家有萌宠,防虫是大事

养宠之家,防虫、驱虫,是避不开的大事。有时,甚至关系到你能不能生孩子。这些表现,说明宠物染虫了挠挠挠、甩甩甩、蹭蹭蹭,掉毛、断毛严重……猫狗有这些表现时,翻开它的毛,你可能会看到虫!华南农业大学兽医学院副教授詹耀明介绍,猫狗浓密的体毛,适合寄生虫生存,常见体外寄生虫有跳蚤、虱子、牛蜱和螨虫。

日本血吸虫新基因——腺苷酸激酶基因的发现与克隆

目的将用表达序列标签(expression sequence tag, EST)策略及同源性搜索发现的日本血吸虫新基因——腺苷酸激酶(adenylate kinase,AK)cDNA克隆到表达质粒pET32a(+)上,为下一步研究该基因的功能做准备。方法将插入于pTriplEx2 质粒上的cDNA进行测序,用BLASTn程序搜索测序结果,根据表达质粒pET32a(+)上的克隆位点及该cDNA序列设计PCR引物,将PCR产物纯化后连接到pMD 18-T载体上,将重组T载体经EcoRⅠ/XhoⅠ双酶切后切下的SjAK基因导入原核可溶性表达质粒pET32a(+)中。结果本研究所发现的新基因与曼氏血吸虫AK基因的同一性达86%,PCR产物的片段长度与预期大小一致,重组T载体及表达质粒经EcoR I及XhoI双酶切后证明具有与目标片段长度相符的插入片段。结论发现日本血吸虫的cDNA与曼氏血吸虫AK cDNA高度同源,并且成功地构建出重组表达质粒pET32a(+)-SjAK。

日本血吸虫尾蚴(中国大陆株)表达序列标签的获取及同源性分析

目的 了解日本血吸虫尾蚴ｃＤＮＡ文库中基因的基本情况，为新基因的筛选鉴定提供依据。方法 日本血吸虫尾 蜘ｃＤＡＮ文库中的噬菌体侵入大肠杆菌ＢＭ２５．８后环化成质粒。筛选出已转入质粒的菌株。提取质粒ＤＮＡ，用质粒上 的一段测序引物序列进行一次性测序，得到一个表达序列标签（ＥＳＴ）。通过ＢＬＡＳＴｘ及ＢＬＡＳＴｎ公共数据库经编辑分 析的ＥＳＴ序列进行同源性比较。经过分析编辑后的新ＥＳＴ序列，以编写好的程序和Ｅ－ｍａｉｌ方式递交，以获得ＧｅｎＢａｎｋ 登录号。通过对同源性比较结果的总结，对该文库的基本情况进行分析。结果与结论 在测出的５８个ＥＳＴ中有３个核 苷酸序列与日本血吸虫已知基因高度同源，有２个核苷酸序列与曼氏血吸虫较高度同源，有７个ＥＳＴ的蛋白质序列与 其他物种有较高同源性而核苷酸序列同源性很低，有２７个ＥＳＴ的蛋白质及核苷酸序列同源性都很低。

日本血吸虫一个新钙结合蛋白全长编码区的克隆与功能预测

目的 对用表达序列标签 (ExpressionSequenceTag ,EST)策略从日本血吸虫尾蚴cDNA文库中筛选出的新基因进行功能预测。方法 用NCBI站点的BLASTx及BLASTn程序对所获得的新基因序列进行同源性搜索 ;用NCBIBLAST站点的blasttwosequence程序对同源性高的基因进行核苷酸及氨基酸水平的同源性比较 ;利用motifscaninaProteinsequence对cDNA序列所编码的蛋白质进行结构域搜索。结果 发现一个与曼氏血吸虫尾蚴期特异性 8kDa钙结合蛋白 (Sm8)基因高度同源的日本血吸虫新基因 ,cDNA序列与氨基酸水平的同一性均为 82 % ;蛋白结构域搜索结果显示 ,该cDAN序列所编码的蛋白质具有 2个EF手钙结合位点。结论 用EST策略筛选新基因是一个可行的方法 ,所筛到的日本血吸虫新基因编码一种钙结合蛋白 ,全长编码序列与Sm8基因高度同源 ,对该基因的期特异性及免疫保护性的探讨具有重要的意义。

几种日本血吸虫新基因的表达特性分析

目的 对从日本血吸虫尾蚴cDNA文库中筛选出的 3种新基因 ,腺苷酸激酶 (AK)、蛋白酶体激活因子PA2 8β亚单位 (PA2 8)、8kDa钙结合蛋白 (CBP)基因进行表达特性研究。方法 分别提取雌雄成虫、尾蚴、断尾童虫的总RNA ,利用RT-PCR酶混合物试剂盒 ,一步法对总RNA进行反转录及PCR扩增。结果 AK及PA2 8蛋白基因可以在雌雄成虫、尾蚴、断尾童虫体内表达 ,CBP只在尾蚴及断尾童虫中表达。结论 所筛到的AK、PA2 8、CBP基因均是日本血吸虫特异基因 ,AK及PA2 8基因可以在雌雄成虫、尾蚴、断尾童虫体内表达 ,CBP可能是日本血吸虫尾蚴。

基于网络的医学寄生虫学交互式教学模式研究

网络教学作为一种趋势,在未来教学中将占据重要位置,传统课堂教学因为各种原因也不会在近期退出历史舞台。网络教学与传统课堂教学各有优点和不足,我们结合传统课堂教学与网络教学各自的优势,在传统课堂教学中利用网络技术、数据库技术、多媒体技术把《医学寄生虫学》课程全部内容系统化、数字化,探索了一种基于网络的医学寄生虫学交互式教学模式,提高了教学质量。

日本血吸虫新基因——蛋白酶体激活因子PA28亚单位的发现与克隆

目的将用EST策略及同源性搜索发现的日本血吸虫新基因——蛋白酶体激活因子PA28亚单位（proteasome activatorPA28 subunit,PA28）cDNA克隆到表达质粒pET32a（+）上,为下一步对该基因进行功能研究做准备。方法将插入于pTrip1Ex2质粒上的cDNA进行测序,测序结果经BLASTx程序搜索,发现该插入cDNA序列所编码的蛋白与小鼠肌肉内的PA28亚基蛋白高度同源。根据表达质粒pET32a（+）上的克隆位点及该cDNA序列设计PCR引物,将PCR产物纯化后连接到pMD 18-T载体上,将重组T载体经EcoRI/XhoI双酶切后切下的SjPA28基因导入原核可溶性表达质粒pET32a（+）中。结果所发现的cDNA所编码的蛋白与小鼠肌肉内的PA28亚基蛋白的同一性达41％,PCR产物的片段长度与预期大小一致,重组T载体及表达质粒经EcoRI/XhoI双酶切后证明具有与目标片段长度相符的插入片段。结论本研究所发现的cDNA所编码的蛋白与小鼠肌肉内的PA28亚基蛋白高度同源,并且已成功地构建出重组表达质粒pET32a（+）-SjPA28。

日本血吸虫PA28亚单位蛋白的表达与鉴定、纯化及免疫反应性的评价

目的 将亚克隆在pET32a(+)质粒上的日本血吸虫蛋白酶体激活因子PA2 8亚单位基因进行表达及蛋白纯化 ,并对表达产物用Western -blot及ELISA方法进行免疫反应性的评价。方法 将重组表达质粒 pET32a(+) -PA2 8转化入大肠杆菌BL2 1中 ,IPTG诱导表达后超声裂菌 ,离心后取上清进行SDS -PAGE ,观察融合蛋白的表达情况 ;用Ni-NTA柱子纯化目标蛋白 ;将SDS -PAGE后的蛋白从凝胶转移到PVDF膜上 ,分别用 6 -His抗体、日本血吸虫尾蚴感染 6周的兔血清及紫外照射减毒尾蚴免疫的兔血清作一抗进行免疫印迹 ,将纯化后的融合蛋白作为包被抗原 ,检测正常兔血清及感染兔血清 ,对该蛋白的免疫反应性作出评价。结果 重组菌株用IPTG诱导后于 4 8kDa处有一表达条带 ,该蛋白与硫氧还蛋白融合表达 ,带有 6 -His,用抗 6 -His抗体做免疫印迹有特异性的单一反应带 ,用尾蚴感染兔血清及紫外照射减毒尾蚴免疫的兔血清做免疫印迹 ,结果显示该目的蛋白带与以上多抗具有敏感特异的反应条带。ELISA的结果显示该蛋白与血吸虫感染兔血清具有较敏感特异的免疫反应性。结论 PA2 8蛋白与硫氧还蛋白融合表达后为可溶性蛋白且分子量约为 4 8kDa ,该蛋白与血吸虫感染兔血清及紫外照射减毒尾蚴免疫的兔血清具有较敏感特异的免疫反应性。

日本血吸虫新基因—Ⅲ8kDa钙结合蛋白基因的发现与克隆

目的 将用EST策略及同源性搜索发现的日本血吸虫新基因—Ⅲ 8kDa钙结合蛋白 (Calcium -bindingprotein ,CBP)cDNA克隆到表达质粒pET32a(+)上 ,为下一步对该基因的功能进行研究做准备。方法 将插入于pTriplEx2质粒上的cDNA进行测序 ,测序结果经BLASTn程序搜索 ,发现该插入cDNA序列与曼氏血吸虫钙结合蛋白cDNA高度同源。根据表达质粒pET32a(+)上的克隆位点及该cDNA序列设计PCR引物 ,将PCR产物纯化后连接到pMD 1 8-T载体上 ,将重组T载体经EcoRI/XhoI双酶切后切下的SjCBP基因亚克隆入原核可溶性表达质粒pET32a(+)中。结果 所发现的新基因与曼氏血吸虫 8kDaCBP基因的同源性达 82 % ,PCR产物的片段长度与预期大小一致 ,重组T载体及表达质粒经EcoRI及XhoI双酶切后证明具有与目标片段长度相符的插入片段。结论 所发现的cDNA与曼氏血吸虫 8kDaCBPcDAN高度同源 ,并且已成功地构建出重组表达质粒pET32a(+) -SjCBP。

日本血吸虫一种新腺苷酸激酶全长cDNA的克隆与功能分析

目的 对用表达序列标签 (Expression Sequence Tag,EST)策略从日本血吸虫尾蚴 c DNA文库中筛选出的新基因进行功能预测。方法 用 NCBI站点的 BL ASTx及 BL ASTn程序对所获得的新基因序列进行同源性搜索 ;用 NCBI BLAST站点的 blast two sequence程序对同源性高的基因进行核苷酸及氨基酸水平的同源性比较 ;利用 Motif Scan in a Protein Sequence对 c DNA序列所编码的蛋白质进行结构域搜索 ;利用 CD-Search程序对目标蛋白进行保守区域搜索。结果 发现一个与曼氏血吸虫 2 2 k Da单核苷酸激酶 m RNA高度同源的日本血吸虫新基因 ,基因与氨基酸水平的同一性均分别为 86.0 %和 87.0 % ;蛋白结构域搜索及保守区域搜索结果显示 ,该 c DNA序列所编码的蛋白质是一种腺苷酸激酶。结论 用 EST策略筛选新基因是一个可行的方法 ,所筛到的日本血吸虫新基因编码一种腺苷酸激酶 ,全长编码序列与曼氏血吸虫腺苷酸激酶 m

日本血吸虫8k CaBP基因启动子区的克隆与分析

目的克隆日本血吸虫8kCaBP(Sj8CaBP)基因启动子区并对该序列进行分析。方法提取日本血吸虫基因组DNA,并按ClontechUniversalGenomeWalkerTMKit的操作手册说明,建立日本血吸虫基因组DNA文库。根据手册要求及Sj8CaBP基因的cDNA序列,设计合成该基因染色体步移的特异性引物与试剂盒提供的端子引物进行巢式PCR。将得到的PCR产物克隆测序,测序结果用启动子区的分析软件及与其cDNA序列比对进行分析。结果得到的Sj8CaBP基因长度为1079bp(GenBank登录号AY262018),该基因包含Sj8CaBP基因完整的开放阅读框(ORF),包括1个内含子及2个外显子,在其5'端UTR区具有明显的启动子区,包括TATA盒及CAAT盒,没有发现GC盒及一些血吸虫基因启动子区所常见的AP-1(Activeprotein1)结合位点。结论从日本血吸虫基因组文库中获得一个长1079bp的Sj8CaBP基因片段(GenBank登录号为AY262018),经分析证明,该片段包含一个启动子区,具有TATA盒及CAAT盒的结构及1个内含子2个外显子.

人宠共患病,正成为新式『传染病』

据《2020年中国宠物行业白皮书》统计,2020年,我国城镇犬猫数量已经超过1亿只。相当于,在中国,每14个人中,就养着一条狗或一只猫。这还没包括农村的猫狗数量。人与动物之间的距离,在史无前例地拉近。新宠物消费潮流中,奇葩宠物热、走私宠物、网购宠物等,也可能给人体健康带来新的威胁。有些行为,需要刹车了!

刚地弓形虫纳虫泡的形成机制及其作用

刚地弓形虫是寄生宿主广泛的细胞内寄生性原虫,人群感染相当普遍。弓形虫侵入宿主细胞后寄居于一个抗宿主细胞内涵体酸化作用和溶酶体融合作用的纳虫泡(parasitophorous vacuole)内,纳虫泡在弓形虫的寄生过程中起着非常重要的作用。本文就弓形虫纳虫泡形成的机制及其在弓形虫寄生宿主细胞过程中的作用进行综述。

开展课外科研活动,提高医学生的综合素质

根据近年来在指导学生课外科研活动过程中积累的经验,探讨了课外科研活动对提高学生综合素质的重要性并从以下几方面对如何开展课外科研活动展开了讨论:①做好课外科研活动的动员,让学生充分了解课外科研活动的意义.②在开展课外科研活动的过程中,教师与学生应注意的几个方面.③课外科研活动开展过程中存在的问题及解决办法探讨.

基础医学网络教学研究初探

网络教学随着网络的飞速发展已逐渐成为一种重要的教学方式.网络教学具有传统教学不可比拟的优点:1、教师劳动的创造性得到最大限度的发挥.2、充分实现知识信息的整合.3、教学过程的合作性趋向多元化.4、教与学的时间与空间不再受到限制.基础医学网络教学的研究才刚刚起步,具有紧迫性和必要性.如何建立完善的基础医学网络教学系统及网上教与学双方的合作交流方式,都是基础医学网络教学研究的核心问题.基础医学网络教学是培养高层次医学人才不可缺少的教学方式.网络教学有可能取代现代教学手段,将导致教育领域一场教与学的革命.

医学寄生虫学的过渡-浸没式双语教学的几点体会

为适应21世纪经济全球化、文化多元化的发展状况,国家教育部对高校本科教学提出了应用英文等其他外语进行教学的要求。双语教学(尤其是中英文双语教学)已在各高校悄然兴起,探索一种适应我国素质教育背景下的基础医学的外语教学模式是一项迫在眉睫的工作。以医学寄生虫学的双语教学为基础,探索了一种适应我国高等医学院校学生的教学模式,即过渡-浸没式双语教学。该种教学模式以教学大纲为准绳,以让学生掌握课程知识点为依据,课前充分准备双语(或英文原版)教材和讲义,上课过程用中以英文授课为主(约60%-80%),中文授课为辅(约20%-40%),在上课进程中按学生的掌握情况随时合理地在中、英文两种语言环境之间切换。课堂上师生的交流互动也以英文为主。这种双语教学模式提高了学生的学习兴趣,也提高了双语教学的效果。

海洋动物对Cu,Zn,Cr和SLS的敏感性比较

采用ＡＲＣ－ｔｅｓｔ方法，测出Ｃｕ，Ｚｎ，Ｃｒ和表面活性剂对卤虫Ⅱ－Ⅲ期无节幼体的急性毒性，并用相同的方法，测出了这４种毒物对斑节对虾无节幼体、罗氏沼虾蚤状幼体的毒性，进而比较了这３种海洋动物的敏感性大小．表明一些海洋动物对某些毒物的敏感性，可以从卤虫的数据中得到反映。

人hIGF-1在Pichia pastoris酵母中的分泌表达及表达产物的鉴定

根据人ＩＣＦ－１（Ｈｕｍａｎ Ｉｎｓｕｌｉｎ－ｌｉｋｅ Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒ－１，ｈＩＧＦ－１）的天然基因序列，在尽量保存原基因序列的基础上，将一些密码子换成Ｐｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓ酵母的偏爱密码子，人工合成ｈＩＧＦ－１双链ＤＮＡ．将此合成基因整合人Ｘ－３３酵母的染色体上，用Ｚｅｏｃｉｎ＋平板筛选得到重组菌株．以胞外分泌的方式表达了ｈＩＧＦ－１蛋白，表达产物经聚丙烯酰胺凝胶电泳和ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔ分析，得到该表达产物的相对分子质量约为７２００．

日本血吸虫腺苷酸激酶基因的表达及其重组蛋白免疫反应性的评价

目的 将亚克隆入 pET3 2a( +)质粒的日本血吸虫腺苷酸激酶 (adenylatekinase ,AK )基因进行表达及蛋白纯化 ,并对表达产物的免疫反应性进行评价。 方法 将重组表达质粒 pET3 2a( +) AK转入宿主菌大肠埃希菌BL2 1,异丙基 β D 硫代半乳糖苷 (IPTG)诱导表达后超声裂菌 ,离心 ,取上清进行十二烷基硫酸钠 聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS PAGE) ;将SDS PAGE后的蛋白转移至聚偏二氟乙烯 (PVDF)膜上 ,分别用 6 组氨酸 ( 6 His)抗体、日本血吸虫尾蚴感染6wk的兔血清及紫外照射减毒尾蚴免疫的兔血清为一抗进行蛋白质印迹试验 (Westernblotting) ;用金属Ni螯合物亲和层析树脂 (Ni NTA)层析柱纯化目标蛋白 ;以纯化后的融合蛋白为包被抗原 ,酶联免疫吸附测定 (ELISA)检测正常兔血清和血吸虫感染兔血清。 结果 重组菌用IPTG诱导表达后进行SDS PAGE ,于相对分子质量 (Mr) 40 0 0 0处见一特异表达带 ,与预期表达的融合蛋白大小相符 ;Western印迹分析显示该重组的融合蛋白带有预期的 6 His基团 ,且能与尾蚴感染兔血清及紫外照射减毒尾蚴免疫的兔血清发生特异性反应 ;ELISA结果显示纯化的重组AK蛋白可以特异识别血吸虫感染兔血清。 结论 AK基因在工程菌中以可溶性融合蛋白的形式得到表达 。

血吸虫钙结合蛋白研究进展

摘要 钙结合蛋白在生物机体中广泛存在,种类繁多,在生物体的生理活动及功能调节方面具有重要的作用,是血吸虫寄生于宿主不可或缺的蛋白。已报道的血吸虫钙结合蛋白有EF手家族及非EF手家族蛋白,它们都具有钙结合位点。在所报道的血吸虫钙结合蛋白中,很多都具有较好的免疫反应性,免疫动物后也具有较好保护性,例如Sm8、钙激活中性蛋白酶(calcium-activatedneutral proteinase,calpain)、Sm-p80、Sj22.6、Sm22.6、Sm20.8、SmIrV1、SjIrV1。血吸虫钙结合蛋白有可能是筛选疫苗候选分子的重要领域。