异丙氧苯胍与黏菌素联用对多杀性巴氏杆菌的体内外抗菌作用

[目的]研究异丙氧苯胍与黏菌素联用对多杀性巴氏杆菌的体内外抗菌作用,为开发有效的新型黏菌素增效剂及临床防治多杀性巴氏杆菌病提供数据支持。[方法]通过微量肉汤稀释法测定异丙氧苯胍与黏菌素对多杀性巴氏杆菌的最小抑菌浓度,再通过棋盘法联合药敏试验和时间杀菌曲线评价异丙氧苯胍与黏菌素联用对多杀性巴氏杆菌的体外抗菌作用,并进一步通过建立小鼠肺部感染多杀性巴氏杆菌模型来评价两者联用的体内抗菌效果。[结果]药敏试验结果显示,异丙氧苯胍对多杀性巴氏杆菌无抗菌作用(MIC>256μg/mL),黏菌素对受试菌株的最小抑菌浓度范围为1~8μg/mL。联合药敏试验结果显示,异丙氧苯胍与黏菌素联用时能增强黏菌素的抗菌活性(分级抑菌浓度指数在0.094~0.313),表现出良好的协同抗菌作用。体外时间杀菌曲线结果进一步表明,联合用药组可显著降低细菌数量,当亚抑菌浓度(0.5μg/mL)的黏菌素与异丙氧苯胍联用时即可达到杀菌效果。在小鼠肺部感染模型中,与黏菌素或异丙氧苯胍单药组相比,异丙氧苯胍与黏菌素联合组能显著或极显著降低小鼠肺部多杀性巴氏杆菌的载菌量(P<0.05或P<0.01)。HE染色观察小鼠肺脏病理组织切片发现,异丙氧苯胍与黏菌素联合组小鼠肺脏的肺泡结构正常,肺泡腔清洁,优于异丙氧苯胍和黏菌素单独用药组。[结论]异丙氧苯胍与黏菌素联合使用可增强黏菌素对多杀性巴氏杆菌的体内外抗菌效果,有望进一步开发成为新型抗菌增效剂。

奶牛临床型乳腺炎治疗药物筛选及疗效

从 2个不同地点奶牛场临床分离鉴定出奶牛临床型乳腺炎的病原菌 ,其中链球菌、葡萄球菌为主要病原菌。以试管二倍稀释法测定 14种抗菌药物对临床分离病原菌的最小抑菌浓度 (MIC) ,以恩诺沙星 (≤ 0 .0 6～ 1m g/ L )、环丙沙星 (≤ 0 .0 6～ 2 mg/ L)及阿莫西林的 MIC较低。以青霉素 +链霉素为对照 ,选择恩诺沙星、阿莫西林、克拉维酸合剂 (4∶ 1)、阿莫西林作临床疗效试验。结果证明 :0 .5 %阿莫西林 (2 0 0 mg) +克拉维酸 (5 0 mg)合剂 (4∶ 1)溶液 5 0 m L乳房灌注 ,每天 2次 ,平均疗程 3.6 d,对临床型乳腺炎有较好疗效。

猪表皮生长因子在毕赤酵母中的表达及鉴定

【目的】猪表皮生长因子(pEGF)具有刺激静止期猪卵母细胞的成熟以及刺激仔猪胃肠上皮细胞成熟的功能,从而可以提高母猪繁殖率和降低断奶仔猪的应激。因此开发猪表皮生长因子具有重要意义。【方法】用人工合成的pEGF基因为模板,用PCR扩增获得pEGF-6His片段,将其克隆到载体pPIC9构建重组质粒pPIC9-pEGF并电转化毕赤酵母。用斑点杂交法筛选多拷贝整合转化子即基因工程菌,用Ni-NTA亲和层析法纯化目的蛋白,纯化产物用抗His-tag的单克隆抗体进行蛋白质免疫印迹、氨基端测序鉴定、体外生物活性检测。【结果】斑点杂交法筛选中信号越强的转化子,甲醇诱导表达的目的蛋白含量越高。免疫印迹中可以观察到印迹条带。氨基端氨基酸测序发现纯化的表达产物含有2条肽链,其N-端15个氨基酸的序列分别与天然的pEGF以及Glu-Ala-pEGF的序列相同。体外生物活性检测结果表明,纯化的表达产物对BALB/c3T3细胞具有显著的增殖作用。【结论】本研究获得了能高效表达具有生物学活性的重组猪表皮生长因子的基因工程菌。

二氟沙星对实验性感染猪链球菌病及支原体性肺炎的药效学研究

本文报道国内新近研制的畜禽专用氟喹诺酮类抗菌药物———二氟沙星对实验性感染猪链球菌病及支原体性肺炎的药效学研究。以试管两倍稀释法测得二氟沙星对兰氏C群类马链球菌(C5512 0 )和猪肺炎支原体 (F16 株 )的最小抑菌浓度 (MIC)分别是 1 6级及 0 16mg/L。肌注给药对猪链球菌病和支原体性肺炎的实验性治疗结果表明 ,低、中、高剂量二氟沙星组 (2 5、5、10mg/kg)及恩诺沙星组 (2 5mg/kg)用药 5d(每隔 12h给药 1次 )对猪链球菌病的治愈率分别是 4 0 %、70 %、80 %及 70 % ,而链球菌感染对照组的死亡率为 70 % ;低、中、高剂量二氟沙星组及恩诺沙星组(2 5mg/kg)用药 5d(每隔 12h给药 1次 )对猪支原体性肺炎的治愈率分别是 80 %、90 %、90 %及80 % ;而支原体感染对照组的自愈率为 10 %。

猪表皮生长因子在大肠杆菌中的表达

采用RT-PCR方法从猪肾脏皮质组织中扩增出pEGF基因,将其连接到克隆载体pMD18-T上,经测序鉴定正确后,再克隆到原核表达载体pET-41 a(+)上,构建重组表达质粒pET-EGF.用重组质粒转化E.coliBL21(DE3)宿主菌,经IPTG诱导表达后利用SDS-PAGE电泳和W estern-b lotting对GST-EGF融合蛋白进行分析,结果表明37℃诱导表达的融合蛋白含量较高,占菌体总蛋白的20.2%;30℃诱导表达的可溶性融合蛋白含量较高,占菌体总蛋白的7.7%.

雌二醇依赖性的细胞表达载体的研究

根据雌激素类化合物在机体内的作用机理,以增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因为报告基因构建了4个启动子不同的表达载体(pERE-SV-EGFP,pERE-TA-EGFP,pERE-CMV-EGFP,pERE-TK-EGFP)。以这些表达载体瞬时转染MCF-7细胞,报告基因的基础表达与启动子的强度相关。以17β-雌二醇(E2,10-9mol·L-1)诱导表达载体瞬时转染的MCF-7细胞,发现在表达载体pERE-TA-EGFP、pERE-TK-EGFP、pERE-SV-EGFP转染的MCF-7细胞中,E2能诱导2倍以上的报告基因的表达。这表明在这些瞬时表达系统中报告基因的表达是雌激素依赖性的,因此这些表达载体可用于稳定转染以建立稳定表达分析系统。

楠木种子活力下降机制研究

通过人工老化不同时间,获得不同活力的楠木种子,检测了具有不同活力的楠木种子的超氧阴离子生成量、H2O2含量、SOD活性、CAT活性及POD活性,结果显示:人工老化后,超氧阴离子生成量和H2O2含量大量增加,且老化36 h后,SOD活性、CAT活性及POD活性大幅度下降,使自由基的生成与淬灭机制失去平衡,清除超氧阴离子及H2O2的能力下降,细胞受到伤害,种子活力下降.

维生素溶液对闽楠种子活力的影响

将人工老化具有不同活力的闽楠种子作为实验材料,用不同浓度的VC和VB2溶液处理。结果表明：VC和VB2溶液处理能使老化的闽楠种子的发芽率、发芽势、活力指数及田间出苗率升高,而使闽楠种子浸出液的相对电导率降低,这些指标反映了种子活力的变化,说明VC和VB2溶液能恢复和提高闽楠种子的活力;VC和VB2溶液浓度达到500-700 mg/kg处理24 h,种子的活力最高,这一浓度是处理闽楠种子的最适浓度。

榉树种子贮藏过程中的活力变化研究

采用种子萌发和生理生化检测方法,对不同贮藏方法在贮藏过程中榉树种子的活力变化进行研究。结果表明,随着贮藏时间的延长,榉树种子的活力逐渐下降,贮藏6个月后,活力下降速度加快,膜脂的过氧化作用是导致榉树种子活力下降的主要原因之一。在整个贮藏过程中,冰箱3℃贮藏能较好地保持榉树种子活力。

楠木种子休眠与萌发特性的研究

为了解决育苗过程中楠木种子的休眠问题,对楠木种子的休眠和萌发特性进行了研究,结果表明:楠木种子的发芽抑制物质主要存在于除外种皮以外的其余部分,层积将使种子中的发芽抑制物质含量逐渐降低,抑制作用减弱,常温层积效果更明显,常温层积90d能完全解除楠木种子的休眠,发芽率可达80%以上;恒温25℃和变温30℃(日)/15℃(夜),萌发速度最快,发芽势和发芽率分别可达到45.5%和85.0%以上。

楠木种子活力变化机制的研究

以田间出苗率作为老化楠木种子活力的指标,分别对不同活力楠木种子的丙二醛含量、细胞膜系统的完整性、超氧阴离子生成量及过氧化氢含量进行了研究。结果显示:随着老化程度的增加,楠木种子的丙二醛含量、相对电导率、超氧阴离子生成量及过氧化氢含量也随着增加。这一结果表明膜脂的过氧化、细胞膜系统的完整性的丧失、超氧阴离子生成量及过氧化氢含量的增加导致了种子活力下降、质量变差。

聚乙二醇(PEG)渗调处理恢复和提高榉树种子活力的研究

[目的]探讨恢复和提高榉树种子活力的方法和技术，服务生产。[方法]用50、100、150、200、300g／L的PEG-4000处理已常温贮藏12个月的榉树种子36h，研究PEG对榉树种子活力的影响。[结果]在0～200g／L范围内，随着PEG浓度的增加，榉树种子的田间出苗率、发芽势、活力指数逐渐增加，相对电导率逐渐下降，其中PEG150g／L时出苗率最大，为46．0％，活力指数最高，为3．53，比清水（CK）高37．4％；200g／L时发芽势最大，为41．6％，相对电导率最低，为5．5％。PEG处理的榉树种子出苗率、发芽势、活力指数和相对电导率与对照均存在显著差异（P〈0．05）。[结论]PEG-4000处理提高了榉树种子的田间出苗率、发芽势、活力指数和细胞膜系统的完整性，提高了种子活力。处理36h，PEG浓度以150～200g/L效果最佳。

KH_2PO_4渗调处理恢复和提高榉树种子活力的研究

采用不同浓度的KH2PO4处理常温贮藏12个月和18个月的榉树种子,结果表明:KH2PO4处理可提高榉树种子的发芽势、田间出苗率、活力指数及细胞膜系统的完整性,提高了种子的活力。在一定范围内,随着KH2PO4处理浓度的增加,榉树种子的活力也相应增加,KH2PO4处理浓度以3g/L最佳,处理时间为24h。

湖南省森林冰雪灾害调查

通过对典型冰雪灾害样地调查,分析了不同营林措施下,冰雪灾害对人工商品林的影响因素,提出了合理密度,加强抚育间伐,营造混交林等营林措施,从而提高林木抗冰雪灾害的能力。

苯甲酸对1～21日龄肉鸡生长性能和肠道健康的影响

本试验旨在研究苯甲酸对白羽肉鸡生长性能、肠道形态及盲肠微生物的影响。试验采用单因子试验设计,选取360只1日龄的罗斯308(Ross308)白羽肉鸡,随机分为3组,每组6个重复,每个重复20只。饲粮中苯甲酸的添加水平为0(对照组)、0.7%和1.4%。试验期为21d。结果表明:1)与对照组相比,添加苯甲酸对1~21日龄肉鸡的平均增重(AWG)有提高趋势(P=0.066);添加0.7%苯甲酸显著提高了1~21日龄肉鸡的平均采食量(AFI)(P<0.05)。2)与对照组相比,添加苯甲酸显著提高空肠绒毛高度和绒隐比(P<0.05),对隐窝深度无显著影响(P>0.05)。3)与对照组相比,添加苯甲酸对21日龄肉鸡空肠酶活性无显著影响(P>0.05),但从数值上看,添加0.7%苯甲酸提高了空肠酶活性。4)与对照组相比,添加苯甲酸对肉鸡盲肠微生物菌群无显著影响(P>0.05);从数值上看,添加苯甲酸降低了肉鸡21日龄大肠杆菌数量。由此得出,苯甲酸能够提高肉鸡空肠绒毛高度和绒隐比,进而在一定程度上提高1~21日龄肉鸡的生长性能,但对盲肠微生物数量没有显著影响;1~21日龄肉鸡饲粮苯甲酸的添加水平以0.7%效果较好。

新饲料添加剂对百里香酚的开发和应用研究

采用简化寇氏法测定新饲料添加剂对百里香酚的大鼠口服急性毒性试验,结果显示对百里香酚对大鼠的半数致死量（LD50）为6 174.9 mg/kg,远高于百里香酚（835.4 mg/kg）和香芹酚（968.1 mg/kg）,属相对无毒级。体外最小抑菌试验表明,对百里香酚对大肠杆菌、沙门氏杆菌、金色葡萄球菌、产气荚膜梭菌的最小抑菌浓度（MIC）均为100μg/ml,比百里香酚和香芹酚强1-2倍。肉鸡的饲养试验结果显示,在饲料中添加100 mg/kg的对百里香酚对肉鸡生产性能提高的效果优于100 mg/kg的百里香酚及50 mg/kg的金霉素。因此,对百里香酚作为促生长添加剂可替代百里香酚和金霉素。

如何实现饲用抗生素的高效替代——英赛特基于科学(基本概念、作用机制和作用标准)的AGPs三等替代方案

抗生素生长促进剂(Antibiotic Growth Promoters,AGPs)是动物饲料配方体系中非营养组分中性价比最高的功能性饲料添加剂。由于AGPs所引起的食品安全问题和人们对公共卫生的忧虑,AGPs应用的限制和禁用刻不容缓。理解和区分抗菌剂、抗菌药、抗生素、AGPs和饲用抗菌剂这几个基本概念对开发AGPs替代产品来说是最基础的要求,也是最重要的要求。除此之外,我们还必须深刻理解AGPs的作用标准,即:⑴较强的抗菌效力;⑵必须能够在动物肠道的后部维持足够的有效浓度;⑶在饲料产品中有足够的有效添加剂量;⑷产品安全性;⑸合理的应用成本。高肠道压力动物模型的治疗试验是AGPs替代产品效力验证的最直接方法,也是饲料厂在现场快速评价相关产品最客观、快速且准确的方法。英赛特公司基于以上理解,开发了3个从“机制、效力和成本”上均能落地的AGPs高效替代产品,各种动物品种和生长阶段均可应用。