沙门菌的死亡具有一定的保护作用.

乌梅等三味具有抑菌活性中药的最佳提取工艺研究

优选乌梅等三味具有抗胸膜肺炎放线杆菌活性中药的有效物质提取工艺。以浸膏得率、最低抑菌浓度(MIC)和最低杀菌浓度(MBC)为指标,采用正交设计实验,综合考虑溶剂浓度、料液比、提取次数、提取时间、提取温度等影响因素,对三味中药有效物质提取工艺进行优选研究。优选出的最佳提取工艺为:黄连粗粉70%乙醇浓度(8倍量),加热回流提取2次,每次2 h;乌梅粗粉95%乙醇浓度(10倍量),90℃加热回流提取1次,每次8 h;虎杖粗粉60%乙醇浓度(6倍量),90℃加热回流提取3次,每次2 h。最佳提取工艺下,黄连、乌梅和虎杖三种提取物浸膏对胸膜肺炎放线杆菌的MIC值分别为15.60、10.40、15.60 mg/m L,MBC值分别为26.00、18.20、15.60 mg/m L。

20味中药提取物对鸭疫里默氏杆菌体外抑菌效果的研究

试验旨在筛选得到对鸭疫里默氏杆菌有良好体外抑菌效果的中药。采用超声波处理、乙醇回流、水浴加热等方法提取杜仲等中药的有效部位,用二倍试管稀释法分别测定其提取物对鸭疫里默氏杆菌的最小抑菌浓度(minimal inhibitoryconcentration,MIC)和最小杀菌浓度(minimal bactericidal concentration,MBC),并通过棋盘法测定中药提取物对鸭疫里默氏杆菌的联合抑菌效果。结果表明,杜仲等中药提取物对鸭疫里默氏杆菌的MIC值范围为15.60～250.00mg/mL,其中杜仲、大黄、板蓝根、佛手、秦皮和大青叶的MIC值均为15.60mg/mL,而金银花、姜黄、黄芩、黄芪和紫草MIC值均大于125.00mg/mL;通过联合抑菌研究,结果发现杜仲和秦皮联合具有相加作用,白头翁、杜仲和秦皮联合均表现无关作用,秦皮与大黄联合表现相加作用,白头翁与大黄联合表现颉颃作用。提示,杜仲、大黄、板蓝根、佛手、秦皮和大青叶对鸭疫里默氏杆菌的体外抑菌作用较好,而金银花、姜黄、黄芩、黄芪和紫草对鸭疫里默氏杆菌的体外抑菌作用较差,杜仲、秦皮和白头翁可组成一个具有抑制鸭疫里默氏杆菌作用的中药组方。

CATH-2抑制金黄色葡萄球菌诱导IL-1β分泌的机制研究

为探讨鸡源cathelicidin-2(CATH-2)抑制金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,S.aureus)诱导IL-1β成熟与分泌的机制,采用S.aureus体外感染野生型(WT)小鼠腹腔巨噬细胞的模型,CATH-2预处理巨噬细胞2 h后感染S.aureus,通过ELISA、Real-time PCR和Western blot研究CATH-2对S.aureus诱导IL-1β分泌的影响。ELISA结果显示,CATH-2显著降低了S.aureus诱导的IL-1β、IL-6、IL-1α和IL-12表达水平(P<0.05)。RT-PCR结果显示,CATH-2显著降低了巨噬细胞中S.aureus诱导的IL-1βmRNA表达水平(P<0.05);Western blot结果显示,CATH-2显著降低了巨噬细胞中S.aureus诱导的pro-IL-1β、IL-1β和pro-caspase-1表达水平(P<0.05)。进一步的研究结果显示,CATH-2显著降低了巨噬细胞中S.aureus诱导的NF-κB(p65)和MAPK(JNK1/2)的总蛋白和磷酸化蛋白的表达(P<0.05)。这些结果表明CATH-2通过抑制NF-κB和MAPK信号通路活性抑制炎症小体激活,进而抑制IL-1β分泌。

夏枯草等14味中药对金黄色葡萄球菌的体外抑菌活性

采用索氏提取，超声波和水煎煮方法提取夏枯草等14味中药的有效部位，应用二倍试管稀释法分别测定其提取物对金黄色葡萄球菌的最小抑菌浓度（MIC）和最小杀菌浓度（MBC）。结果显示，夏枯草、虎杖、何首乌、连翘、柴胡、穿心莲、地榆7味中药有效部位对金黄色葡萄球菌的抗菌活性最强，其MIC为1．953～3lI250g／L，MBC为3．90～31．25g／L；佛手、黄柏2味中药有效部位具有较强的体外抗菌活性，其MIC值为62．5g／L，MBC值为125．0g／L；大青叶、板蓝根、金银花、杜仲、白头翁5味中药有效部位的抗菌活性较差，其MIC值为125．0g／L，MBC值为250．0，≥250．0g／L。不同中药有效部位对金黄色葡萄球菌的抗菌活性有所差异，其中夏枯草、虎杖、何首乌、地榆和佛手有效部位对金黄色葡萄球菌具有较好的抗菌活性。

细菌溶血磷脂的生物合成及生物学功能

溶血磷脂(lysophospholipids,LPLs)是细胞膜中的一类脂质代谢中间产物,主要由磷脂分子被水解后生成。LPL的生物学功能与其前体磷脂有明显的区别。在真核细胞中,LPL是一种参与多种胞内生物信号调控的重要活性分子,但在细菌中,LPL的生物学功能还未被充分揭示。LPL通常是细菌细胞膜中的次要组分,在环境压力条件下其含量可显著升高。除了参与细胞膜磷脂代谢,LPL被认为在细菌环境适应性及致病性中发挥重要作用。其在细胞膜中的累积可以显著提高细菌在环境压力下的存活及增殖效率,同时还是细菌感染过程中重要的信号分子。近期有研究表明,LPL可能是细菌新发现的潜在毒力因子。本文因此将结合最新研究数据,对不同种类LPL的从头合成通路以及LPL在细菌抵御环境压力和细菌-宿主互作等方面所发挥的生物学功能进行综述,为对细菌致病机制和防治细菌感染的相关研究提供新的思路和参考借鉴。

宿主防御肽抗病毒感染机制研究进展

宿主防御肽是一类广泛存在于脊椎动物的小分子多肽,具有广谱的抗菌活性以及抗炎、细胞趋化、促进血管生成和修复损伤等免疫调节功能。以往的研究多集中在宿主防御肽抗细菌和真菌感染的研究上。近年来大量研究发现,宿主防御肽也具有广泛的抗病毒活性,在临床各类病毒病的预防和治疗上具有潜在的应用前景。本文围绕宿主防御肽直接杀伤病毒、调节病毒感染过程和参与宿主抗病毒天然免疫调节这3个方面的作用机制进行综述,为宿主防御肽抗病毒相关研究和相关抗病毒生物药物的研发提供参考和借鉴。

金黄色葡萄球菌病防治研究进展

金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,SA)被认为是最常见的食源性致病菌之一,引起人畜的感染性疾病,导致皮肤、软组织和血液感染,引发脓毒症和中毒性休克综合征。随着抗生素的滥用,金黄色葡萄球菌的耐药性逐渐增强,导致耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin resistant Staphylococcus aureus,MRSA)的出现,并且在全球范围内散播,严重危害公共卫生安全。目前亟需有效控制SA感染的新疗法,因此本文对金黄色葡萄球菌防治技术的研究进展进行综述,并对其防治前景进行了分析,以期对金黄色葡萄球菌尤其是MRSA的控制提供理论指导。

基于RNA-Seq技术分析鼠源宿主防御肽对铜绿假单胞菌成熟生物被膜的清除作用

【目的】利用RNA-Seq技术探究修饰后的鼠源宿主防御肽CRAMP对铜绿假单胞菌PAO1成熟生物被膜的影响。【方法】采用结晶紫法检测生物被膜量,激光共聚焦扫描显微镜(CLSM)观察生物被膜形态学变化;利用Illumina二代高通量测序平台,采用PE150测序策略分析了CRAMP修饰肽干预PAO1生物被膜与对照组在转录水平的基因表达差异;利用1,3-萘二酚方法测定了PAO1生物被膜中藻酸盐含量。【结果】CRAMP修饰肽能显著减少PAO1成熟生物被膜量,并且在0.98-62.50μg/mL范围内呈一定浓度依赖性,CLSM显示CRAMP修饰肽能够显著减少细菌总荧光强度。转录组测序获得了12636700段干净读对,共鉴定出1582个差异基因,发现800个基因表达上调,782个基因表达下调。GO功能富集分析显示,1226个基因比对到GO功能分析数据库,在这些差异表达基因中,与分子功能、生物过程和细胞组成有关。KEGG通路富集分析显示,有603个表达差异显著基因比对到KEGG中的96条代谢途径,其中主要是各类氨基酸代谢途径、脂肪酸代谢途径、三羧酸循环、生物被膜调控系统等。分析发现CRAMP修饰肽可能作用于PAO1 c-di-GMP系统,增强细菌运动性和生物被膜分散,并且与其密度感应(quorum sensing,QS)系统和藻酸盐合成相关。最后经验证,CRAMP修饰肽显著减少了PAO1成熟生物被膜中藻酸盐的含量。【结论】CRAMP修饰肽对PAO1成熟生物被膜具有明显的清除作用,且能导致成熟生物被膜藻酸盐含量下降。通过转录组数据分析,可能是由于CRAMP修饰肽使PAO1 c-di-GMP水平下调导致的,具体机制还有待进一步探究。

鸡源Cathelicidins家族抗菌肽研究进展

Cathelicidins(CATHs)是一类具有抗感染和免疫调节等活性的多功能抗菌肽,广泛分布于不同动物体内,在宿主抵御病原时入侵发挥极其重要的作用。近年来,鸡源CATHs活性及应用的研究得到迅速发展,其广谱抗菌活性及独特的杀菌机制使其不易产生耐药性,具有成为新一代抗菌和免疫调节药物的潜力。现对鸡源CATHs的结构与活性的关系、分布与表达、抗微生物活性、免疫调节活性等方面的研究进展进行综述,并对其应用前景进行了分析。

生物被膜:益生菌肠道定植的新策略

益生菌可改善机体微生态平衡,在促进营养吸收、控制肠道感染和调节免疫功能等方面具有特殊的功效,但存在胃肠道环境难定植、口服生物利用度低等问题。生物被膜是多个细菌黏附于非生物或生物表面,分泌胞外聚合物(extracellular polymeric substances),并将自身包裹其中形成的一种有组织的细菌集团,包含胞外多糖(exopolysaccharides,EPS)、蛋白质、胞外DNA(extracellular deoxyribonucleic acid,eDNA)和脂质等多种组成成分,是一个具有三维立体空间结构的聚集体。被膜状态的益生菌较浮游菌在抗逆性、对抗病原菌和调节免疫功能等方面具有明显优势,这些特点为新型益生菌的开发提供了新的研究思路。本文阐述了被膜状态益生菌的优势,重点介绍了促进益生菌生物被膜形成的活性物及其形成机制,简述了益生菌生物被膜的安全性问题。当前,益生菌生物被膜的研究尚处于起步阶段,希望本文能为该领域未来的研究提供参考。

抗微生物肽CRAMP联合抗生素分散铜绿假单胞菌生物被膜的增效作用研究

【目的】研究修饰后的鼠源抗微生物肽CRAMP联用抗生素对铜绿假单胞菌PAO1成熟生物被膜的分散作用,为临床联合应用抗生物被膜药物提供理论依据。【方法】采用微量肉汤稀释法测定CRAMP修饰肽和抗生素对PAO1的最低抑菌浓度(MIC)、最低杀菌浓度(MBC)和生物被膜最小根除浓度(MBEC);采用时间杀菌曲线(time-kill curve,TKC)法测定CRAMP修饰肽及抗生素单用和联用对PAO1成熟生物被膜的杀菌活性;采用菌落计数法和激光共聚焦扫描显微镜(CLSM)评估CRAMP修饰肽联用抗生素对PAO1成熟生物被膜的分散作用。【结果】与单用抗生素组相比,除2种碳青霉烯类药物和4种β-内酰胺类药物,其他抗生素联合CRAMP修饰肽后的MBEC值均有不同程度的下降,万古霉素、罗红霉素和阿奇霉素下降倍数最明显(4倍)。TKC试验结果表明,CRAMP修饰肽分别联用万古霉素、罗红霉素和阿奇霉素均具有比单用药更快且更强的杀菌作用,尤其是与万古霉素联用仅在3h时杀灭了全部(100%)的生物被膜细菌。随后,通过CLSM观察发现生物被膜数量、体积、面积和单位面积荧光强度均有明显的变化。【结论】CRAMP修饰肽对铜绿假单胞菌PAO1成熟生物被膜具有分散作用,与万古霉素联用具有明显协同增效作用,且作用PAO1成熟生物被膜1 h时协同效应最大。