重组人白细胞介素7蛋白的表达、复性和纯化

目的表达、复性和纯化重组人白细胞介素7(recombinant human interleukin-7,rhIL-7)蛋白,为其功能研究打下基础。方法在已经对IL-7基因TA克隆的基础上进行亚克隆,插入pET-21b载体中,构建rhIL-7的原核表达载体,阳性克隆经测序成功后转化入大肠杆菌BL21(DE3)中,优化rhIL-7蛋白表达条件,并对表达的蛋白进行复性及纯化,利用免疫印迹鉴定重组蛋白。结果表达的蛋白与预期相对分子质量17 400相符,经优化后确定蛋白表达条件为:诱导温度为37℃、IPTG诱导浓度为1.0 mmol/L、诱导时间为2 h,且rhIL-7的复性效率较好(约50%),纯化后蛋白纯度高达95%以上,并经Western blot证实表达的蛋白为rhIL-7。结论成功获得高纯度的rhIL-7复性蛋白。

白细胞介素7剪接变异体的克隆和序列分析

目的:克隆白细胞介素-7(IL-7)剪接变异体,筛选出在IL-7开放阅读框内剪接变异体,为其生物活性的研究打基础。方法:运用自行设计的IL-7引物,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术,分离正常培养的肝癌细胞株HepG2、结肠癌细胞株HT29IL-7mRNA,再对电泳所获条带进行克隆、测序和分析。结果:肝癌细胞株HepG2、结肠癌细胞株HT29都能检测到IL-7mRNA,而且从培养癌细胞株分离出多条新带,经亚克隆及测序,证实这些条带是来源人IL-7基因、但缺乏不同外显子的IL-7剪接变异体cDNA;通过和IL-7cDNA比对分析,发现其中5个剪接变异体在IL-7开放阅读框内。结论:IL-7剪接变异体广泛存在于各种肿瘤细胞中。对其进一步的研究,将为癌症病人的免疫调节紊乱和临床免疫治疗提供新的研究方向。

评估磷酸依米他韦胶囊分别与索磷布韦片、奥美拉唑镁肠溶片、瑞舒伐他汀钙片药物-药物相互作用

目的评价磷酸依米他韦胶囊分别与索磷布韦片、奥美拉唑镁肠溶片、瑞舒伐他汀钙片在健康受试者中的药物-药物相互作用及联合用药的耐受性。方法试验1(磷酸依米他韦胶囊与索磷布韦片)采用随机、开放、连续给药设计,纳入28例受试者随机分为2组。试验2(磷酸依米他韦胶囊与奥美拉唑镁肠溶片)采用非随机、开放设计,纳入42例受试者分为3组。试验3(磷酸依米他韦胶囊与瑞舒伐他汀钙片)采用开放设计,纳入14例受试者。采用验证过的液相色谱串联质谱分析方法(LC-MS/MS)检测依米他韦、索磷布韦及其主要代谢产物GS-331007、奥美拉唑、瑞舒伐他汀的血药浓度,采用Phoenix WinNonlin软件计算药代动力学参数。结果(1)试验1中,单药和联合给药后,索磷布韦Cmax和AUC0-tau几何平均值比值(GMR)的90%CI为152.0%(118.0%~197.0%)和230.0%(184.0%~287.0%),与索磷布韦单药比较,分别增加了52.0%和130.0%;GS-331007 Cmax GMR的90%CI为74.0%(67.5%~81.2%),与索磷布韦单药比较,降低了26.0%。(2)试验2中,同时给药、间隔4 h给药、间隔12 h给药,依米他韦单药和联合给药后Cmax GMR的90%CI分别为68.9%(44.5%~106.7%)、64.0%(43.8%~93.6%)和56.4%(38.9%~81.9%);AUC0-t GMR的90%CI分别为68.6%(46.5%~101.2%)、68.3%(47.6%~98.0%)和60.5%(41.8%~87.5%),与依米他韦单药比较,Cmax和AUC0-t分别降低31.1%和31.4%、36.0%和31.7%、43.6%和39.5%。(3)试验3中,单药和联合给药后,瑞舒伐他汀Cmax和AUC0-72 GMR的90%CI分别为172.4%(153.6%~193.5%)和158.0%(144.3%~172.9%),与瑞舒伐他汀单药比较,分别升高了72.4%和58.0%。试验期间均未发生严重不良事件和导致退出试验的不良事件。结论磷酸依米他韦胶囊与索磷布韦片、奥美拉唑镁肠溶片、瑞舒伐他汀钙片均存在药物相互作用。