annexin A2体外胚胎着床的功能阻滞研究

目的将通过已有的小鼠体外胚胎着床模型对annexin A2在胚胎着床中的功能进行相应的研究。方法将孕第4天ICR小鼠囊胚与ICR小鼠的内膜组织进行体外共培养。比较子宫内膜经annexin A2抗体预处理以及未经处理之间,各组胚胎黏着率的差异,并在共培养后进行组织学研究。结果小鼠子宫内膜经浓度为1.0μg/ml及0.1μg/ml的annexin A2抗体预处理后小鼠囊胚在其上的黏着率分别为45.6%及53.6%;而抗体浓度为1.0μg/ml的正常IgG对照及未经抗体处理的空白对照组的黏着率分别为55.4%及59.0%。经过1.0μg/ml的annexin A2抗体预处理组与两组对照组之间的黏着率比较,差异无统计学意义。免疫组化实验发现,经过annexin A2抗体预处理后,未见到annexin A2表达明显降低。结论annexin A2在第4天的子宫内膜组织表达明显高于第1天的子宫内膜组织。运用抗体进行阻滞实验时并不能显著降低体外胚胎在子宫内膜组织的黏着率。

GFP小鼠对三维体外着床模型的定位及验证

目的本研究将基于已经建立的三维小鼠体外胚胎着床模型,运用绿色荧光(GFP)小鼠胚胎替代ICR小鼠胚胎,验证三维着床模型的可行性。方法将孕第4天GFP小鼠及ICR小鼠囊胚与ICR小鼠的内膜组织进行体外共培养。观察两组胚胎黏着率的差异。对GFP小鼠囊胚组通过荧光显微镜进行观察,共培养后进行组织学研究。结果 GFP小鼠囊胚及ICR小鼠囊胚与ICR小鼠子宫内膜组织共培养28h后的胚胎黏着率分别为46.6%及54.8%;两组黏着率之间差异无统计学意义(P=0.364)。GFP小鼠囊胚与ICR小鼠子宫内膜组织共培养28h及40h后均可在荧光显微镜下见到胚胎,组织学研究证实GFP小鼠囊胚可以黏着于ICR小鼠子宫内膜。结论三维着床模型确实能够实现不同来源小鼠胚胎的黏附着床。运用GFP小鼠胚胎还发现了胚胎与子宫内膜组织之间存在着信息及分子联系。

小鼠子宫内膜表面蛋白的二维电泳研究

目的运用生物素标记表面蛋白联合二维电泳技术发现小鼠子宫内膜腔上皮表面胚胎着床相关表面蛋白。方法对孕第1天(不接受胚胎阶段)和第4天(接受胚胎阶段)小鼠宫腔注入生物素进行标记,将抽提纯化后的表面蛋白进行二维电泳比较,发现的差异表达点用质谱进行分析确定,并用免疫组化方式进行验证。结果发现20个差异表达超过3倍的蛋白,其中接受胚胎阶段高表达蛋白13个,不接受胚胎阶段高表达蛋白7个。并用质谱发现确定了aminopeptidase N(APN)、annaxinA 2和intergrinβ1等蛋白。通过免疫组织化学方法验证了二维电泳的结果。结论笔者通过生物素标记小鼠子宫内膜腔上皮表面,并联合二维电泳发现了一些在接受胚胎着床阶段和不接受胚胎阶段差异表达的表面蛋白以及一些和胚胎着床相关的重要蛋白。