妊娠期糖尿病患者孕期铁代谢水平与IRS-2基因单核苷酸多态性的关系

目的:探讨妊娠期糖尿病(GDM)患者IRS-2基因的单核苷酸多态性(SNP)与血清铁代谢水平之间的关系。方法:选取2018年1月至2023年3月在温州市中心医院接受治疗的50例GDM患者作为观察组,50例正常孕妇作为对照组。2组均在孕期12周进行首次产前检查,GDM组在孕期24~28周被确诊。检测空腹血糖、胰岛素、C肽、血清铁、转铁蛋白、转铁蛋白各项指标及IRS-2基因序列。结果:GDM组的糖代谢指标(空腹血糖、胰岛素、C肽、胰岛素抵抗指数)及铁代谢指标(血清铁、转铁蛋白)均明显高于正常孕妇组(P<0.05)。在IRS-2基因1057位点,两组共检出3种遗传型,包括纯合野生(GG)、杂合子(GD)和纯合突变体(DD)。相比于GG遗传型个体,GD遗传型(OR=4.19,95%CI=1.63~10.76,P=0.003)与DD遗传型(OR=10.67,95%CI=2.96~38.40,P<0.001)个体的GDM患病风险均显著增高。同时,GD和DD个体的铁代谢水平明显高于GG个体(P<0.05)。结论:妊娠期人群中,IRS-2基因1057位点的SNP与GDM的发生及血清铁代谢异常蓄积具有显著相关性。

产前无创基因检测在胎儿性染色体非整倍体疾病筛查中的临床价值

目的:探讨产前无创基因检测(NIPT)在胎儿性染色体非整倍体疾病(SCAs)筛查中的应用价值。方法:选取2018年1月至2019年12月在温州市中心医院行NIPT普通三项或NIPT PLUS的单活胎孕妇27116例为研究对象,其中NIPT普通三项有15218例,NIPT PLUS有11948例。利用高通量基因组测序平台及生物信息分析技术,对孕妇外周血中胎儿游离DNA进行深度测序,获取胎儿染色体信息。对检测结果高风险者进行遗传咨询,知情同意后行羊膜腔穿刺及羊水染色体核型分析。结果:NIPT普通三项共检测出SCAs 125例,阳性率为0.82%(125/15218),70例经羊水产前诊断证实阳性17例,阳性预测值24.29%(17/70)。NIPT PLUS共检测出SCAs 97例,阳性率为0.81%(97/11948),70例经羊水产前诊断证实阳性29例,阳性预测值41.43%(29/70)。结论:NIPT可作为胎儿SCAs的筛查方法,具有较高的临床应用价值。与NIPT普通三项相比,NIPT PLUS显著提高胎儿SCAs的检测效能。对于NIPT或NIPT PLUS结果高风险者必须进行侵入性产前诊断,对于结果低风险者应警惕漏诊可能。

让小学信息技术的课堂更有效

在小学信息技术课程教学过程中,很多情况下,教师虽然将知识要点全部教授给学生了,但是学生们的接受效果却总是不够理想。对于一些较为复杂的操作流程,学生很容易分散注意力,学习兴趣也得不到有效激发,课堂教学陷入被动。其实,提升课堂实效并不是难事,巧妙优化提问环节,就可以很大程度地提高课堂教学质量。

《一地鸡毛》与刘震云式威权诅咒

对威权的疯狂诅咒是刘震云小说脉络的重点,这种诅咒使得刘震云小说的所有人物都有着强烈的恶谑性,而刘震云看似批判却惟一认同的世界则来自一个并不完美的农村世界。刘震云的这种思想形成,缘起于《一地鸡毛》。于是本文以《一地鸡毛》为例,以"立人"思想为途径,试图分析刘震云威权批判思想的养成,批判刘震云小说虚无化、空洞化,调侃化的趋势。

6个假肥大型肌营养不良家系的产前诊断

目的对6个假肥大型肌营养不良家系进行基因型分析,并为其家庭提供产前分子诊断评估再生育风险。方法联合多重连接依赖性探针扩增(MLPA)检测和单体型连锁分析分别对6个家系行杜氏进行性肌营养不良(DMD)的DMD基因诊断。所有产前诊断标本均通过STR位点检测排除母血污染。结果 MLPA检测结果显示,6例先证者中DMD基因缺失型5例,重复型1例;2例先证者母亲未携带DMD基因变异,其中1例疑似生殖腺嵌合;产前诊断患胎3例,携带者1例,正常女胎2例。单体型连锁分析结果显示1例与MLPA检测结果不一致,1例发生基因内重组,其余4例均一致。结论 MLPA技术联合单体型连锁分析可快速准确检出胎儿DMD基因型,疑似新发突变家系再生育时孕妇仍有产前诊断必要性。

MEKK2在类风湿关节炎患者中的表达及临床意义

研究丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)信号通路中有丝分裂原活化蛋白激酶激酶激酶2(mitogen-activated protein kinase kinase kinase 2,MEKK2)分子在类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)患者中的表达及临床意义。Western blotting和Real-time PCR分别检测20例RA患者经艾拉莫德治疗前后,外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)中MEKK2蛋白和基因的表达水平变化,并与健康对照者比较其表达情况。结果显示:与健康对照者相比,RA患者PBMC中MEKK2的蛋白及基因水平降低,经艾拉莫德治疗后临床症状明显改善,且MEKK2的表达水平有所升高。该研究提示MEKK2的表达对RA发病过程起到重要作用,缓解病情抗风湿药物艾拉莫德有可能影响到MEKK2通路而发挥其临床疗效。

miRNA-467b在EAE中对炎性T细胞浸润的影响

为探讨miRNA-467b在实验性自身免疫性脑脊髓膜炎(experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE)中对炎性T细胞浸润的影响,我们首先采用real-time PCR及FACS方法检测EAE小鼠脾脏单个核细胞中CXCR3、CCR5、CCR2、CCR6的mRNA和蛋白表达水平,并在MOG反应性T细胞中过表达miRNA-467b,FACS方法检测趋化因子受体CXCR3、CCR6的表达变化,并进一步通过Boyden小室(transwell实验)的方法,体外观察miRNA-467b对细胞迁移的影响。结果发现,EAE小鼠脾脏中CCR5、CCR2、CCR6的转录及蛋白表达水平显著上升,在MOG特异性的T细胞中过表达miRNA-467b后,可降低Th1表面趋化因子受体的表达,减少Th1向transwell板下室中的迁移,提示miRNA-467b可以通过影响细胞的迁移进而调节EAE的疾病进程。

固有淋巴细胞研究进展

固有淋巴细胞(innate lymphoid cells,ILC)是一群来源于共同淋巴前体(common lymphoid progenitor,CLP),具有固有类细胞特征的淋巴细胞。ILC由多种细胞亚群构成,主要包含NK细胞、Th2ILC和RORγt+ILC,参与组织构建、修复和再生,维持组织稳态,参与固有免疫应答,抗致病菌、寄生虫感染。本文就各类ILC的表型、功能及其与疾病的关系作一综述。

艾拉莫德对类风湿关节炎临床疗效及T辅助细胞亚群调节作用的研究

目的研究艾拉莫德对RA患者的临床疗效及其在治疗RA中的免疫调节作用机制。方法应用临床随机对照试验探究其临床疗效，流式细胞术检测治疗前后患者外周血辅助性T细胞（Th）1、Th17和调节性T细胞比例变化，实时定量PCR方法检测相关转录因子的表达水平，探讨其免疫调节作用，采用t检验、x2检验、秩和检验对数据进行统计学分析。结果经艾拉莫德治疗24周后，患者临床症状改善明显，ACR20、ACR50、ACR70达标率分别为50％、20％、15％，远高于对照组25％、12％、6％，差异具有统计学意义（z=-2．216，P=0．027）；外周血中Th1、Th17细胞亚群的比例有所下降[Th1：0周（26．5±8．0）％，24周（14．2±7.3）％，P〈0．01；Th17：0周（1．7±0．7）％，24周（1．3±0．4）％，P〈0．05]，调节性T细胞亚群比例有所上升[0周（6．8±1．6）％，24周（8．9±2．9）％，P〈0．05]，它们相应的转录因子也呈相同趋势。结论艾拉莫德能够有效改善RA患者的临床病情，且可通过降低T细胞亚群中Th1、Th17比例，升高调节性T细胞比例，并下调Th17细胞的关键转录因子孤儿核受体（RORC）的表达而发挥作用。

强直性脊柱炎患者外周血T细胞亚群及相关免疫分子的变化

为探究强直性脊柱炎(ankylosing spondylitis,AS)的发病机制和免疫细胞在病情发展中的功能和重要性,我们设计本实验以比较强直性脊柱炎患者与正常人外周血中免疫细胞格局的变化。实验以42例AS患者和42例健康者为研究对象,检测外周血T细胞以及相应的细胞因子和转录因子。实验采用流式细胞术检测T细胞亚群的比例、通过ELISA方法检测细胞因子并使用Q-PCR检测转录因子的表达。实验发现,与健康人相比,AS患者外周血T细胞中CD4^+细胞占优势,并且effect T细胞与na?ve T细胞的比值升高;对CD4^+T细胞亚群进一步的检测结果显示Th1与Tfh的比例显著增高,Treg细胞的比例较正常人稍高。在对细胞因子的检测中,我们发现IFN-γ、TGF-β显著下降,但IL-21有上升趋势;对转录因子的检测显示,Bcl-6/Foxp3、RORγt/Foxp3和T-bet/Foxp3值均升高。上述结果提示强直性脊柱炎患者外周血中T细胞亚群的格局发生了变化,其相关免疫分子也呈现免疫活化状态。

一例Shwachman-Diamond综合征的产前诊断

目的本研究对SBDS基因(Shwachman-Bodian-Diamond syndrome gene)c.183184delTAinsCT和c.258+2T>C复合杂合变异导致的Shwachman-Diamond综合征(Shwachman-Diamond syndrome,SDS)家系的1位中期妊娠妇女行产前分子诊断,从而预防SDS患儿的出生。方法孕妇于18孕周在B超引导下行羊膜腔穿刺,抽取羊水10mL,提取羊水细胞基因组DNA。选用17个多态性STR位点,包括D13S317、D7S820、D18S51等,排除母源污染。在此基础上,对SBDS基因2-4号外显子进行扩增,纯化后的PCR产物基因SBDS基因2号外显子正、反向测序。结果该胎儿SBDS基因2号外显子测序结果显示胎儿只携带了与母亲相同的SBDS基因变异位点,未携带与父亲相同的SBDS基因变异位点。结论对SBDS基因而言,该家系的待测胎儿为SBDS基因c.183184delTAinsCT杂合变异携带者。

TY-51469对疲劳运动的小鼠巨噬细胞格局调节作用的实验性研究

本实验研究TY-51469对疲劳运动引起小鼠巨噬细胞格局变化的调节作用。选用健康雄性（6~8）周龄C57BL/6小鼠,分为安静对照组、运动组、运动＋TY组。运动组及运动＋TY组进行2周平板跑步运动,前3d为适应性运动,以后每日逐渐增加运动量,运动至小鼠普遍出现疲劳征象。第5d起运动＋TY组每日运动后按15mg/kg腹腔注射TY-51469,安静对照组及运动组第5d起每天腹腔注射等体积PBS,一共注射8d。运动结束后取脾脏制作单个核细胞悬液标记巨噬细胞后进行流式细胞检测,并提取巨噬细胞基因测定IRF5和IRF4mRNA表达量,观察并分析疲劳运动对脾脏M1、M2型巨噬细胞数量及比例的影响,以及TY-51469对疲劳运动引起巨噬细胞格局变化的调节作用。实验结果显示,疲劳运动可导致小鼠脾脏巨噬细胞M1/M2比值上升,TY-51469通过恢复M1/M2比例起到对巨噬细胞不同亚群的调节作用,使巨噬细胞格局恢复正常。

PGE_2在CIA中的表达及其与Tfh的相关性分析

研究前列腺素E_2(prostaglandin E_2,PGE_2)在胶原诱导性关节炎(collagen induced arthritis,CIA)小鼠体内的表达,并分析其与滤泡辅助性T细胞(follicular helper T cell,Tfh)之间的相关性。结果显示,与对照组相比,CIA小鼠血清前列腺素E代谢物(prostaglandin E metabolite,PGEM)浓度显著升高,小鼠脾脏和淋巴结中CD4^+CXCR5^+ICOS^+Tfh的比例、CD4^+Bcl-6^+Tfh的比例、CD4^+IL-21^+T细胞的比例均明显增高,且PGEM与上述细胞比例均呈正相关。该研究表明,CIA中PGE_2的表达与Tfh的比例存在正相关性。

温州地区14个脊髓性肌萎缩症家系临床表型与基因分析及产前诊断

目的对温州地区14个脊髓性肌萎缩症患者进行临床表型分析,并为其家庭提供产前分子诊断评估再生育风险。方法运用多重连接依赖性探针扩增技术(MLPA)技术对14个家系行生存运动神经元基因(survival motor neuron,SMN)及其他SMA致病相关基因拷贝数检测,并结合限制性酶切片段长度多态性聚合酶链式反应(PCR-RFLP)和STR位点检测对该14个家系16例胎儿行产前诊断。结果 14例家系中,先证者Ⅰ型8例,Ⅱ型5例,Ⅲ型1例,MLPA结果显示,6例胎儿正常,7例为携带者,3例为患者。PCR-RFLP检测结果与MLPA检测结果一致。STR位点检测结果显示,有两例绒毛样本存在轻微母源DNA污染,其余标本均未受到母源DNA的污染。结论采用MLPA技术,联合PCR-RFLP法及STR位点检测法对SMA家系行产前分子诊断,具有快速准确等优点,可有效避免SMA患儿出生。

一例Krabbe病患者家系的产前诊断和基因突变分析

目的探讨一例Krabbe病患者的遗传病因,并对家系成员进行基因突变分析及产前诊断。方法应用全外显子测序技术对Krabbe病患者进行致病突变筛查,结合临床表型,确定候选基因的致病位点,Sanger测序验证夫妻双方GALC基因,孕妇进行绒毛穿刺和羊水穿刺,对GALC基因测序并进行产前诊断。结果全外显子测序结果显示家系中Krabbe病患者存在GALC基因c.599C>A(p.Ser200*)和c.461C>A(p.Pro154His)位点复合杂合变异,其父亲为c.461C>A(p.Pro154His)位点杂合变异携带者,母亲为c.599C>A(p.Ser200*)杂合变异携带者。绒毛和羊水检测GALC基因为c.461C>A(p.Pro154His)位点杂合变异。结论 GALC基因c.599C>A(p.Ser200*)和c.461C>A(p.Pro154His)位点复合杂合变异是该家系中Krabbe病患者的发病原因,胎儿绒毛和羊水检测结果与先证者不同,为该家系遗传咨询和产前诊断提供有力证据,有效预防出生缺陷。

两个Coffin-Siris综合征家系的ARID1B基因变异分析

目的通过对两个Coffin-Siris综合征家系先证者的临床表征及基因变异分析,揭示其可能的遗传发病机制,为家系的遗传咨询提供依据。方法应用全外显子组测序技术对两例先证者进行致病原因筛查,结合临床表型确定可能致病的候选基因,用Sanger测序法对先证者及其家系成员进行变异验证。结果WES检测结果显示家系1先证者ARID1B基因存在c.5467delG(p.Gly1823fs)杂合变异。家系2先证者检出ARID1B基因c.5584delA(p.Lys1862fs)杂合变异。Sanger测序结果表明两家系先证者父母ARID1B基因均为野生型,经检索人类变异数据库,两变异均为未报道过的新变异。根据美国医学遗传学与基因组学学会指南,ARID1B基因的c.5467delG和c.5584delA变异均为致病变异(PVS1+PS2+PM2)。结论ARID1B基因c.5467delG(p.Gly1823fs)及c.5584delA(p.Lys1862fs)可能分别为两家系的致病原因,基因检测结果为家系的遗传咨询提供了依据。

2个脆性X综合征家系的产前基因诊断与遗传咨询

目的对疑有脆性X综合征(FXS)家族史的孕妇及其家系成员进行脆性X智力障碍1(FMR1)基因诊断,并对其当前所怀胎儿进行产前诊断及遗传咨询。方法对温州市中心医院产科遗传咨询门诊就诊的2例孕妇及其儿子抽取静脉血1~2 mL,孕妇采集羊水20 mL,提取DNA,采用聚合酶链反应(PCR)检测CGG重复次数,MS-MLPA试剂盒检测男性FMR1基因的CpG岛的甲基化水平。结果孕妇1和孕妇2均有一条X染色体CGG重复>200次,其子的一条X染色体FMR1 CGG重复>200次。孕妇1行羊膜腔穿刺后羊水检测结果显示FMR1基因CGG全突变,经遗传咨询后引产。孕妇2的胎儿不存在FXS高风险,继续妊娠。结论 PCR联合MS-MLPA技术可以成为FXS的一种产前分子诊断手段,避免患儿出生。

智力障碍人群QRPFR基因变异位点人群分布频率研究

目的QRFPR可调控人体趋化反应、神经传递等重要生理过程,研究智力障碍人群QRFPR基因SNP变异位点的分布频率,首次将智力障碍与QRPFR进行关联。方法对87例全外显子测序阴性的智力障碍患者进行QRFPR基因分析,通过生物信息学分析,结合dbSNP、千人基因组、ExAC、gnomAD数据库分析变异频率;应用SIFT和PolyPhen-2软件对QRPFR基因的变异位点进行致病预测;同时采用课题组开发的生物信息学软件SnpExplore对QRPFR基因变异位点进行注释分析,初步确定QRPFR基因与智力障碍的关联性。结果87例智力障碍患者QRPFR基因分析,共发现8种SNP位点c.1031T>C(p.L344S)、c.1111C>T(p.R371W)、c.157G>A(p.V53M)、c.181T>G(p.F61V)、c.202T>C(p.Y68H)、c.812C>T(p.A271V)、c.1276C>T(p.P426S)、c.1142A>G(p.N381S)。c.1111C>T(p.R371W)、c.202T>C(p.Y68H)、c.1142A>G(p.N381S)、c.157G>A(p.V53M)、c.812C>T(p.A271V)、c.1276C>T(p.P426S)等6种变异位点在正常人群中频率小于0.05,为低频变异位点。生物信息学及临床关联性分析,初步确定c.1111C>T(p.R371W)、c.202T>C(p.Y68H)为智力障碍人群的有害变异位点,1111C>T(p.R371W)(rs79300690)可能为智力障碍人群的风险SNP位点。结论QRPFR基因c.1111C>T(p.R371W)和c.202T>C(p.Y68H)变异位点可能为功能性SNP位点,初步将QRPFR基因与智力障碍关联,为智力障碍人群QRFPR基因筛查提供了一定的理论依据。

一组非热点致聋基因突变耳聋患者的遗传学分析

目的探讨4个不常见致聋基因热点突变的非综合征型耳聋家系的分子发病机制。方法收集4个耳聋家系先证者及其家系成员的临床资料和外周血样本,应用高通量测序技术对各家系先证者行全外显子组测序,并利用Sanger测序对先证者及其父母行突变位点验证;生物信息学软件对检出的新突变进行致病性预测。结果全外显子组测序结果显示家系1先证者为TMC1基因c.2050G>C纯合突变,家系2先证者为TMC1基因c.2050G>C/c.625C>G复合杂合突变,家系3先证者未明确致病原因,家系4先证者检出GJB2基因c.109G>A纯合突变。上述突变位点中,TMC1基因c.625C>G为新突变位点,生物信息学软件分析结果提示其为致病性突变。结论明确了其中3个家系的致聋原因,共检出TMC1基因2种错义突变和1种GJB2基因错义突变,为该3个家系的遗传咨询提供了理论基础。