兔病毒性出血症研究进展及其在国际上的评价

兔病毒性出血症是中国首先报道的一种毁灭性传染病。此病在各种病名下遍及欧洲大部分地区，但均无病原特征的描述。兔出血症病毒（ＲＨＤＶ）是一种新发现的病毒，直径３２～３４ｎｍ，二十面体对称，无囊膜，存在于感染细胞的核和胞浆内。它对酸（ｐＨ３）、热（６０℃）、乙醚（２０％）和ＭｇＣｌ２（１ｍｏｌ／Ｌ）有坚强的抵抗力。在ＣｓＣｌ中的浮密度为１．３６～１．３８ｇ／ｃｍ２；在蔗糖梯度中的沉降系数为１６２Ｓ。它能凝集人红细胞，滴度可达１０×２１８以上。在细胞培养中很难适应。核酸为线状单股ＤＮＡ，末端有发夹结构。用体外合成的双股ＤＮＡ，取其酶切片段插入ＢＳ质粒后，转化ＤＨ大肠杆菌。从重组质粒提取的２个片段（ｐＹＣ－２和ｐＹＣ－９）以同位素或光敏生物素标记后，能与ＲＨＤＶ和一部分细小病毒杂交。在诊断中最有效的血清学试验为ＨＡ－ＨＩ和ＥＬＩＳＡ。灭活疫苗效果确实，已为所有发病各国所证实。根据以上特征，ＲＨＤＶ被认为是一种细小病毒样病毒，但欧洲学者持不同看法。

牛冠状病毒的血清流行病学调查

用血凝抑制试验检测了我国奶牛、黄牛、水牛、牦牛、绵羊、山羊、猪和人共1733份血清中的牛冠状病毒(BCV)抗体,其阳性率分别为80.2%,67%,23.2%,44.3%,5.3%,0%,19%和19.3%。奶牛血清 BCV 抗体有年龄差异,黄牛、水牛、牦牛及人等抗体检出率存在地区性差异。结果表明,BCV 在我国普遍存在,可能为犊牛及成年牛腹泻的重要病原之一。

鸡传染性贫血病毒的分离鉴定

本试验于1992年自东北某地疑似鸡传染性贫血(Chicken Infectious Anemia—CIA)鸡群得到一分离物,该分离物能抵抗70℃5分钟处理,对氯仿不敏感,不凝集鸡、小白鼠、绵羊红细胞,可引起1日龄SPF鸡发病,表现出传染性贫血的特征病变,分离物能被鸡传染性贫血病毒(Chicken Anemia Virus CAV)抗血清中和,能在MDCC-MSB_1细胞上适应增值并与参考毒GiFu-1,CUX-1,TK5803在该细胞培养中产生一致的细胞病变,分离物与参考毒感染的MDCC-MSB_1细胞用间接免疫荧光(IFA)检测均见到核内颗粒荧光,分离物与参考毒GiFu-1细胞培养液负染后电镜观察可见到20nm大小无囊膜,六角形或近圆形的病毒粒子,其形态大小一致,因此可以认为分离物是CAV。

兔出血症病毒细胞培养的初步研究

用自建的乳兔肾细胞株(DJRK)培养兔出血症病毒,第3代后开始出现规律性细胞病变。于接种后24～72小时,可见大量细胞变圆、聚集和脱落,部分细胞拉丝,呈不规则形态。间接免疫荧光检查表明,感染早期呈核内荧光,而后胞浆内亦出现荧光,尤以核周围明显。 用第5代细胞培养物接种8只易感兔,2天后血清中出现2^(?)～2^(12)血凝滴度,持续数天。剖检死兔,其病变与兔出血症典型病变相符,肾病变尤为显著。用第10、16代毒接种易感兔,结果相似。 在第10代感染细胞的超簿切片中,见到大量直径约30～34nm的病毒颗粒,主要分布于胞核周围和胞浆内,核内亦可见散在的病毒颗粒。 将第11代细胞培养物用甲醛灭活后接种易感兔,2周后HI效价升高达2^(10),攻毒全部获得保护,证明细胞培养病毒具有良好的免疫原性。

兔出血症病毒基因组的克隆及克隆基因的酶切图谱

本试验用甘油-酒石酸钾密度梯度离心纯化了兔出血症病毒(Rabbit hemorrhagic disease virus,RHDV),所得病毒制剂实心颗粒占90％,没有宿主核酸污染。在常规SDS-蛋白酶K法的基础上,建立了一种耗时短、重复性高的RHDV核酸抽提程序。按照细小病毒基因组的特性,在体外合成了RHDV dsDNA,证明兔出血症病毒基因组是具有3′端发夹结构的ssDNA。以核酸酶S1修饰RHDV dsDNA,将其克隆入BS质粒载体,转化大肠杆菌DH5株。经筛选鉴定,共得RHDV DNA克隆23个,其中最大者(pYC-2)为4.6kb。选用18种限制性内切酶作酶谱分析,结果表明,12种酶在pYC-2克隆基因上不存在切点;以双酶法,用Cla Ⅰ、HincⅡ,Pvu Ⅰ、Bgl Ⅱ和Hpa Ⅰ绘制出pYC-2DNA的酶切图谱。

兔出血症病毒单克隆抗体的抗原识别位点分析

通过ＥＬＩＳＡ迭加试验对６株抗兔出血症病毒（ＲＨＤＶ）单克隆抗体（ＭｃＡｂ）的抗原表位进行了分析。抗体反应增值结果表明，６株单抗分别针对３类不同的抗原决定簇。ＣＧ４－１、ＣＨ３－１和ＡＡ８－１针对病毒结构多肽上的同一决定簇，ＣＦ２－１和ＲＭ－１７针对另一决定簇，而ＲＭ－１４针对第３种决定簇；其识别表位可能与ＡＡ８－１非常接近。

禽呼肠孤病毒变异株的分离鉴定

从病鸡肝分离到一株病毒，经电镜检查、理化特性分析、核酸电泳和中和试验等证明它为禽呼肠孤病毒（ＡＲＶ）。该病毒只在鸡胚肝细胞（ＣＥＬｉ）上产生细胞病变（ＣＰＥ），在鸡胚成纤维细胞（ＣＥＦ）和Ｖ＿（ｅｒｏ）细胞上不增殖，它对热无敏感，Ｍｇ￣（２＋）不能增强其对热的稳定性，其基因组中的４个小节段的迁移率与ＡＲＶＦＤＯ和Ｓ＿（１１３３）株明显不同，表明它是不同于ＦＤＯ和Ｓ＿（１１３３）的ＡＲＶ变异株。

应用单克隆抗体夹心酶联免疫吸附试验检测兔出血症病毒

应用建立的单克隆抗体夹心酶联兔疫吸附试验（ＭｃＡｂ－ＥＬＩＳＡ），检测了人工感染兔出血症病毒（ＲＨＤＶ）ＤＪＲＫ细胞毒、肝毒的兔以及自然感染ＲＨＤＶ的兔的组织样品。结果表明，感染死亡兔的肝、脾、肾、骨髓样品病毒抗原的检出率为１００％，淋巴结和肌肉的检出率分别为９７．５％和７９．５％。ＭｃＡｂ－ＥＬＩＳＡ能检出肌肉中血凝试验不能检出的ＲＨＤＶ抗原。此外，还用ＭｃＡｂ－ＥＬＩＳＡ检测了肝毒人工感染兔血中ＲＨＤＶ的动态，并对１０份兔出血症脏器灭活苗的效价作了滴定。

兔出血症病毒结构多肽的研究

纯化ＲＨＤＶ 经ＳＤＳＰＡＧＥ、硝酸银染色显示８ 条多肽，分子量分别为８５．１，７１．２，６４．５，６１．４，５７．３，５４．０，２９．２，２８．１ ｋＤ，免疫转印结果确认其中的６ 条多肽为病毒结构多肽，分子量分别为６４．５，６１．４，５７．３，５４．０，２９．２，２８．１ ｋＤ，且其相对百分含量分别为６５．８７，３．１７，３．９７，１０．３２，９．５２，７．１４％ ，表明分子量为６４．５ ｋＤ的多肽为病毒主要结构多肽。

用单克隆抗体反向间接血凝检测兔出血症病毒

将抗兔出血症病毒(RHDV)的 AA8-1和 CG4-1两株单抗(McAb)分别致敏双醛化人红细胞,混合后建立单抗反向间接血凝(McAb-RPHA)方法。其敏感性较常规血凝试验(HA)高256倍,最小检出量为0.214 ng/ml。此法对感染兔的心、肝、脾、肺、骨髓、血液等检出率均为100%;脊髓、淋巴结、肌肉等组织的检出率分别为62.5%,58.3%和37.5%。HA 的检出率除肝为100%外,其余均低于 McAb—RPHA,不能检出脊髓、淋巴结和肌肉样品中的病毒抗原。

ELISA双抗体夹心法测定兔出血症病毒抗原

自刘胜江等报道兔出血症病毒(RHDV)以来,国内许多学者对该病毒的各种生物学特性进行了广泛研究,并取得了显著进展。但该病毒在各脏器组织中的动态分布尚未见报道。为此,我们应用酶联免疫吸附试验(ELISA)双抗体夹心法对其进行了研究。

实验兔接种兔病毒性出血症病毒疫苗后的免疫应答

对接种了兔病毒性出血症疫苗并经攻毒试验的实验兔,测定了某些免疫指标。注苗后7天血凝抑制抗体即达到有效保护水平,能抵御兔病毒性出血症病毒(RHDV)强毒的攻击,但淋巴细胞转化刺激指数至第17天才升高.特异性转移因子对兔基本无保护作用。这些表明,本病的免疫是以体液免疫为主。聚肌胞可迅速诱导兔体产生干扰素,并在高峰期内有效抵抗RHDV感染。疫苗诱生干扰素的能力与聚肌胞相当,只是高峰期稍迟,提示干扰素参与RHDV疫苗的免疫保护机理,提供早期保护.

兔出血症病毒主要结构多肽的氨基酸分析

兔出血症病毒主要结构多肽的氨基酸分析王恒安，杜念兴，徐为燕（南京农业大学，南京２１００９５）关键词兔出血症病毒，结构多肽，氨基酸分析有关兔出血症病毒（ＲＨＤＶ）结构多肽的报道很多，有认为只有１条，有报道４条的，也有报道多达６条的。但其主要结构多肽为分...

牛冠状病毒结构多肽分析

牛冠状病毒(bovine coronavirus,BCV)是已知新生犊牛腹泻的主要病原之一,同时也感染成年牛、猪、马及多种家畜和人,感染相当普遍。为了深入了解 BCV 的生物学特性,国外学者对其病毒结构多肽进行了研究,而国内迄今尚未见此类报道。本实验则对 BCV MUC-270株进行了结构多肽分析,建立了非放射性标记 BCV 多肽的研究方法,为今后进一步研究打下基础。

牛冠状病毒单克隆抗体的研究

以纯化的牛冠状病毒(BCv)免疫 BALB/c 小鼠,取其脾脏细胞与小鼠骨髓瘤细胞 SP2/0融合,用间接 ELISA 筛选,获得了4株分泌 BCV 特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞:C_(12)、C_(31)、C_(42)和C_(54).它们系针对 BCV 不同表面抗原决定簇的.用 C_(12)和 C_(31)两株细胞制备的腹水混合包被聚苯乙烯微孔板,建立了以生物素标记的兔抗 BCV IgG 和酶标亲和素介导的 BAS—ELISA,并对 BCV 标准毒株和临床犊牛腹泻粪样作了检测.

兔出血症病毒主要结构多肽的纯化及免疫保护性试验

人工感染RHDV -NJ株病死兔肝经 - 5 0℃反复冻融 ,氯仿处理 ,PEG沉淀 ,差速离心 ,Sepharose - 4B柱层析得纯化病毒 ,纯化RHDV经SDS -PAGE、CuCl2 负染色后 ,切取主要结构多肽VP1(6 4.5KD)凝胶带 ,除去CuCl2 和SDS获得VP1,高效液相色谱鉴定只有一个蛋白峰 ,Western -Blotting ,HA和HI结果显示纯化VP1具有良好的抗原表位稳定性。无母源抗体的 3月龄兔 1 2只 ,平均分为 3组 ,阳性对照组每只兔接种 1mL肝组织灭活苗 ,试验组每只兔接种 1mL ,0 .5mg/mL的VP1溶液 ,空白对照组每只兔接种 1mL正常兔肝悬液 ,接种后1 0d攻毒 ,每只兔攻击 1 .5mL1∶1 0稀释的RHDV -NJ株肝毒悬液 ,攻毒保护性试验结果显示阳性对照组和试验组的攻毒保护率均为 1 0 0 % ,空白对照组的 4只兔攻毒后 48h内全部死亡 ,证明VP1为RHDV的保护性抗原。

介绍新的动物病毒分类

国际病毒分类委员会(ICTV)根据仙台(1984)、埃德蒙特(1987)和柏林(1990)召开的第6、7、8届国际病毒学大会的有关材料,1991年下半年发表了第5次报告,由Springer出版社以Archieves of Virology增刊的形式发表。作为病毒分类的权威文献。

应用单克隆抗体ELISA阻断试验 快速检测兔出血症病毒抗体的研究

利用抗兔出血症病毒(RHDV)的特异性单克隆抗体(McAb)建立了ELISA阻断试验用以检测血清抗体,并与血凝抑制(HI)和琼脂扩散试验(ID)进行了比较。结果ELISA阻断试验敏感性超过HI,更远胜于ID,具有灵敏、特异、准确等优点,适于大批血清样品的快速检测。

小鹅瘟病毒反向间接血球凝集试验的初步报告

引言小鹅瘟是一种细小脱氧核糖核酸病毒引起的传染病,流行甚广,有十多个国家均有发生。1956年我国方定一等首先报导本病,近年来在江苏、浙江和广东等省均有爆发,使养鹅者遭受巨大经济损失。小鹅瘟的诊断迄今为止主要依赖于流行病学观察和鹅胚接种,前者不能直接证明,后者费时较久。Kontrilnavichus(1976)

兔出血症病毒核酸的电镜图

病毒性出血症病兔肝悬液离心去杂后其上清用聚乙二醇浓缩,又经正丁醇-异戊醇除去杂蛋白,然后以差速离心和蔗糖梯度离心,提取兔出血症病毒(RHDV)。提纯的病毒用核酸酶降解污染的细胞核酸后,加入8mol/L尿素,使核酸从病毒粒子中释放出来,经水相法展开,附于有碳膜的铜网上。检样经醋酸铀染色和铂旋转喷涂投影,于透射电镜下观察。RHDV核酸呈线状,平均长度为1.92μm。经公式推算出分子量为2.30×10~6道尔顿(Dalton)。